技术特征：
1.一种固定化转氨酶，其特征在于，所述固定化转氨酶为转氨酶固定于固定化载体上所得；所述转氨酶来源于假单胞菌并进行基因改造，其氨基酸序列为seq id no：1所示；所述固定化载体为树脂经多聚羟基化合物或多聚氨基化合物修饰后醛基化所得。2.根据权利要求1所述的固定化转氨酶，其特征在于，所述树脂为醛基树脂、环氧树脂或氨基树脂。3.根据权利要求1所述的固定化转氨酶，其特征在于，所述多聚羟基化合物包括聚丙三醇或聚乙烯醇；所述多聚氨基化合物包括聚乙烯亚胺或聚氨基多肽。4.根据权利要求1所述的固定化转氨酶，其特征在于，所述固定化载体为树脂经多聚羟基化合物或多聚氨基化合物修饰后醛基化所得，具体包括如下步骤：1质量份的树脂和2-6体积份的0.2-5wt％多聚羟基化合物水溶液于20-40℃、ph9-10、80-250rpm条件下反应1-32h进行羟基化，得到羟基化树脂；然后羟基化树脂、2-8体积份的0.2-3wt％次氯酸钠水溶液和2-8体积份的0.2-3wt％溴化钾水溶液于20-40℃、80-250rpm条件下反应1-24h氧化成醛基化树脂；或1质量份的树脂和2-6体积份的0.2-5wt％多聚氨基化合物水溶液于20-40℃、80-250rpm条件下反应1-32h进行氨基化，得到氨基化树脂；然后氨基化树脂和2-8体积份的0.2-5wt％戊二醛水溶液于20-40℃、ph6-9、80-250rpm条件下反应1-24h转化成醛基化树脂；其中，质量份以g为计量单位时，体积份以ml为计量单位。5.根据权利要求1所述的固定化转氨酶，其特征在于，所述固定化转氨酶为转氨酶固定于固定化载体上所得，具体包括如下步骤：1质量份的固定化载体和1-8体积份的转氨酶破碎上清液在20-40℃、ph6-9、80-250rpm条件下固定化1-24h，之后用去离子水清洗，得到所述固定化转氨酶；其中，质量份以g为计量单位时，体积份以ml为计量单位。6.根据权利要求5所述的固定化转氨酶，其特征在于，所述转氨酶破碎上清液是od
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为0.6-0.8的转氨酶重组大肠杆菌培养物经诱导表达培养后破碎、离心得到的上清液。7.权利要求1-6任一权利要求所述的固定化转氨酶在西他列汀制备中的应用。8.根据权利要求7所述的应用，其特征在于，具体包括如下步骤：以固定化转氨酶为生物酶催化剂，以西他列汀前体酮为底物，以异丙胺为共同底物，以甲醇和二甲亚砜为助溶剂，以磷酸吡哆醛作为辅酶，以ph8-9的异丙胺+异丙胺盐酸盐为缓冲液，以上反应体系在25-50℃、70-200rpm条件下反应16-48h，反应时间包括滴加西他列汀前体酮的时间，反应结束后对反应液进行分离纯化得到西他列汀。9.根据权利要求8所述的应用，其特征在于，所述反应体系中固定化转氨酶用量为50-200g/l，西他列汀前体酮终浓度为10-90g/l，甲醇和二甲亚砜终浓度为10-35v/v％，甲醇和二甲亚砜体积比1:5-4:1，磷酸吡哆醛终浓度为0.2-2.5g/l。10.根据权利要求8所述的应用，其特征在于，反应结束后对反应液进行分离纯化得到西他列汀，具体包括如下步骤：将反应液先用盐酸溶液调节ph到2，加入醋酸异丙酯分离未反应原料，水相用氢氧化钠溶液调节ph到9，再加入醋酸异丙酯将产品萃取至有机相，真空浓缩。
技术总结
本发明公开一种固定化转氨酶，其为转氨酶固定于固定化载体上所得；所述转氨酶来源于假单胞菌并进行基因改造，其氨基酸序列为SEQ ID NO：1所示；所述固定化载体为树脂经多聚羟基化合物或多聚氨基化合物修饰后醛基化所得。本发明还公开了其在西他列汀制备中的应用。本发明以固定化转氨酶作为生物酶催化剂，将针对底物优化的源于假单胞菌基因改造转氨酶固定在经特定修饰的树脂上，避免了全细胞催化分离纯化困难，收率偏低，发酵成本高，发酵三废排放高等缺点，制备西他列汀最高转化率>97％，手性纯度>99.5％，并且固定化转氨酶循环使用次数达到80次以上而没有明显的酶活降低，高手性选择性仍保持不变，有着巨大工业化潜力。有着巨大工业化潜力。有着巨大工业化潜力。
技术研发人员：王喆明
受保护的技术使用者：杭州濡湜生物科技有限公司
技术研发日：2023.01.16
技术公布日：2023/3/16