一种血细胞病原微生物去宿主核酸提取试剂盒和方法与流程

文档序号:34065136发布日期:2023-05-06 14:44阅读:来源:国知局

技术特征:

1.一种血细胞病原微生物去宿主核酸提取试剂盒,其特征在于,所述试剂盒包括细胞裂解液、dna酶、dna酶缓冲液、蛋白酶k、溶菌酶、溶壁酶、玻璃珠和提取裂解液;

2.根据权利要求1所述的一种血细胞病原微生物去宿主核酸提取试剂盒,其特征在于,细胞裂解液中皂苷的质量百分比浓度为1.6%,β辛基硫代葡萄糖苷的质量百分比浓度为0.4%。

3.根据权利要求1所述的一种血细胞病原微生物去宿主核酸提取试剂盒,其特征在于,dna酶缓冲液的ph值为6-9,提取裂解液的ph值为6-7。

4.一种血细胞病原微生物去宿主核酸提取方法,其特征在于,所述方法包括如下步骤:

5.根据权利要求4所述的一种血细胞病原微生物去宿主核酸提取方法,其特征在于,所述样本类型为血细胞。

6.根据权利要求4所述的一种血细胞病原微生物去宿主核酸提取方法,其特征在于,所述细胞裂解液为皂苷和β辛基硫代葡萄糖苷溶液;所述dna酶为ultra nuclease;所述dna酶缓冲液包括mgcl2、tris-hcl、bsa;所述提取裂解液包括tris-hcl、氯化钠、盐酸胍和sds。

7.根据权利要求4所述的一种血细胞病原微生物去宿主核酸提取方法,其特征在于,所述皂苷的终浓度为0.8%,β辛基硫代葡萄糖苷的终浓度为0.2%。

8.根据权利要求4所述的一种血细胞病原微生物去宿主核酸提取方法,其特征在于,所述ultra nuclease的终浓度为2-5u/μl,dna酶缓冲液中各成分的终浓度分别为mgcl2 1-10mm,tris-hcl 10-50mm,bsa0.1-0.5mg/ml。

9.根据权利要求4所述的一种血细胞病原微生物去宿主核酸提取方法,其特征在于,所述溶菌酶的终浓度为5-20mg/ml,溶壁酶的终浓度为0.1-0.5u/μl。

10.根据权利要求4所述的一种血细胞病原微生物去宿主核酸提取方法,其特征在于,所述提取裂解液中各成分的终浓度分别为tris-hcl 40-100mm、氯化钠100-500mm、盐酸胍2-4m和sds 0.5%-2%质量百分比。


技术总结
本发明涉及生物技术领域,具体涉及一种血细胞病原微生物去宿主核酸提取试剂盒和方法,包括细胞裂解液、DNA酶、DNA酶缓冲液、蛋白酶K、溶菌酶、溶壁酶、玻璃珠和提取裂解液;细胞裂解液为皂苷和β辛基硫代葡萄糖苷溶液;所述DNA酶为Ultra Nuclease;DNA酶缓冲液包括MgCl<subgt;2</subgt;、Tris‑HCl、BSA;采用了低浓度的皂苷和低浓度的β辛基硫代葡萄糖苷,在保证去宿主效果较好的情况下,兼顾各种病原微生物的检出。联合使用化学法和物理法双重作用对微生物细胞进行破壁,提高了临床上病原微生物的阳性检出率,并且弥补了目前只检测血浆样本cfDNA造成病原微生物漏检的空白。

技术研发人员:曾志鹏,邢宽,张鹏,李冬青,谢珍,余同,何贵伦
受保护的技术使用者:南京实践医学检验有限公司
技术研发日:
技术公布日:2024/1/12
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