一种单克隆抗体的下游纯化工艺方法与流程

文档序号:39336918发布日期:2024-09-10 11:51阅读:来源:国知局

技术特征:

1.一种单克隆抗体的下游纯化工艺方法,其特征在于,包括以下步骤:

2.根据权利要求1所述的方法,其特征在于,步骤a)中使用的所述深层囊式滤器的孔径为0.8-0.2μm,和/或所述除菌滤器的孔径为0.22μm。

3.根据权利要求1或2所述的方法,其特征在于,步骤b)中使用的所述平衡缓冲液为50mm tris-hac,150mm nacl,ph7.2。

4.根据权利要求1-3中任一项所述的方法,其特征在于,步骤b)中依次使用淋洗缓冲液1和淋洗缓冲液2进行淋洗,且所述淋洗缓冲液1的浓度大于所述淋洗缓冲液2的浓度。

5.根据权利要求4所述的方法,其特征在于,所述淋洗缓冲液1为500mm tris-hac,ph7.4,且所述淋洗缓冲液2为50-100mm naac-hac,ph5.0-5.5,优选地所述淋洗缓冲液2为50mm naac-hac,ph5.0。

6.根据权利要求1-5中任一项所述的方法,其特征在于,步骤b)中使用的所述洗脱缓冲液的ph值为3.5-4.0,优选为3.6-3.8,更优选为3.7。

7.根据权利要求1-6中任一项所述的方法,其特征在于,步骤b)中使用的所述洗脱缓冲液为50-100mm naac-hac,50-100mm gly-hcl或50-100mm柠檬酸盐,优选地所述洗脱缓冲液为50mm naac-hac,ph3.7。

8.根据权利要求1-7中任一项所述的方法,其特征在于,在步骤c)中将步骤b)中获得的产物调节至ph3.7±0.1,并在室温放置1小时,任选地所述室温为18-26℃,优选地使用1mhac调节ph。

9.根据权利要求1-8中任一项所述的方法,其特征在于,步骤c)中进行低酸灭活病毒后,将ph中和至ph6.5±0.5,优选地使用1m tris-hac,ph9.0进行中和。

10.根据权利要求1-9中任一项所述的方法,其特征在于,在步骤d)中将步骤c)中获得的产物中和至ph7.7±0.2,并将电导率调节至2.6±0.2ms/cm,任选地上样载量为≤200mg/ml gel,优选地使用1m tris-hac,ph9.0调节ph,和/或使用注射用水调节电导率,任选地在上样前,使用平衡缓冲液20mm tris-hac,15.7mm nacl,ph7.7平衡阴离子交换层析柱。

11.根据权利要求1-10中任一项所述的方法,其特征在于,在步骤e)中将步骤d)中获得的产物调节至ph4.9±0.2,并将电导率调节至4.5±0.4ms/cm,任选地使用1m hac调节ph,和/或使用1m nacl调节电导率。

12.根据权利要求1-11中任一项所述的方法,其特征在于,步骤e)中在上样前后,分别使用平衡缓冲液平衡阳离子交换层析柱,优选地所述平衡缓冲液为25mm naac-hac,28mmnacl,ph4.9。

13.根据权利要求1-12中任一项所述的方法,其特征在于,步骤e)中使用的两种高盐洗脱缓冲液分别为洗脱缓冲液1:150-330mm naac-hac,ph5.5,和洗脱缓冲液2:230-300mmnaac-hac,ph5.5,优选地所述洗脱缓冲液1为250-330mm naac-hac,ph5.5,所述洗脱缓冲液2为260-300mm naac-hac,ph5.5,更优选地所述洗脱缓冲液1为200mm naac-hac,ph5.5,所述洗脱缓冲液2为300mm naac-hac,ph5.5。

14.根据权利要求1-13中任一项所述的方法,其特征在于,在步骤d)中上样前,和/或步骤e)中上样前,和/或步骤e)中合并洗脱产物后进行除菌过滤步骤。


技术总结
本发明公开了一种单克隆抗体的下游纯化工艺方法,其具体步骤包括:a)深层过滤;b)亲和层析;c)低酸灭活病毒;d)阴离子层析;e)阳离子层析。本发明首先对细胞培养液进行深层过滤,快速大量去除细胞或细胞碎片以及宿主细胞蛋白(HCP)、宿主细胞DNA(HCD),减小后续纯化层析和过程分析压力,使工艺研究和过程控制更加精确,其次在亲和层析中设置两步淋洗以去除大量的工艺杂质如HCP、HCD等,最后在两步离子层析中通过试验设计(DoE)对工艺的最佳范围进行研究。本发明旨在提供一种低成本更高效的下游纯化工艺研究思路。

技术研发人员:金秀梅,陈江涛,罗晓辉,孙斌,李芸,靳照宇,闫哲贤,高洁,任丽,胡涛
受保护的技术使用者:明济生物制药(北京)有限公司
技术研发日:
技术公布日:2024/9/9
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