一种诱导原代输卵管上皮细胞定向分化为纤毛细胞的方法

文档序号:34554984发布日期:2023-06-28 06:19阅读:来源:国知局

技术特征:

1.一种诱导原代输卵管上皮细胞定向分化为纤毛细胞的方法,其特征在于,包括以下步骤:

2.根据权利要求1所述的方法,其特征在于,所述获取原代输卵管上皮细胞的方法包括:刮取输卵管内腔上皮细胞层,依次置于含胶原酶和dnaseⅰ的dmem/f12培养基中消化处理,然后收集细胞悬液,离心,得到原代输卵管上皮细胞。

3.根据权利要求2所述的方法,其特征在于,所述胶原酶选自胶原酶ⅰ、胶原酶ⅱ和胶原酶ⅳ中的至少一种,

4.根据权利要求1所述的方法,其特征在于,所述细胞悬浮液中所述原代输卵管上皮细胞的细胞密度为6×102~8×102个细胞每微升。

5.根据权利要求1所述的方法,其特征在于,所述培养的温度均为37±2℃,所述培养过程中co2体积含量为4~6%。

6.根据权利要求1所述的方法,其特征在于,步骤s2中,所述含血清的5mix培养基中所述血清为胎牛血清;

7.根据权利要求1所述的方法,其特征在于,步骤s4中,所述含雌激素的5mix培养基中所述雌激素的浓度为1~3ng/ml;

8.根据权利要求1~7任一项所述的方法,其特征在于,所述原代输卵管上皮细胞与所述卵泡液来源于同一种属。

9.根据权利要求8所述的方法,其特征在于,步骤s4中,所述培养的过程中每2~3天更换一次新鲜培养基。

10.根据权利要求9所述的方法,其特征在于,所述5mix培养基中,所述b27添加剂的体积含量为1~3%;


技术总结
本发明公开了一种诱导原代输卵管上皮细胞定向分化为纤毛细胞的方法。本发明的方法包括:首先获取原代输卵管上皮细胞,然后与含血清的5Mix培养基混合制备细胞悬浮液,然后接种至细胞培养小室的上室,并在细胞培养小室的下室加入含血清的DMEM/F12培养基,培养至细胞贴壁;待细胞贴壁后,将上室和下室中的培养基均替换为无血清的5Mix培养基,并继续培养至细胞达到90%以上融合;最后去除上室和下室中的培养基,并在下室中加入含雌激素或含卵泡液的5Mix培养基进行气液界面培养10~15天即可。采用本发明方法其细胞分化效率高,且获得的纤毛细胞具有与体内生理状态相似的生理特征。

技术研发人员:朱茂碧,王莎,王娜,袭昊曈,张双,邹家伦,范江霖,陈亚檞
受保护的技术使用者:五邑大学
技术研发日:
技术公布日:2024/1/13
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