一种分泌PD-1单域抗体靶向CD105的CAR-T细胞及其制备方法和应用

文档序号:39936610发布日期:2024-11-12 13:42阅读:来源:国知局

技术特征:

1.一种分泌pd-1单域抗体靶向cd105的car-t细胞,其特征在于,所述car-t细胞是嵌合抗原受体cd105 nb-histag-cd8-cd137-cd3ζ-pd-1nb修饰的t细胞,所述嵌合抗原受体cd105 nb-histag-cd8-cd137-cd3ζ-pd-1nb的核苷酸序列包含如seq id no.1所示的核苷酸序列。

2.根据权利要求1所述的car-t细胞,其中所述嵌合抗原受体cd105nb-histag-cd8-cd137-cd3ζ-pd-1nb的核苷酸序列为如seq id no.1所示的核苷酸序列。

3.一种如权利要求1所述的car-t细胞的制备方法,其特征在于,所述方法包括以下步骤:设计car目的序列,通过pcr法获得cd105nb-histag-cd8-cd137-cd3ζ-2a-pd-1nb的car目的序列片段,将酶切后的慢病毒载体与pcr法得到的car目的序列重组,将重组后的慢病毒载体转化至大肠杆菌中,并且筛选阳性克隆菌,进行阳性克隆菌测序验证是否成功构建含有cd105/pd-1nb car序列的慢病毒载体,对测序成功的重组阳性克隆菌株提取质粒,转染待转染细胞后通过rt-pcr鉴定cd105/pd-1nb car序列细胞中表达情况,验证重组慢病毒载体能正常表达后包装慢病毒,制备t细胞,利用慢病毒感染技术构建所述car-t细胞。

4.一种如权利要求3所述的car-t细胞的制备方法,其特征在于,所述方法包括以下步骤:

5.如权利要求4所述的制备方法,其中在步骤(4)中,待慢病毒感染后的t细胞的细胞量占培养瓶80-90%时将细胞收集换液,加入终浓度为100u/ml的il-2的完全培养液进行扩增培养,采用流式细胞仪对感染的细胞进行鉴定。

6.一种权利要求1或2所述的分泌pd-1单域抗体靶向cd105的car-t细胞在制备用于治疗肿瘤的制剂中的应用。

7.如权利要求6所述的应用,其中所述的肿瘤是指cd105阳性肿瘤。

8.一种药物组合物,所述药物组合物包含如权利要求1或2所述的car-t细胞和药学上可接受的载体。

9.一种编码嵌合抗原受体的核苷酸序列,其中所述嵌合抗原受体为cd105nb-histag-cd8-cd137-cd3ζ-pd-1nb,所述核苷酸序列为seq id no.1。

10.一种嵌合抗原受体,所述嵌合抗原受体为cd105 nb-histag-cd8-cd137-cd3ζ-pd-1nb,所述嵌合抗原受体由如seq id no.1所示的核苷酸序列编码。


技术总结
本发明涉及一种分泌PD‑1单域抗体靶向CD105的CAR‑T细胞及其制备方法和应用,所述CAR‑T细胞是嵌合抗原受体CD105Nb‑HIStag‑CD8‑CD137‑CD3ζ‑PD‑1Nb修饰的T细胞,所述嵌合抗原受体的核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示,所述CAR‑T细胞的制备方法包括:构建重组慢病毒载体,包装慢病毒、慢病毒感染T细胞,进行体外诱导、扩增培养以及获得工程化分泌PD‑1单域抗体靶向CD105的CAR‑T细胞,CD105‑PD‑1/Nb CAR‑T细胞在对CD105阳性肿瘤细胞具有较好的杀伤作用,CD105‑PD‑1/Nb CAR‑T细胞对肿瘤细胞的杀伤作用与肿瘤相关细胞CD105的表达量有关,为肿瘤的过继性治疗提供了新策略。

技术研发人员:卢小玲,黄夏宁,于子航,刘诗权,谢深霞,孙树阳
受保护的技术使用者:广西医科大学
技术研发日:
技术公布日:2024/11/11
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