抗人CD70抗体及其应用的制作方法

本发明涉及医药领域，具体地，涉及抗人cd70抗体或其抗原结合片段及其应用，更具体地，涉及抗人cd70抗体或其抗原结合片段、编码该抗体的核酸，表达该抗体的载体和细胞，制备该抗体的方法，含有该抗体的药物组合物、以及该抗体在制备药物中的用途。

背景技术：

1、纳米抗体是目前最小的抗体分子，其分子量是普通抗体的1/10。纳米抗体除具备单克隆抗体的抗原反应性外，还拥有一些独特的功能特性，如分子质量小，稳定性强、可溶性好、易表达、靶向性强、人源化简单等，尤其是适合抗体和car-t/m/nk等疗法的开发。

2、癌症是目前造成人类死亡率最高的疾病之一。抗癌抗体的最新临床和商业成功引起了对基于抗体的疗法的极大兴趣。由此，治疗癌症的抗癌抗体有待进一步研究。

技术实现思路

1、本发明旨在至少解决现有技术中存在的技术问题之一。为此，本发明的一个目的在于提出抗人cd70抗体及其制备方法和应用。

2、研究发现，cd70-axl信号通路在促进肿瘤生长及转移、肿瘤免疫逃逸与药物耐受中起关键作用，二者的表达水平及相互作用与患者的临床不良预后紧密相关。同时在cd70异位和原位同源小鼠肿瘤模型研究中，与野生型小鼠相比，cd70缺陷小鼠的肿瘤生长及转移扩散均受到阻碍。因此阻断该通路已被认为是治疗癌症的有效策略。

3、cd70在多种肿瘤中高表达。如在肾透明细胞癌呈100％高表达，肝细胞癌约30％表达，在nsclc的表达率为16.3％，cd70在子宫平滑肌肉瘤中的过表达率为90％，针对cd70的抗体已经在血液肿瘤中取得了疗效，尽管有多个靶向cd70的候选药物在不同的研究阶段(表1)，但迄今为止，尚没有靶向cd70的药物批准在临床上使用。

4、根据本发明的一个方面，本发明提供了一种抗人cd70抗体。据本发明的实施例，该抗人cd70抗体包括：

5、至少一个结合人cd70的免疫球蛋白单一可变结构域(isvd)，所述isvd具有三个分别为cdr1、cdr2及cdr3的互补决定区，其中，所述cdr1具有dx2cma所示的氨基酸序列，所述cdr2具有givx3gx4x5x6x7sgatgptx8x9tx10svkg所示的氨基酸序列，所述cdr3具有dhx11x12x13x14x15ctslatfrx16x1fgy所示的氨基酸序列，其中，x1为d或h；x2为g、a或h；x3为i或h；x4为g或h；x5为g或h；x6为t或h；x7为h或t；x8为y或h；x9为y或h；x10为d或h；x11为w或y；x12为a或h；x13为s或t；x14为t或h；x15为g或s；x16为g或h。

6、根据本发明实施例的抗人cd70抗体能高亲和力结合重组人cd70抗原，阻断cd70和其受体cd27的结合，并能通过结合在细胞表面的cd70诱导抗原抗体复合物内化，并激活淋巴细胞杀伤肿瘤细胞。

7、根据本发明的实施例，所述cdr1、所述cdr2和所述cdr3具有如下所示的氨基酸序列之一：

8、(1)所述cdr1、所述cdr2和所述cdr3的氨基酸序列分别如sed id no：25、22和23所示；

9、(2)所述cdr1、所述cdr2和所述cdr3的氨基酸序列分别如sed id no：42、22和23所示；

10、(3)所述cdr1、所述cdr2和所述cdr3的氨基酸序列分别如sed id no：42、22和35所示；

11、(4)所述cdr1、所述cdr2和所述cdr3的氨基酸序列分别如sed id no：42、22和36所示；

12、(5)所述cdr1、所述cdr2和所述cdr3的氨基酸序列分别如sed id no：25、22和38所示；

13、(6)所述cdr1、所述cdr2和所述cdr3的氨基酸序列分别如sed id no：25、22和39所示；

14、(7)所述cdr1、所述cdr2和所述cdr3的氨基酸序列分别如sed id no：25、22和40所示；

15、(8)所述cdr1、所述cdr2和所述cdr3的氨基酸序列分别如sed id no：25、22和41所示；

16、(9)所述cdr1、所述cdr2和所述cdr3的氨基酸序列分别如sed id no：42、22和37所示；

17、(10)所述cdr1、所述cdr2和所述cdr3的氨基酸序列分别如sed id no：42、27和23所示；

18、(11)所述cdr1、所述cdr2和所述cdr3的氨基酸序列分别如sed id no：42、28和23所示；

19、(12)所述cdr1、所述cdr2和所述cdr3的氨基酸序列分别如sed id no：42、29和23所示；

20、(13)所述cdr1、所述cdr2和所述cdr3的氨基酸序列分别如sed id no：42、30和23所示；

21、(14)所述cdr1、所述cdr2和所述cdr3的氨基酸序列分别如sed id no：42、31和23所示；

22、(15)所述cdr1、所述cdr2和所述cdr3的氨基酸序列分别如sed id no：42、32和23所示；

23、(16)所述cdr1、所述cdr2和所述cdr3的氨基酸序列分别如sed id no：42、33和23所示；

24、(17)所述cdr1、所述cdr2和所述cdr3的氨基酸序列分别如sed id no：42、34和23所示；

25、(18)所述cdr1、所述cdr2和所述cdr3的氨基酸序列分别如sed id no：26、22和23所示。

26、根据本发明的实施例，所述至少一个结合人cd70的免疫球蛋白isvd为人源化的骆驼科vhh。

27、根据本发明的实施例，该抗体包括至少一个与选自seq id no：3、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20或21所示的氨基酸序列具有80％一致性的vhh。

28、根据本发明的另一方面，本发明提供了一种融合蛋白。根据本发明的实施例，该融合蛋白包括：第一结构域，所述第一结构域具有前述的抗人cd70抗体；以及第二结构域，所述第二结构域包括用于延长体内半衰期和/或对效应细胞具有结合作用的多肽。

29、根据本发明的实施例，所述第二结构域包括血清白蛋白片段、聚乙二醇片段和结合hsa的纳米抗体中的一种或多种的组合。

30、根据本发明的另一方面，本发明提供了一种分离的核酸。根据本发明的实施例，所述核酸编码前述的抗人cd70抗体或编码前述的融合蛋白。

31、根据本发明的另一方面，本发明提供了一种载体。根据本发明的实施例，该载体包括前述的核酸。

32、根据本发明的另一方面，本发明提供了一种分离的细胞。根据本发明的实施例，该细胞包括前述的载体。

33、根据本发明的另一方面，本发明提供了一种制备前述的抗人cd70抗体或其抗原结合片段的方法。根据本发明的实施例，该方法包括：

34、(1)在合适的条件下，培养前述的细胞；以及

35、(2)分离回收前述的抗人cd70抗体。

36、根据本发明的另一方面，本发明提供了一种药物组合物。根据本发明的实施例，该药物组合物包括：前述的抗人cd70抗体或前述的融合蛋白；以及药学上可接受的载体。

37、根据本发明的另一方面，本发明提供了前述的抗人cd70抗体或前述的融合蛋白在制备药物中的用途，所述药物用于治疗癌症。

38、根据本发明的实施例，所述癌症血液瘤，肾癌，胰腺癌，咽喉癌。

39、本发明的附加方面和优点将在下面的描述中部分给出，部分将从下面的描述中变得明显，或通过本发明的实践了解到。