一种从膜锚定表达PGE-2的胚胎干细胞分化来源的间充质干细胞的制备方法及其应用

技术特征：

1.一种从膜锚定表达pge-2的胚胎干细胞分化来源的间充质干细胞的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：

2.根据权利要求1所述的从膜锚定表达pge-2的胚胎干细胞分化来源的间充质干细胞的制备方法，其特征在于，步骤(1)包括以下步骤：

3.根据权利要求1所述的从膜锚定表达pge-2的胚胎干细胞分化来源的间充质干细胞的制备方法，其特征在于，步骤(2)包括以下三个阶段：

4.根据权利要求3所述的从膜锚定表达pge-2的胚胎干细胞分化来源的间充质干细胞的制备方法，其特征在于，第一阶段中的诱导时间为3天。

5.根据权利要求3所述的从膜锚定表达pge-2的胚胎干细胞分化来源的间充质干细胞的制备方法，其特征在于，第二阶段中的培养增殖时间为4天。

6.根据权利要求3所述的从膜锚定表达pge-2的胚胎干细胞分化来源的间充质干细胞的制备方法，其特征在于，第二阶段进行培养所用培养基的组份包括：rpmi-1640、20％kosr、10ng/ml bfgf、20ng/ml pdgfab、10ng/ml egf。

7.根据权利要求3所述的从膜锚定表达pge-2的胚胎干细胞分化来源的间充质干细胞的制备方法，其特征在于，第三阶段培养时间为7～14天。

8.如权利要求1所述的从膜锚定表达pge-2的胚胎干细胞分化来源的间充质干细胞的应用，其特征在于，所述应用为在制备抗肝纤维化药物中的应用。

技术总结
本发明公开了一种从膜锚定表达PGE‑2的胚胎干细胞分化来源的间充质干细胞的制备方法及其应用。本发明制备方法包括以下步骤：(1)制备膜锚定PGE‑2过表达hESC细胞系hESC<supgt;OE‑PGE‑2</supgt;；(2)hESC<supgt;OE‑PGE‑2</supgt;细胞分化为hESC‑MSCs<supgt;OE‑PGE‑2</supgt;细胞。该制备方法通过添加EGF、bFGF等生长因子，将hESC分化为MSCs，作为MSC种子细胞的重要来源，不但解决了胚胎干细胞的免疫原性的限制问题，还从来源上解决了原代MSC基因组不稳定的问题，且具有无创性获得种子细胞以及种子细胞具有可编辑性、可重复性、稳定性好等优点。本发明所制备的hESC‑MSCs<supgt;OE‑PGE‑2</supgt;无需进行侵入性的提取，能更好的进行种子细胞质控和在一定程度上避免发生基因突变，增殖能力强，而且是利用基因编辑技术使其膜锚定持续表达PGE‑2，大大提升了抗肝纤维化的治疗效果。

技术研发人员：刘景锋,钟彦,徐书详
受保护的技术使用者：北京大学深圳医院（北京大学深圳临床医学院）
技术研发日：
技术公布日：2024/1/22