1.用于检测棘白菌素和/或三唑类耐药的念珠菌的组合物,其特征在于,所述念珠菌包括光滑念珠菌和/或耳念珠菌;所述组合物为如下引物探针组合中的任一种或多种:
2.根据权利要求1所述的组合物,其特征在于,所述探针a、探针b、探针c、探针d、探针e、探针f和探针g的5’端标记fam,3’端标记mbg。
3.根据权利要求1所述的组合物,其特征在于,所述封闭寡核苷酸a、封闭寡核苷酸b、封闭寡核苷酸c、封闭寡核苷酸d、封闭寡核苷酸e、封闭寡核苷酸f和封闭寡核苷酸g的3’端连接po4。
4.利用权利要求1-3任一项所述的组合物定性鉴别棘白菌素和/或三唑类耐药中的念珠菌的方法,其特征在于,包括以下步骤:
5.根据权利要求4所述的方法,其特征在于,s2中,扩增反应程序为:第一阶段:50℃2min,95℃10min,1个循环;第二阶段:95℃15s,60℃1min,40个循环;反应体系为:dna模版1μl,taqpath proamp master mix 10μl,正向引物1μl,反向引物1μl,探针0.5μl,封闭寡核苷酸4μl,无核酸酶水补至20μl。
6.根据权利要求4所述的方法,其特征在于,若所述实时荧光定量pcr得到扩增曲线且ct值≤35,判定为耐药念珠菌阳性;若无扩增曲线或ct值>35,判定为耐药念珠菌阴性。
7.基于权利要求4-6任一项所述的方法定量测定棘白菌素和/或三唑类耐药的念珠菌的菌载量的方法,其特征在于,待测样品利用权利要求4-6任一项所述的方法进行检测,得到ct值;将所述ct值代入靶点基因对应标准曲线的线性方程,计算耐药菌的菌载量。
8.根据权利要求7所述的方法,其特征在于,在10-106个孢子/反应线性范围内,所述耐药念珠菌包括光滑念珠菌和/或耳念珠菌;所述耳念珠菌erg11-y132f的线性方程为y=-3.3569x+37.962;所述光滑念珠菌pdr1-y682c的线性方程为y=-3.6112x+36.902;所述光滑念珠菌pdr1-g1099d的线性方程为y=-3.1197x+35.782;所述光滑念珠菌pdr1-g346d的线性方程为y=-2.6826x+34.402;所述光滑念珠菌pdr1-i380l的线性方程为y=-3.6439x+42.522;所述光滑念珠菌fks2-s663p的线性方程为y=-3.1340x+40.116;所述耳念珠菌fks1-s639f的线性方程为y=-3.9855x+41.829;其中,y为ct值,x为每个反应孔对应的孢子量的lg值。
9.权利要求1所述的组合物在制备用于检测混合感染中的耐药念珠菌的试剂或试剂盒中的应用,其特征在于,所述混合感染为耐药念珠菌和敏感念珠菌的混合感染。
10.用于检测棘白菌素和/或三唑类耐药的念珠菌的试剂盒,其特征在于,所述试剂盒含有权利要求1-3任一项所述的组合物。