一种EDARpVa1370Ala突变检测试剂在制备胸腺发育评价试剂盒中的应用方法

文档序号:36719590发布日期:2024-01-16 12:21阅读:来源:国知局

技术特征:

1.一种edar基因pva1370ala突变检测试剂在制备胸腺发育预测评价试剂盒中的应用,其特征在于,包括以下工作步骤:

2.根据权利要求1所述的edar基因pva1370ala突变检测试剂在制备胸腺发育预测评价试剂盒中的应用,其特征在于,所述第一步中还包括:

3.根据权利要求2所述的edar基因pva1370ala突变检测试剂在胸腺发育预测评价试剂盒中的应用方法,其特征在于,所述第一步中还包括:所述试剂盒包括微滴式数字pcr用反应预混液、热启动taq酶、sdh2o;其中,反应混合物包括:mgcl2 7.5mm,tris-hcl buffer125mm,kcl 125mm,dntps 7.5mm,bsa 2mg/ml。

4.根据权利要求2所述的edar基因pva1370ala突变检测试剂在胸腺发育预测评价试剂盒中的应用方法,其特征在于,所述dna用qubit3.0定量,按照测试信息用无核酶水稀释至指定浓度;取出反应预混液(微滴式数字pcr用反应预混液),室温放置2分钟;准备样本制备通用耗材,可穿刺热封膜,在8连管中配制pcr反应体系,反应终浓度引物/探针900nm/500nm;通过旋涡振荡混匀pcr反应混合液,用离心机快速离心,以确保所有成分都在反应管的底部,让反应管在室温下静置3分钟。

5.根据权利要求1所述的edar基因pva1370ala突变检测试剂在制备胸腺发育预测评价试剂盒中的应用,其特征在于,所述第二步还具体的包括:

6.根据权利要求5所述的edar pva1370ala突变检测试剂在制备胸腺发育预测评价试剂盒中的应用,其特征在于,所述c中,微滴为45-55μl。

7.根据权利要求5所述的edar pva1370ala突变检测试剂在制备胸腺发育评价试剂盒中的应用方法,其特征在于,所述a中,在各样本孔水相上方加入5μl密封剂。

8.根据权利要求5所述的edar pva1370ala突变检测试剂在制备胸腺发育预测评价试剂盒中的应用方法,其特征在于,所述f中,pcr结束前10min打开微滴检测仪。

9.根据权利要求5所述的edar pva1370ala突变检测试剂在制备胸腺发育预测评价试剂盒中的应用方法,其特征在于,所述d中,封好膜之后应于30分钟内进行pcr扩增。

10.根据权利要求5所述的edar pva1370ala突变检测试剂在制备胸腺发育预测评价试剂盒中的应用方法,其特征在于,所述d中,设置封膜仪温度为190℃,封膜时间为5s。


技术总结
本发明涉及一种EDAR基因pVa1370Ala突变检测试剂在制备胸腺发育预测评价试剂盒中的应用。胸腺从发育至成熟,主要生理功能就是为繁殖后代起哺乳作用,也作为女性重要的第二性征和美观息息相关,本发明针对EDAR基因pVa1370Ala位点突变进行检测,采用数字PCR的方法,通过引物和杂交探针的优化,油包水微液滴的制备,聚合酶链式反应扩增及微滴式数字PCR仪荧光数据读取,提高了检测准确性和可靠性;所述试剂盒使用方便,操作方法简单,通过对EDAR基因的突变高效检测,可以方便的预测女性乳腺发育的大小,因此本发明所提供的应用方法拥有较大的作用和价值。

技术研发人员:顾雪锋,张佳楹,朱思妤,方萱,陈琪,马文豪,刘爽,黄聪颖,吕昌莲,黄钢
受保护的技术使用者:上海健康医学院
技术研发日:
技术公布日:2024/1/15
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