一种乳腺癌类器官专用培养基及培养方法与流程

技术特征：

1.一种乳腺癌类器官专用培养基，其特征在于，包括：减血清dmem、10 mm hepes、2 mmglutamax、1×n-21、1×b-27、1%抗生素、细胞生长因子、小分子化合物、0.1 mg/ml iv型胶原蛋白、0.01 mg/ml oct4蛋白和0.02 mg/ml foxm1蛋白 。

2.根据权利要求1所述的一种乳腺癌类器官专用培养基，其特征在于，所述抗生素为青霉素-链霉素-两性霉素b混合溶液；所述青霉素-链霉素-两性霉素b混合溶液中青霉素的浓度为10000 μg/ml，链霉素的浓度为10000 μg/ml，两性霉素b的浓度为25 μg/ml。

3.根据权利要求1所述的一种乳腺癌类器官专用培养基，其特征在于，所述细胞生长因子为5 ng/ml egf、100 μg/ml noggin、100 μg/ml r-spondin 1、100 μg/ml r-spondin 3、10 nm neuregulin 1、20 ng/ml fgf-10、5 ng/ml fgf-7的混合物。

4.根据权利要求1所述的一种乳腺癌类器官专用培养基，其特征在于，所述小分子化合物为5 μm y-27632、10 mm nicotinamide、1.25 mm n-acetylcysteine、500 nm a83-01、1μm sb202190的混合物。

5.一种乳腺癌类器官培养方法，其特征在于，包括：

6.根据权利要求5所述的一种乳腺癌类器官培养方法，其特征在于，所述预处理的具体方法为：将新鲜乳腺癌组织样本放入预冷的组织保存液，剔除脂肪组织和坏死的肿瘤组织，只选取活的肿瘤组织，将组织样本转移至离心管中，用4℃预冷的pbs溶液漂洗组织样本，直至漂洗液呈清液状态，将漂洗后的组织转移到培养皿中并剪碎至1 mm3的组织块。

7.根据权利要求5所述的一种乳腺癌类器官培养方法，其特征在于，所述类器官传代的具体方法为：

8.根据权利要求5所述的一种乳腺癌类器官培养方法，其特征在于，所述类器官复苏的具体方法为：

技术总结
本发明涉及细胞培养技术领域，公开了一种乳腺癌类器官专用培养基及培养方法，培养基组分包括：减血清DMEM、10 mM HEPES、2 mM Glutamax、50×N‑21、50×B‑27、1%抗生素、细胞生长因子、小分子化合物、0.1 mg/mL IV型胶原蛋白、0.01 mg/mL Oct4蛋白和0.02 mg/mL FOXM1蛋白。本发明所提供的乳腺癌类器官专用培养基，通过改进细胞生长因子、小分子化合物以及培养因子等必要要素以模拟接近体内的生长环境，尤其是所添加的IV型胶原蛋白、Oct4蛋白和FOXM1蛋白不仅促进了乳腺癌类器官的生长，而且提高了类器官的培养成功率。

技术研发人员：黄红杰,李为为
受保护的技术使用者：领因生物科技（上海）有限公司
技术研发日：
技术公布日：2024/1/15