一种一体化文库构建的方法及其应用与流程

文档序号:37292862发布日期:2024-03-13 20:41阅读:来源:国知局

技术特征:

1.一种一体化核酸文库构建的方法,其特征在于,所述方法包括:

2.根据权利要求1所述的方法,其特征在于,所述多重pcr扩增包括上游引物和下游引物;

3.根据权利要求1或2所述的方法,其特征在于,所述上游引物的核酸序列包括seq idno:1所示的序列;所述下游引物的核酸序列包括seq id no:2所示的序列。

4.根据权利要求3所述的方法,其特征在于,所述筛选后的连接产物与扩增子库的摩尔质量比为(10-100):1。

5.根据权利要求1-4中任一项所述的方法,其特征在于,所述测序接头包括接头a和接头b,所述接头a能够与所述第一核酸内切酶切割产生的粘性末端互补,所述接头b能够与所述第二核酸内切酶切割产生的粘性末端互补。

6.根据权利要求5所述的方法,其特征在于,所述接头a的核酸序列包括seq id no:3和seq id no:4所示的序列;

7.根据权利要求1-6中任一项所述的方法,其特征在于,所述引物包括通用引物a和特异性引物b;所述通用引物a具有与所述接头a互补配对的序列;所述特异性引物b具有与所述接头b互补配对且具有barcode的序列。

8.根据权利要求7所述的方法,其特征在于,所述通用引物a的核酸序列包括seq idno:7所示的序列,所述特异性引物b的核酸序列包括seq id no:8所示的序列。

9.一种植入前胚胎染色体结构异常分析方法,其特征在于,所述方法包括:采用权利要求1-8中任一项所述的一体化核酸文库构建的方法构建胚胎样本和所述胚胎样本的至少一种亲本的测序文库,然后进行测序,根据测序结果分析所述胚胎样本的染色体。

10.根据权利要求9所述的植入前胚胎染色体结构异常分析方法,其特征在于,所述结果分析包括:全基因组染色体拷贝数异常、单基因病、染色体结构异常、特殊遗传病。


技术总结
本发明公开了一种一体化文库构建的方法及其应用。所述方法包括:使用第一核酸内切酶和第二核酸内切酶对基因组DNA进行酶切得到酶切产物,将酶切产物与测序接头连接,得到连接产物,将筛选后的连接产物与多重PCR扩增得到的扩增子库混合,使用引物进行文库PCR反应,即得所述一体化核酸文库;所述第一核酸内切酶包括BfaI;所述第二核酸内切酶包括MboI;所述多重PCR扩增子库由一端含有BfaI酶切位点识别序列,另一端含有MboI酶切位点识别序列的DNA片段组成。本发明方法实现了在均匀覆盖全基因组CNV和SNP的同时,对漏检遗传病区域进行针对性的捕获富集,提供了一种更完善和准确的一体化高通量测序检测方法。

技术研发人员:赵丁丁,陈淼,魏相宇,孙婷婷,卢娜如,张军,冒燕,孔令印,梁波
受保护的技术使用者:苏州贝康医疗器械有限公司
技术研发日:
技术公布日:2024/3/12
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