一种微载体及制备方法与应用以及细胞贴壁培养和回收方法与流程

文档序号:37922932发布日期:2024-05-11 00:02阅读:来源:国知局

技术特征:

1.一种微载体,其特征在于,所述的微载体为多糖分子通过交联方式得到的交联微颗粒,所述的微载体在细胞培养环境下能维持多糖微载体的结构稳定,所述的微载体能在酶的作用下完全溶解。

2.根据权利要求1所述的微载体,其特征在于,所述的微载体在酶的作用下完全溶解的时间为2小时内。

3.根据权利要求1所述的微载体,其特征在于,所述的微载体中多糖分子的交联度为13.1%-44.2%。

4.根据权利要求1所述的微载体,其特征在于,所述的交联微颗粒为交联微球或近似球形的交联微颗粒。

5.根据权利要求4所述的微载体,其特征在于,所述的微载体在细胞常规培养环境下能维持多糖微载体的微球或近似球形结构稳定三天以上。

6.根据权利要求5所述的微载体,其特征在于,所述的微载体在25-41℃的细胞培养环境下能维持多糖微载体的微球或近似球形结构结构稳定三天以上。

7.根据权利要求3所述的微载体,其特征在于,所述的交联度为组成多糖的单糖残基中,与交联剂之间或单糖残基之间发生交联反应的单糖残基数量占所有单糖残基数量的比例。

8.根据权利要求2所述的微载体,其特征在于,所述的微载体在酶的作用下完全溶解的时间为30分钟内。

9.根据权利要求8所述的微载体,其特征在于,所述的微载体中多糖分子的交联程度为13.1%-38.7%。

10.根据权利要求1所述的微载体,其特征在于,所述的微载体的表面具有修饰。

11.根据权利要求10所述的微载体,其特征在于,所述的微载体的表面修饰为表面通过化学键结合的带正电荷的基团或分子,或者物理吸附的带正电荷的基团或分子,或者通过化学键结合或物理吸附促进细胞贴附的蛋白、多肽或多糖中的一种或几种。

12.根据权利要求10所述的微载体,其特征在于,表面经过修饰的所述的微载体中多糖分子的交联程度为13.6-44.3%。

13.根据权利要求11所述的微载体,其特征在于,所述的物理吸附的带正电荷的基团或分子包括但不限于二乙氨乙基葡聚糖、聚-l-鸟氨酸(plo)、聚-d-鸟氨酸(pdo)、聚-dl-鸟氨酸、聚-d-赖氨酸(pdl)、聚-l-赖氨酸(pll)、聚-dl-赖氨酸、聚-l-精氨酸(pla)、聚-d-精氨酸(pda)、聚-dl-精氨酸、聚-l-高精氨酸(plha)、聚-d-高精氨酸(pdha)、聚-dl-高精氨酸、聚-l-组氨酸(plh)、聚-d-组氨酸(pdh)、聚-dl-组氨酸、聚亚甲基-co-胍(pmcg)、聚烯丙基胺(paa)、聚乙烯基胺(pva)、聚乙烯亚胺、烯丙基胺-二烯丙基胺共聚物和烯丙基胺-马来酸共聚物中的阳离子性聚合物。

14.根据权利要求11所述的微载体,其特征在于,所述的促进细胞贴附蛋白或多肽包括但不限于胶原蛋白,明胶,层粘连蛋白,纤连蛋白,玻连蛋白,胶原蛋白、明胶、层粘连蛋白、纤连蛋白或玻连蛋白中促进细胞贴附的片段,以及含有精甘天冬氨酸肽的多肽。

15.根据权利要求1所述的微载体,其特征在于,所述多糖包括以下物质的一种或多种:淀粉、纤维素、葡聚糖、海藻酸钠、壳聚糖、透明质酸、琼脂糖、聚半乳糖醛酸和果胶及淀粉、纤维素、葡聚糖、海藻酸钠、壳聚糖、透明质酸、琼脂糖、聚半乳糖醛酸和果胶的衍生物。

16.根据权利要求1所述的微载体,其特征在于,所述的交联方式为化学交联法、光交联、脱氢热交联,离子交联法中的一种或几种。

17.根据权利要求16所述的微载体,其特征在于,所述的化学交联利用包括但不限于以下的交联剂对多糖分子的链状结构进行交联或固定:1-3-二氯丙醇、n,n′-亚甲基双丙烯酰胺、2,3-二溴-1-丙醇、1,2,7,8-二环氧辛烷、二乙烯基砜、戊二醛、1,4-丁二醇二缩水甘油醚、1-乙基-(3-二甲基氨基丙基)碳酰二亚胺盐酸盐、n-羟基丁二酰亚胺、环氧氯丙烷、单宁酸、京尼平。

18.根据权利要求16所述的微载体,其特征在于,所述的光交联使用能引发交联剂与多糖分子之间发生反应的光源。

19.根据权利要求16所述的微载体,其特征在于,所述的脱氢热交联在接近真空的环境和高温下进行。

20.根据权利要求1所述的微载体,其特征在于,所述的微载体的表面为光滑或多孔结构。

21.根据权利要求20所述的微载体,其特征在于,所述的多孔结构的孔径为1-100µm。

22.根据权利要求21所述的微载体,其特征在于,所述的多孔结构的孔径通过包括但不限于冷冻温度、冷冻速度的条件进行控制。

23.一种权利要求1所述的微载体的制备方法,其特征在于,包括以下步骤:

24.根据权利要求23所述的制备方法,其特征在于,所述的多糖溶液中多糖的浓度为10%-50 % w/w。

25.根据权利要求23所述的制备方法,其特征在于,所述的方法还包括,在添加交联剂之后或添加交联剂的同时,还添加带正电荷的物质或促进细胞贴附的物质,通过物理吸附或化学反应使多糖微球表面带有正电荷或细胞贴附分子。

26.根据权利要求23所述的制备方法,其特征在于,所述的不与水互溶的有机溶剂为植物油。

27.根据权利要求23所述的制备方法,其特征在于,所述的乳化剂包括但不限于卵磷脂、卡拉胶、瓜尔胶、黄原胶、聚山梨醇酯、纤维素、脂肪酸单甘油酯和甘油二酯、蔗糖酯和蔗糖甘油酯、脂肪酸聚甘油酯、聚甘油聚蓖麻油酸酯、硬脂酰乳酸酯、脱水山梨糖醇酯。

28.根据权利要求27所述的制备方法,其特征在于,所述的聚甘油聚蓖麻油酸酯在有机溶剂中的体积分数为1-10%。

29.根据权利要求23所述的制备方法,其特征在于,所述的交联剂为环氧氯丙烷。

30.根据权利要求29所述的制备方法,其特征在于,所述的环氧氯丙烷与多糖中单糖残基的摩尔比为0.23~0.53:1。

31.根据权利要求23所述的制备方法,其特征在于,所述的交联反应的时间大于20小时。

32.一种权利要求1-22任一项所述的微载体在作为贴壁细胞培养材料上的应用。

33.根据权利要求32所述的应用,其特征在于,所述的微载体在10-39℃和ph6.5-8.0的条件下可被酶完全溶解。

34.一种采用权利要求1-22任一项所述的微载体的细胞贴壁培养和细胞回收方法,其特征在于,包括以下步骤:混合微载体、培养基和贴壁细胞,进行细胞培养,然后洗净微载体,同时或分步加入多糖酶和分解蛋白或多肽的酶溶解微载体、确认微载体完全溶解,回收得到贴壁细胞。


技术总结
一种微载体及制备方法与应用以及细胞贴壁培养和回收方法,制备的微载体可以用于细胞培养,在细胞培养的同时,能够维持细胞的生存率,又能被快速完全溶解,表面具有修饰,本发明还提供了该微载体的制备以及该微载体在细胞贴壁培养中的用途,相比于现有的微载体,采用本申请的微载体和方法进行细胞贴壁培养细胞回收效率可达到95%以上,并且采用多糖原材料避免了向细胞产品或细胞来源生物制品中引入动物来源的病原体,同时制造成本显著低于重组明胶、重组胶原蛋白等原材料。

技术研发人员:陈尚武,郑景,夏玉龙,吴雅彬
受保护的技术使用者:国科温州研究院(温州生物材料与工程研究所)
技术研发日:
技术公布日:2024/5/10
当前第2页1 2 
网友询问留言 已有0条留言
  • 还没有人留言评论。精彩留言会获得点赞!
1