一种功能增强型溶瘤病毒及制备方法与应用与流程

文档序号:37888404发布日期:2024-05-09 21:32阅读:来源:国知局

技术特征:

1.一种功能增强型溶瘤病毒,其特征在于,所述的溶瘤病毒的基因组包括诱导宿主细胞死亡的天然或人工设计基因编码的生物毒素或表达其功能的一种或多种核酸序列,所述的溶瘤病毒的基因组还包括可调控诱导宿主细胞死亡的天然或人工设计基因编码的生物毒素或其部分功能的一种或多种核酸序列表达的基因表达调控系统。

2.根据权利要求1所述的功能增强型溶瘤病毒,其特征在于,所述的生物毒素为诱导宿主细胞死亡的天然或人工设计基因编码的毒性蛋白或多肽类物质。

3.根据权利要求2所述的功能增强型溶瘤病毒,其特征在于,所述的生物毒素为白喉毒素或假单胞菌毒素。

4.根据权利要求1所述的功能增强型溶瘤病毒,其特征在于,所述的基因表达调控系统为在哺乳动物细胞内基因诱导表达系统的四环四诱导系统(tet-on)或他莫昔芬诱导系统。

5.根据权利要求1所述的功能增强型溶瘤病毒,其特征在于,所述的溶瘤病毒包括溶瘤腺病毒、溶瘤痘苗病毒或溶瘤单纯疱疹病毒中的一种。

6.根据权利要求1所述的功能增强型溶瘤病毒,其特征在于,所述的诱导宿主细胞死亡的天然或人工设计基因编码的生物毒素或表达其部分功能的一种或多种核酸序列为表达白喉毒素dt蛋白的dta基因。

7.根据权利要求1所述的功能增强型溶瘤病毒,其特征在于,所述的功能增强型溶瘤病毒内包含有携带dta基因和四环四诱导系统(tet-on)的psd55-tetone-dta质粒或pbatk-tetone-dta质粒,所述的psd55-tetone-dta质粒序列如seq id no.1所示,所述的pbatk-tetone-dta质粒序列如seq id no.2所示。

8.一种psd55-tetone-dta质粒的制备方法,其特征在于,包括以下步骤:先通过查询和设计dta-flag基因,再构建到ptetone载体的bamhi和psti酶切位点之间,或的ptetone-dta(flag)重组质粒,再以ptetone-dta(flag)为模版,设计上下游引物,pcr扩增tetone-dta(flag)表达框,并构建到psd55质粒的bglii酶切位点,从而获得psd55-tetone-dta重组质粒。

9.根据权利要求8所述的制备方法,其特征在于,所述的设计dta-flag基因序列如seqid no.3所示。

10.根据权利要求8所述的制备方法,其特征在于,所述的方法中含psd55质粒bglii酶切位点5’端同源臂的tetone-dta(flag)基因上游引物序列如seq id no.4所示,含psd55质粒bglii酶切位点3’端同源臂的tetone-dta(flag)基因下游引物序列如seq id no.5所示。

11.一种pbatk-tetone-dta质粒的制备方法,其特征在于,包括以下步骤:先通过查询和设计dta-flag基因,再构建tetone-dta(flag)重组质粒,再以tetone-dta(flag)为模版,设计上下游引物,pcr扩增tetone-dta(flag)表达框,并构建到pbatk质粒的sal i和xho i酶切位点,从而获得pbatk-tetone-dt重组质粒。

12.根据权利要求11所述的制备方法,其特征在于,所述的方法中含pbatk质粒xhoi酶切位点5’端的tetone-dta(flag)基因上游引物序列如seq id no.6所示,含pbatk质粒sali酶切位点3’端的tetone-dta(flag)基因下游引物序列如seq id no.7所示。

13.一种权利要求1所述的功能增强型溶瘤病毒在制备抑制癌细胞侵袭、增殖、迁移药物上的应用。

14.一种权利要求1所述的功能增强型溶瘤病毒在制备治疗癌症的靶向基因-病毒治疗药物上的应用。


技术总结
一种功能增强型溶瘤病毒及制备方法与应用,该溶瘤病毒携带可调控DTA基因表达的Tet‑On基因表达调控系统,病毒包装过程中Tet‑On系统保持关闭状态,从而避免溶瘤腺病毒包装和扩增过程中DTA的表达对HEK293细胞的“误伤”,溶瘤腺病毒注射治疗初期仍然保持Tet‑On系统关闭,待病毒在肿瘤内扩增一段时间后,通过强力霉素诱导感染病毒细胞内DTA的表达,从而增强抗肿瘤功效,同时该方法降低病毒使用剂量,降低溶瘤病毒可能引起的不良反应,携带DTA的溶瘤腺病毒治疗初期出现不了反应,可及时开启DTA基因表达杀死感染初期的宿主细胞,有助于机体快速清除暴露的溶瘤腺病毒,从而起到降低溶瘤病毒治疗风险的作用。

技术研发人员:夏玉龙,吴雅彬,陈尚武,卢学敏
受保护的技术使用者:国科温州研究院(温州生物材料与工程研究所)
技术研发日:
技术公布日:2024/5/8
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