一种直扩型DNA聚合酶和直扩型PCR检测试剂盒的制作方法

文档序号:37819901发布日期:2024-04-30 17:29阅读:来源:国知局

技术特征:

1.一种直扩型dna聚合酶,其特征在于,所述直扩型dna聚合酶为pfu dna聚合酶至少经过以下氨基酸突变而获得:n210d、f216s、s334r、e622q、i703l和g707e。

2.根据权利要求1所述的直扩型dna聚合酶,其特征在于,所述直扩型dna聚合酶的氨基酸序列如seq id no.1所示。

3.一种编码如权利要求1或2所述的直扩型dna聚合酶的核苷酸序列。

4.根据权利要求3所述的核苷酸序列,其特征在于,所述核苷酸序列如seq id no.2所示。

5.一种含有权利要求3或4所述的核苷酸序列的重组质粒。

6.一种表达权利要求3或4所述的核苷酸序列或者权利要求5所述的重组质粒的重组细胞。

7.一种直扩型pcr检测试剂盒,其特征在于,包括如权利要求1或2所述的直扩型dna聚合酶。

8.一种直扩型pcr检测mthfr 677ct分型的试剂盒,其特征在于,包括如权利要求1或2所述的直扩型dna聚合酶,以及针对mthfr基因677ct设计的特异性引物和特异性探针。

9.根据权利要求8所述的试剂盒,其特征在于,所述特异性引物包括正向引物和反向引物,所述正向引物的序列如seq id no.3所示,所述反向引物的序列如seq id no.4所示;

10.根据权利要求8或9所述的试剂盒,其特征在于,还包括pcr缓冲液,所述pcr缓冲液包括:10mm至50mm的tris缓冲液、10mm至250mm的氯化钾、1mm至10mm的氯化镁、0.1m至1.5m的甜菜碱、质量分数为1%至10%的聚乙二醇、200μm至400μm的dntps、以及体积分数为0.1%至2%的吐温-20;


技术总结
本申请公开了一种直扩型DNA聚合酶和直扩型PCR检测试剂盒,直扩型DNA聚合酶为Pfu DNA聚合酶至少经过以下氨基酸突变而获得:N210D、F216S、S334R、E622Q、I703L和G707E。本申请的直扩型DNA聚合酶和直扩型PCR检测试剂盒,对于生物样本中的干扰物具有较好的抗干扰能力,能够有利于提高对生物样本直接进行荧光定量PCR检测的准确性。

技术研发人员:黄晓,李高堂,郭东东,任玉冰,张娟,王玉,蔡传良,雷丽娟,王涛,刘理顺
受保护的技术使用者:深圳泰乐德医疗有限公司
技术研发日:
技术公布日:2024/4/29
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