交条件"意指在所属领域中已知的低离子强度和高温的条件。通常， 在严谨条件下，探针与其靶序列杂交的可检测程度比与其它序列杂交的可检测程度更高 (例如超过本底至少2倍。严谨杂交条件是序列依赖性的，在不同的环境条件下将会不同， 较长的序列在较高温度下特异性杂交。通过控制杂交的严谨性或洗涤条件可鉴定与探针 100%互补的革E序列。对于核酸杂交的详尽指导可参考有关文献（Tijssen,Techniquesin BiochemistryandMolecularBiology-HybridizationwithNucleicProbes,"Overview ofprinciplesofhybridizationandthestrategyofnucleicacidassays. 1993) 〇更 具体的，所述严谨条件通常被选择为低于特异序列在规定离子强度pH下的热熔点（TJ约 5-10°C。^为在平衡状态下50%与目标互补的探针杂交到目标序列时所处的温度（在指定 离子强度、pH和核酸浓度下）（因为目标序列过量存在，所以在!"下在平衡状态下50%的探 针被占据）。严谨条件可为以下条件：其中在pH7. 0到8. 3下盐浓度低于约1. 0M钠离子浓 度，通常为约〇? 01到1. 0M钠离子浓度（或其它盐），并且温度对于短探针（包括（但不限 于）10到50个核苷酸）而言为至少约30°C，而对于长探针（包括（但不限于）大于50个 核苷酸）而言为至少约60°C。严谨条件也可通过加入诸如甲酰胺的去稳定剂来实现。对于 选择性或特异性杂交而言，正信号可为至少两倍的背景杂交，视情况为10倍背景杂交。例 示性严谨杂交条件可如下：50%甲酰胺，5XSSC和1%SDS，在42°C下培养；或5XSSC，1% SDS，在65°C下培养，在0. 2XSSC中洗涤和在65°C下于0. 1 %SDS中洗涤。所述洗涤可进行 5、15、30、60、120分钟或更长时间。
[0043] 术语"宿主细胞"或"重组宿主细胞"意指包含本发明多核苷酸的细胞，而不管使用 何种方法进行插入以产生重组宿主细胞，例如直接摄取、转导、f?配对或所属领域中已知的 其它方法。外源性多核苷酸可保持为例如质粒的非整合载体或者可整合入宿主基因组中。
[0044] 术语"多核苷酸"或"核苷酸"意指单股或双股形式的脱氧核糖核苷酸、脱氧核糖 核苷、核糖核苷或核糖核苷酸及其聚合物。除非特定限制，否则所述术语涵盖含有天然核苷 酸的已知类似物的核酸，所述类似物具有类似于参考核酸的结合特性并以类似于天然产生 的核苷酸的方式进行代谢。除非另外特定限制，否则所述术语也意指寡核苷酸类似物，其包 括PNA(肽核酸）、在反义技术中所用的DNA类似物（硫代磷酸酯、磷酰胺酸酯等等）。除非 另外指定，否则特定核酸序列也隐含地涵盖其保守修饰的变异体（包括（但不限于）简并 密码子取代）和互补序列以及明确指定的序列。特定而言，可通过产生其中一个或一个以 上所选（或所有）密码子的第3位经混合碱基和/或脱氧肌苷残基取代的序列来实现简 并密码子取代（Batzer等人，NucleicAcidRes. 19:5081(1991) ;0htsuka等人，J.Biol. Chem. 260:2605-2608 (1985);和Cassol等人，（1992);Rossolini等人，MolCell.Probes8:91-98(1994))〇
[0045] 术语"启动子"指存在于目的基因编码序列的上游，提供RNA聚合酶和正确转录起 始所必需的其它因子的识别位点，启动或指导目的基因转录为mRNA。
[0046] 术语"组织特异性启动子":调控或驱动目的基因在组织或器官中特异性表达的启 动子。
[0047] 术语"异源性DNA序列"指该DNA序列对该特定的宿主细胞而言属于外来的来源， 或若来自相同的原始来源但对该原始序列进行了修饰或改造。
[0048] 术语"内源基因"来自宿主本身的基因，包括DNA或RNA序列。
[0049] 术语"选择标记基因"：该基因在植物细胞中的表达给予该细胞选择优势，用这些 选择性标记基因所转化的这些细胞所具有的选择优势可以是由于它们与非转化细胞的生 长相比具有在阴性选择剂（如：抗菌素或除草剂）的存在下生长的能力。选择标记基因还 指多种基因的组合，它们在植物细胞中的表达给予该细胞阴性以及阳性的选择优势。
[0050] 术语"可操作的连接"指两个或更多个元件之间功能性的连接，可操作的连接的元 件可为邻接或非邻接的。
[0051] 术语"转化"：将异源性DNA序列引入到宿主细胞或有机体的方法。
[0052] 术语"表达"：内源性基因或转基因在植物细胞中的转录和/或翻译。
[0053] 术语"编码序列":转录成RNA的核酸序列。
[0054] 术语"植物表达载体"：一种或多种用于实现植物转化的DNA载体；本领域中这些 载体常被称为二元载体。二元载体连同具有辅助质粒的载体是大多常用于土壤杆菌介导转 化的。二元载体通常包括：T_DNA转移所需要的顺式作用序列、经工程化处理以便能够在植 物细胞中表达的选择标记物，待转录的异源性DNA序列等。
【附图说明】
[0055] 图 1RNA质量检测电泳图；R:根；S1，S2，S3 :第 4、3、2 节段茎；L1，L2，L3 :第 2、4、6 片叶；SH1，SH2，SH3 :第2、4、6片叶的叶鞘；SA:莖尖；ST:茎；T:雄花；EN:胚乳；E:胚；K:籽 粒。
[0056] 图2原始验证载体pCAMBIA3301的示意图。
[0057]图3p2941_EZ的示意图。
[0058] 图4pUM3G中间载体的示意图。
[0059] 图5表达载体p2941G3的示意图。
[0060] 图6组织特异性启动子的瞬时表达结果；胚的发育时间为20天。
[0061] 图7组织特异性启动子启动⑶S基因在种子中的表达情况；图中1，2, 3, 4及5分 别代表不同的玉米种子。
[0062] 图8全长启动子P2941(SEQIDNO. 1)在T1代转基因玉米三叶一心时期的各组织的 GUS染色图；(a):叶片；(b):根；（c):叶鞘。
[0063] 图9不同长度的组织特异性启动子驱动报告基因表达的瞬时表达结果。
[0064] 图10P2941-0G3稳定表达载体图。
[0065]图11P2941-7G3稳定表达载体图。
[0066] 图12启动子缺失片段在T1代转基因玉米各组织的⑶S染色图； (a)-(e) :p2941-0G3稳定转化的T1代转基因玉米各组织的⑶S染色图；（f)-(k) :p2941-7G3 稳定转化的T1代转基因玉米各组织的GUS染色图；（a)Ab)Af)Ag):授粉后30天的种子 纵切，（b)Ag)为负对照；(c)Ai):叶鞘；（d)Aj):叶；（e)Ak):根；(h):是放大25倍的 图（i)着色部分的横切面。
【具体实施方式】
[0067] 下面结合具体实施例来进一步描述本发明，本发明的优点和特点将会随着描述而 更为清楚。但这些实施例仅是范例性的，并不对本发明的范围构成任何限制。本领域技术 人员应该理解的是，在不偏离本发明的精神和范围下可以对本发明技术方案的细节和形式 进行修改或替换，但这些修改和替换均落入本发明的保护范围内。
[0068] 实施例1玉米组织特异启动子的克隆及序列分析
[0069] 1、利用基因芯片数据筛选驱动玉米种子特异表达基因的启动子
[0070] 基因芯片材料的准备：取玉米B73大喇叭口期的根、叶、茎和茎间，成熟期但未授 粉的幼穗和花丝，授粉后10天、15天、20天、25天的胚和胚乳等共14个样品，每个样品类型 设3个重复，利用基因芯片（Affymetrix公司的MaizeGenomeArray