EQ ID NO 10 :PFPPLPIGEEAPKDDMVRFFKDLHQYLNW。
[0207] 本发明的另一个具体实施方案涉及药物组合物，其包含一种或多种如上所述的 CPP-IRF5肽或其可药用的盐，和一种或多种可药用的赋形剂。
[0208] 本发明的另一个具体实施方案涉及如上所述的CPP-IRF5肽或其可药用的盐，其 用作治疗活性物质。
[0209] 本发明的另一个具体实施方案涉及如上所述的CPP-IRF5肽或其可药用的盐，其 用于治疗或预防系统性红斑狼疮（SLE)或其他自体免疫性疾病，其中IRF5信号传导起显著 作用。
[0210] 本发明的另一个具体实施方案涉及用于治疗或预防系统性红斑狼疮（SLE)或其 他自体免疫性疾病的方法，其中IRF5信号传导起显著作用，该方法包括向对象施用如上所 述的CPP-IRF5肽或其可药用的盐。
[0211] 本发明的另一个具体实施方案涉及如上所述的CPP-IRF5肽或其可药用的盐用于 治疗或预防系统性红斑狼疮（SLE)或其中IRF5信号传导起显著作用的其他自体免疫性疾 病的用途。
[0212] 本发明的另一个具体实施方案涉及如上所述的CPP-IRF5肽或其可药用的盐用于 制备用于治疗或预防系统性红斑狼疮（SLE)或其中IRF5信号传导起显著作用的其他自体 免疫性疾病的药物的用途。
[0213] 本发明提供破坏IRF5二聚化/信号传导的化合物和该化合物的可药用的盐。
[0214] 在一般的实施方案中，化合物是结合IRF5的细胞穿透肽（CPP-IRF5肽）。
[0215] 在一个实施方案中，化合物是结合IRF5的细胞穿透肽（CPP-IRF5肽），其中所述肽 包含选自SEQ ID NO :4-10和13-14的氨基酸序列。
[0216] 在具体的实施方案中，所述氨基酸序列包含至少20个至约35个氨基酸。
[0217] 任选地，所述细胞穿透肽也可包含或连接到小分子。
[0218] 在一个具体的实施方案中，化合物是结合干扰素调节因子IRF5的细胞穿透肽 (CPP-IRF5)，其中所述肽包含至少20个至约35个氨基酸的氨基酸序列，其中所述氨基酸序 列还部分地包括选自以下的氨基酸序列基序
[0219] a)Y-Rl-R2-R3-L-R4-R5-V(SEQ ID NO :1)，
[0220] 其中Y是酪氨酸（Tyr)，R是选自色氨酸（Trp)或丙氨酸（Ala)的氨基酸，R2是选 自亮氨酸（Leu)或苏氨酸（Thr)的氨基酸，R3是选自亮氨酸（Leu)、丙氨酸（Ala)、天冬氨酸 (Asp)或苯丙氨酸（Phe)的氨基酸，L是亮氨酸（Leu)，R4是选自亮氨酸（Leu)、甘氨酸（G) 或苏氨酸（Thr)的氨基酸，R5是选自苯丙氨酸（Phe)、亮氨酸（Leu)或甲硫氨酸（Met)的氨 基酸，并且V是缬氨酸（Val);或
[0221] b)K-D-R6-M-V-R7-F-K-D(SEQ ID NO ：2),
[0222] 其中K是赖氨酸（Lys) ;D是天冬氨酸（Asp)，R6是选自亮氨酸（Leu)或天冬氨酸 (Asp)的氨基酸，M是甲硫氨酸（Met)，R7选自Q-W和R-F，F是苯丙氨酸（Phe)。
[0223] 在又一个具体的实施方案中，本发明提供了约8个至约35个氨基酸的分离的和 纯化的多肽，其结合人干扰素调节因子IRF5,其由第一肽和任选的第二肽组成，其中所述第 一肽包含SEQ ID NO : 12并且第二任选的第二肽包含约5至约20个氨基酸的细胞穿透肽 (CPP)。更优选地，多肽是SEQ ID NO: 13并且是细胞穿透的。
[0224] 在备选的具体实施方案中，本发明提供了约20个至约40个氨基酸的分离的和纯 化的多肽，其由第一肽和任选的第二肽组成，其中所述第一肽
[0225] i.包含至少20个氨基酸的氨基酸序列，
[0226] ii.具有结合IRF5和/或抑制IRF5二聚化的能力，
[0227] iii.和其中所述第一肽还部分地包含IxLxISxPxxKDxxVxxxK(SEQ IDNO : 15)的氨 基酸序列基序，其中X是任意氨基酸，
[0228] 和所述任选的第二肽是细胞穿透肽（CPP)。
[0229] 在又一个具体的实施方案中，本发明提供了至少20个至约40个氨基酸的分离的 和纯化的肽，其由第一和任选的第二多肽组成，其中所述第一肽
[0230] i.包含至少20个氨基酸的氨基酸序列，
[0231] ii.具有结合人干扰素调节因子5(IRF5)的能力，
[0232] iii.且其中所述第一肽部分地包含K-D-R6-M-V-R7-F-K-D的氨基酸基序（SEQ ID NO ：2)
[0233] 和任选的第二肽是细胞穿透肽（CPP)。
[0234] 在又一个具体的实施方案中，本发明提供SEQ ID NO 4-7和13-14,其是结合人干 扰素因子5(IRF5)的细胞穿透肽。备选地，本发明还提供了 SEQ ID NO 8-10,其具有结合干 扰素调节因子5(IRF5)的能力。
[0235] 在又一个具体的实施方案中，本发明提供了至少20个至约40个氨基酸的分离的 和纯化的肽，其由第一和任选的第二多肽组成，其中所述第一肽
[0236] i.包含至少20个氨基酸的氨基酸序列，
[0237] ii.具有结合人干扰素调节因子5(IRF5)的能力，
[0238] iii.且其中所述第一肽包含选自SEQ ID NO :8-10的氨基酸序列
[0239] 和任选的第二肽是细胞穿透肽（CPP)。
[0240] 本发明还提供了用于筛选抑制IRF5的肽或小分子，或组合或肽-小分子的方法或 测定法，其包括以下步骤：
[0241] a)提供待测试的肽，小分子或肽-小分子
[0242] b)在溶液中稀释所述肽（或小分子或肽-小分子）
[0243] c)制备包含生物素-IRF5和His_IRF5的第一缓冲液，其中各IRF-5是单体和二聚 体的混合物
[0244] d)使步骤b)的稀释的肽溶液与步骤c)的缓冲液组合，并在室温下孵育
[0245] e)制备含有荧光供体（如Eu (铕标记的）缀合的链霉亲和素）和作为荧光受体的 APC (别藻蓝蛋白）标记的抗His抗体的第二缓冲液，用于检测生物素-IRF5和His-IRF5二 聚体形成
[0246] f)使步骤e)的第二缓冲溶液与步骤d)的组合的溶液组合，并在约4°C下孵育约 1天
[0247] 并通过FRET测定法确定二聚体形成，其中与对照组相比降低的FRET信号显示了 由肽（或小分子或肽-小分子）抑制IRF5二聚体形成（参见例如表1，FRET测定法和SEQ ID NO :4-7,13-14 和 16-21 的 IC50 结果）。
[0248] 更具体地说，IRF5选自突变体S430D (222-467)和野生型IRF5 (222-467)。
[0249] 本发明公开了是结合IRF5的细胞穿透肽的化合物（CPP-IRF5)，其中所述肽包含 选自SEQ ID NO :4-10,13和14的氨基酸序列。
[0250] 在具体的实施方案中，所述氨基酸序列包含至少20个至约40个氨基酸，更特别地 仍约至少20个至约35个氨基酸。
[0251] 在具体的实施方案中，化合物是结合干扰素调节因子IRF5的细胞穿透肽 (CPP-IRF5)，其中所述肽包含至少20个至约35个氨基酸的氨基酸序列，其中所述氨基酸序 列还部分地包含选自以下的氨基酸序列基序
[0252] a)Y-Rl-R2-R3-L-R4-R5-V(SEQ ID NO :1)，
[0253] 其中Y是酪氨酸（Tyr)，Rl是选自色氨酸（Trp)或丙氨酸（Ala)的氨基酸，R2是 选自亮氨酸（Leu)或苏氨酸（Thr)的氨基酸，R3是选自亮氨酸（Leu)、丙氨酸（Ala)、天冬 氨酸（Asp)或苯丙氨酸（Phe)的氨基酸，L是亮氨酸（Leu)，R4是选自亮氨酸（Leu)、甘氨酸 (G)或苏氨酸（Thr)的氨基酸，R5是选自苯丙氨酸（Phe)、亮氨酸（Leu)或甲硫氨酸（Met) 的氨基酸，并且V是缬氨酸（Val);或
[0254] b)K-D-R6-M-V-R7-F-K-D(SEQ ID NO ：2),
[0255] 其中K是赖氨酸（Lys) ;D是天冬氨酸（Asp)，R6是选自亮氨酸（Leu)或天冬氨酸 (Asp)的氨基酸，M是甲硫氨酸（Met)，R7选自Q-W和R-F，并且F是苯丙氨酸（Phe)。
[0256] 在更具体的实施方案中，本发明的细胞穿透肽具有 MANLG-Y-R1-R2-R3-L-R4-R5-V(SEQ ID N0:3)的氨基酸序列基序。更优选，肽包含选自SEQ ID NO 4-7的氨基酸序列。
[0257] 在又一个具体的实施方案中，本发明提供了至少20个至约40个氨基酸的分离的 和纯化的肽，其由第一和任选的第二多肽组成，其中所述第一肽
[0258] i.包含至少20个氨基酸的氨基酸序列，
[0259] ii.具有结合人干扰素调节因子5(IRF5)的能力，
[0260] iii.且其中第一肽部分地包含选自K-D-R6-M-V-R7-F-K-D(SEQ IDN0:2)的氨基 酸基序
[0261] 和任选的第二肽是细胞穿透肽（CPP)。
[0262] 在又一个具体的实施方案中，本发明提供了 SEQ ID NO. 4-7和13-14,其是结合 人干扰素因子5 (IRF5)的细胞穿透肽。备选地，本发明还提供了具有结合干扰素调节因子 5(IRF5)的能力的 SEQ ID NO 8-10。
[0263] 在又一个具体的实施方案中，本发明提供了至少20个至约40个氨基酸的分离的 和纯化的肽，其由第一和任选的第二多肽组成，其中所述第一肽
[0264] i.包含至少20个氨基酸的氨基酸序列，
[0265] ii.具有结合人干扰素调节因子5(IRF5)的能力，
[0266] iii.且其中第一肽包含选自SEQ ID NO:8-10的氨基酸序列
[0267] 和任选的第二肽是细胞穿透肽（CPP)。
[0268] 在又一个具体的实施方案中，本发明提供了约8个至约35个氨基酸的分离的和纯 化的多肽，其结合人干扰素调节因子IRF5,由第一肽和任选的第二肽组成，其中所述第一肽 包含SEQ ID NO: 12和第二任选的第二肽包含约5个至约20个氨基酸的细胞穿透肽（CPP)。 更优选地，多肽是SEQ ID NO : 13并且是细胞通透的。
[0269] 在备选的具体实施方案中，本发明提供了约20个至约40个氨基酸的分离的和纯 化的多肽，其由第一肽和任选的第二肽组成，其中所述第一肽
[0270] i.包含至少20个氨基酸的氨基酸序列，
[0271] ii.具有结合IRF5和/或抑制IRF5二聚化的能力，
[0272] iii.并且其中所述第一肽还部分地包含IxLxISxPxxKDxxVxxxK(SEQ ID NO :15) 的氨基酸序列基序，其中X是任何氨基酸，
[0273] 和所述任选的第二肽是细胞穿透肽。
[0274] 更具体地说，本发明的肽由以下细胞穿透肽组成：
[0275] SEQ ID NO 13 JRLQlSNPYLKFIPLKRAIffLIK
[0276] SEQ ID NO 14 ：MI ILI ISFPKHKDffKVILVK
[0277] SEQ ID NO 4 ：MANLGYffLLLLFVTMWTDVGLAKKRPKP
[0278] SEQ ID NO 5 ：MANLGYffLALLFVTMWTDVGLFKKRPKP
[0279] SEQ ID NO 6 ：MANLGYffLLALFVTYffTDLGLVKKRPKP
[0280] SEQ ID NO 7 ：MANLGYffLYALFLTMVTDVGLFKKRPKP
[0281] 备选地，本发明的肽由以下结合干扰素调节因子5的肽组成：
[0282] SEQ ID NO 8 ：KDLMVQWFKDGGPSSGAPPPS
[0283] SEQ ID NO 9 ：IRLQISNPDLKDLMVQWFKDGGPSSGAPPPS
[0284] SEQ ID NO 10 ：PFPPLPIGEEAPKDDMVRFFKDLHQYLNVV
[0285] 本发明还提供了用于筛选抑制IRF5的肽或小分子或组合或肽-小分子的方法或 测定法，包括以下步骤：
[0286] a)提供待测试的肽、小分子或肽-小分子，
[0287] b)在溶液中稀释所述肽（或小分子或肽-小分子）
[0288] c)制备含有生物素-IRF5和His_IRF5的第一缓冲液，其中各IRF-5是单体和二聚 体的混合物
[0289] d)将步骤b)的稀释的肽溶液与步骤c)的缓冲液组合，并在室温下孵育
[0290] e)制备含有荧光供体（如Eu缀合的链霉亲和素）和作为荧光受体的APC (别藻蓝 蛋白）标记的抗His抗体的第二缓冲液，用于检测生物素-IRF5和His-IRF5二聚体形成。 该测定法可用于任何2个不同的标签蛋白（例如GST标签，FLAG标签，HA-标签，Myc-标签， SBP标签或V标签）。此外，任何荧光供体/受体对适合在该测定法中使用，只要该供体的 荧光发射光谱与受体的激发光谱重叠。供体/受体染料的一些优选的例子是Tb/FITC，Ru/ Alexa，FITC/TAMRA和Eu/DyLight。虽然下面的实施例利用用于二聚体形成的标签蛋白和 荧光缀合相应的抗体或链霉亲和素来检测，该测定方法也可以通过用供体染料和受体染料 直接标记蛋白质进行，并由FRET信号测量二聚体形成。如果带标签的融合蛋白或抗体结合 影响二聚体的相互作用，则这种形式可以是特别有用的。
[0291] f)将步骤e)的第二缓冲液与步骤d)的组合的溶液组合，并在约4°C下孵育约1 天
[0292] 并通过FRET测定法确定二聚体形成，其中与对照组相比降低的FRET信号显示由 肽（或小分子或肽-小分子）抑制IRF5二聚体形成（参见，例如，表1，显示IC50结果的 FRET数据）。
[0293] 更具体地说，IRF5选自突变体S430D (222-467)和野生型IRF5 (222-467)。
[0294] 本发明的化合物可以通过用于氨基酸之间肽键形成的任何已知的常规方法容易 地合成。这些常规方法包括，例如，允许在一个氨基酸或其片段（其羧基基团和其他反应性 基团已被保护）的游离α氨基基团与另一个氨基酸或其片段（其氨基基团或其他反应性 基团已被保护）的游离一级（primary)羧基基团之间缩合的任何液相方法。
[0295] 用于合成本发明的新型化合物的这些常规方法包括，例如，任何固相肽合成 方法。在此类方法中，可以根据固相方法的一般原则，通过顺序地将期望的氨基酸残 基一次一个地掺入到正在生长的肽链中，实现新型化合物的合成。此类方法公开在 例如 Merrifield，R.B.，J· Amer. Chem. Soc. 85, 2149-2154(1963) ;Barany 等人，The Peptides, Analysis, Synthesis and Biology,第 2 卷，Gross, E. and Meienhofer, J.编著， Academic Press 1-284(1980)，这些文献并入本文作为参考。
[0296] 在肽合成期间，可能期望，氨基酸上的某些反应性基团，例如α-氨基基团、羟基 基团，和/或反应性侧链基团，被保护，以防止与它们发生化学反应。这可以例如通过用保 护基团与反应性基团反应而实现，所述保护基团可以之后移除。例如，一个氨基酸或其片段 的α氨基基团可以被保护以防止与之发生化学反应，而该氨基酸或其片段的羧基基团可 以与另一氨基酸或其片段反应以形成肽键。这之后可以选择性地去除α氨基保护基团以 允许在该位置随后发生反应，例如与另一氨基酸或其片段的羧基基团发生反应。
[0297] α氨基基团可以例如通过选自如下的合适保护基团保护：芳族氨基甲酸酯类保 护基团，例如烯丙基氧羰基、苄氧羰基（Z)和取代的卞氧羰基，例如对氯卞氧羰基、对硝基 卞氧羰基、对溴卞氧羰基、对-二苯基-异丙基氧羰基、9-芴基甲氧羰基（Fmoc)和对甲氧基 卞氧羰基（Moz);脂肪族氨基甲酸酯类保护基团，例如叔丁氧羰基（Boc)、二异丙基甲氧羰 基、异丙基氧羰基，和烯丙基氧羰基。在一个实施方案中，Fmoc用于α氨基保护。
[0298] 氨基酸的羟基基团（OH)可以例如通过选自如下的合适保护基团保护：苄基 出21)、2,6-二氯苄