。
[0026] 表1碳源对产酶的影响
3. 6氮源对菌株FA2-3产酶的影响： 〇. 5%的氮源（0. 5%，硫酸铵，硝酸钠，豆柏粉，鱼粉蛋白胨，胰蛋白胨，干酪素，鱼粉，花 生柏，尿素)分别替换产酶培养基中的蛋白胨，其余条件同3. 1，测酶活。结果见表2,酵母菌 在以花生柏为氮源的培养基中产酶最多。
[0027] 表2氮源对菌株产酶的影响
四、低温右旋糖苷酶的性质 4. 1粗酶液的制备： 将种子液4%接种至产酶培养基中，25°C，150r/min培养20h，10000r/min离心lOmin， 取上清液即为低温淀粉酶粗酶液。
[0028] 4. 2酶作用温度对酶活性的影响： 将低温淀粉酶置于不同温度（0 °C、25 °C、30 °C、35 °C、40 °C、45 °C、50°C)下与底物发生反 应，测定酶活力。酶的最适作用温度为30°C，在0°C下仍有酶活力，说明该酶是低温酶。结 果见图11。
[0029] 4. 3酶的热稳定性： 取适量酶液分别在不同温度（30°C、40°C和50°C)下保温l_5h，每隔lh取出一组样品， 迅速置于4°C冰箱内，待保温结束后统一在标准条件下测定残余酶活，以未处理酶液的酶活 设为100%。该酶在30°C下具有很好的热稳定性，在5h仍有85. 8%的酶活力，见图12。
[0030] 4. 4酶的作用pH对酶活性的影响： 用不同pH(4.0、5.0、6.0、7.0、8.0、9.0、10.0、11.0)的伯瑞坦-罗宾森 (Britton-Robinson)缓冲溶液配置含1%的淀粉溶液作为底物，在30°C的水浴中测定不同 pH下的淀粉酶酶活力。pH8. 0该酶的活性最高，见图13。
[0031] 4. 5酶的pH稳定性： 将酶液与不同pH的伯瑞坦-罗宾森（Britton-Robinson)缓冲溶液混合，pH分别为 3. 0、4. 0、5. 0、6. 0、7. 0、8. 0、9. 0、10. 0,在30°C水浴锅中保温lh取出测定残余酶活，将未 处理酶液的酶活设为100%。在PH4. 0-9. 0之间酶都能保持80%以上的较高酶活力，见图14。
[0032] 4. 6金属离子、化学试剂对酶的作用： 将各种金属离子与酶液混合，使其最终浓度达到5.OmM，然后在30°C下测酶活，Ba2+、Ca2+、Mg2+和Sr2+对酶有激活作用。NH4+、Cu2+、Co2+对酶有不同程度的抑制作用，见表3。
[0033] 表3金属离子对酶活力的影响
4. 7低温淀粉酶活测定： 将50yL酶液加入到150yL1%的可溶性淀粉Tris-HCl缓冲液（50mmol/L，pH8. 0) 中，在30°C水浴中反应15min，用DNS法测定还原糖量。酶活力单位定义（U/mL):在一定 温度和pH下，每分钟催化产lumoL还原糖的酶量为一个活力单位。
[0034] 与现有技术相比，本发明提供了一种新的来自海洋的亚罗酵母（sp.) FA2-3,该菌株可以产低温淀粉酶，所产酶性质稳定，酶活性好，可以用于现有技术常规低温 淀粉酶的应用场合，包括食品行业、饲料行业和环境治理行业。
【附图说明】
[0035] 图1为菌株FA2-3形态（X10 000)图； 图2为菌株FA2-3系统进化树图； 图3为时间对菌株FA2-3生长的影响图； 图4为温度对菌株FA2-3生长的影响图； 图5为pH对菌株FA2-3生长的影响图； 图6为NaCl浓度对菌株FA2-3生长的影响图； 图7为时间对菌株FA2-3发酵产酶的影响图； 图8为温度对菌株FA2-3发酵产酶的影响图； 图9为pH对菌株FA2-3发酵产酶的影响图； 图10为NaCl浓度对菌株FA2-3发酵产酶的影响图； 图11为温度对酶活力的影响图； 图12为酶的热稳定性图； 图13为pH对酶活力的影响图； 图14为酶的pH稳定性图。
【具体实施方式】
[0036] 以下进一步描述本发明的具体技术方案，以便于本领域的技术人员进一步地理解 本发明，而不构成对其权利的限制。
[0037] 实施例1，一种来自海洋的亚罗酵母sp. )FA2-3，CGMCCN0. 10377。该 菌株具有以下特征：菌株FA2-3为长椭圆形，单个分散，出芽生殖（见图1)。菌落呈白色，边 缘整齐。菌株FA2-3生长特性为：该菌株生长温度范围为15-35°C，最适生长温度为30°C; 生长pH范围为5. 0 - 10. 0,最适生长pH为7. 0 ;菌株在NaCl浓度为0%-8%范围内能生长， 最适生长的NaCl浓度为0. 5%。 实施例2, 一种如实施例1所述的来自海洋的亚罗酵母FA2-3产低温淀粉酶的方法，其 步骤如下：将亚罗酵母FA2-3斜面种子接种到YH)培养基中，30°C，150r/min，装液量 20%，培养12h，得种子液；将种子液以4%的接种量接种于产酶培养基中，150r/min，25°C培 养20h，10000r/min离心5min，取上清液即为低温淀粉酶粗酶液。
[0038] 实施例3, 一种如实施例2中所述的来自海洋的亚罗酵母FA2-3产低温淀粉酶的 方法所产低温淀粉酶，所述的低温淀粉酶的性质为：低温淀粉酶的最适作用温度为30°C， 在〇°C下仍有酶活力；最适作用pH为8. 0。该酶在30°C下具有很好的热稳定性，在5h仍有 85. 8%的酶活力，在pH4. 0-9. 0该酶稳定；Ba2+、Ca2+、Mg2+和Sr2+对酶有激活作用，NH4+、Cu2+、 Co2+对酶有不同程度的抑制作用。
【主权项】
1. 一种来自海洋的亚罗酵母（7arroria sp. ) FA2-3,其特征在于：其保藏号为CGMCC NO. 10377。2. -种如权利要求1所述的来自海洋的亚罗酵母（7arroria sp. )FA2-3产低温淀粉酶 的方法，其特征在于，其步骤如下：将亚罗酵母（/ar/wia sp. ) FA2-3斜面种子接种到YPD 培养基中，30°C，150 r/min，装液量20%，培养12 h，得种子液；将种子液以4%的接种量 接种于产酶培养基中，150r/min，25°C培养20h，lOOOOr/min离心5min，取上清液即为低温 淀粉酶粗酶液；所述的YH)培养基为：酵母膏1%，蛋白胨2%，葡萄糖2%，琼脂2%，陈海水配 制，pH 7. 0 ;所述的产酶培养基为：马铃薯淀粉0. 5%，花生柏0. 5%，NaCl 0. 5%，pH 7. 0。3. -种如权利要求2所述的方法所产低温淀粉酶，其特征在于：所述的低温右旋糖 酐酶的性质为：低温淀粉酶的最适作用温度为30°C，在0°C下仍有酶活力；最适作用pH为 8. 0 ;该酶在30°C下具有很好的热稳定性，在5h仍有85. 8%的酶活力，在pH4. 0-9. 0该酶 稳定；Ba2+、Ca2+、Mg2+和Sr 2+对酶有激活作用，NH4+、Cu2+、Co2+对酶有不同程度的抑制作用。
【专利摘要】本发明是一种来自海洋的亚罗酵母（Yarrowia sp.）FA2-3，CGMCC N0. 10377。菌株FA2-3为长椭圆形，单个分散，出芽生殖。菌落呈白色，边缘整齐。该菌株生长温度范围为15-35℃，最适生长温度为30℃；生长pH范围为5.0?10.0，最适生长pH为7.0；菌株在NaCl浓度为0%-8%范围内能生长，最适生长的NaCl浓度为0.5%。本发明还公开了一种利用菌株FA2-3产低温淀粉酶的方法和按该方法得到的低温淀粉酶产品。该低温淀粉酶在饲料、环保等领域具有广泛的应用前景。CGMCC No. 1037720150120
【IPC分类】C12N9/30, C12N1/16, C12R1/645
【公开号】CN104962486
【申请号】CN201510436669
【发明人】吕明生, 王淑军, 李秋潼, 任伟, 房耀维, 刘姝, 焦豫良
【申请人】淮海工学院, 连云港市环境监测中心站
【公开日】2015年10月7日
【申请日】2015年7月23日