Myoz1基因及其表达产物在帕金森病诊治中的应用
【技术领域】
[0001] 本发明涉及生物技术领域，具体地涉及人MYOZ1基因在帕金森病诊断、治疗中的 用途。
【背景技术】
[0002] 帕金森病是一种常见的神经系统变性疾病，多见于老年人，平均发病年龄为60岁 左右。我国65岁以上人群帕金森的患病率大约是1. 7%。大部分的帕金森患者为散发病 例，男性稍多于女性。该病最主要的病理改变是中脑黑质多巴胺能神经元的变性死亡，由此 引起纹状体多巴胺含量显著减少而致病。帕金森病是一种慢性进展性疾病，具有高度异质 性，目前尚不能治愈。严重者可全身僵硬，生活不能自理，甚至长期卧床，最终多死于肺炎等 并发症。
[0003] 帕金森病的诊断主要依靠病史、临床症状及体征。由于缺乏疾病特异性生物标志 物和有效的实验室辅助检测方法，所以帕金森病在临床前期无法检测。当该病发展到临床 期时，患者中脑多巴胺神经元蜕变已达70%。因此早诊早治是目前改善帕金森病患者长期 生存的最佳途径。帕金森病的辅助检测方法如99mTc-TRODAT-l等作为示踪剂行多巴胺转 运体功能显像可支持诊断，但是检查费用较贵，难以在临床大规模地推广。因此寻找一种特 异和敏感的诊断方法愈发重要。
【发明内容】
[0004] 为了弥补现有技术的不足，本发明的目的在于提供一种可用于帕金森病诊断的分 子标志物MYOZ1基因。相比传统的帕金森病的诊断方法，使用基因标志物来诊断帕金森病 具有及时性、特异性和灵敏性，从而使患者在早期就能知晓疾病风险，针对风险高低，采取 相应的预防和治疗措施。
[0005] 为了实现上述目的，本发明采用如下技术方案：
[0006] 本发明提供了一种人MYOZ1基因及其表达产物在制备诊断帕金森病的产品中的 应用。
[0007] 进一步，上面所提到的诊断产品包括：通过RT-PCR、实时定量PCR、免疫检测、原位 杂交或芯片检测MYOZ1基因及其表达产物的表达水平以诊断帕金森病的产品。
[0008] 进一步，所述用RT-PCR诊断帕金森病的产品至少包括一对特异扩增MYOZ1基因的 引物；所述用实时定量PCR诊断帕金森病的产品至少包括一对特异扩增MYOZ1基因的引物； 所述用免疫检测诊断帕金森病的产品包括：与MYOZ1蛋白特异性结合的抗体；所述用原位 杂交诊断帕金森病的产品包括：与MYOZ1基因的核酸序列杂交的探针；所述用芯片诊断帕 金森病的产品包括：蛋白质芯片和基因芯片；其中，蛋白质芯片包括与MYOZ1蛋白特异性结 合的抗体，基因芯片包括与MYOZ1基因的核酸序列杂交的探针。
[0009] 优选地，所述产品包括芯片、试剂盒。
[0010] 本发明还提供了人MYOZ1基因在高通量测序平台中的应用。随着高通量测序技 术的发展，构建人的基因表达谱将成为十分便捷的工作。通过对比疾病患者和正常人群的 基因表达谱，容易分析出哪个基因的异常与疾病相关。因此，在高通量测序中获知人MY0Z1 基因的表达异常与帕金森病相关也属于人MY0Z1基因的用途，同样在本发明的保护范围之 内。
[0011] 本发明还提供了一种诊断帕金森病的产品，所述产品包括但不限于芯片、试剂盒。
[0012] 其中，所述芯片包括基因芯片、蛋白质芯片；所述基因芯片包括固相载体以及固定 在固相载体上的寡核苷酸探针，所述寡核苷酸探针包括用于检测MYOZ1基因转录水平的针 对MYOZ1基因的寡核苷酸探针；所述蛋白质芯片包括固相载体以及固定在固相载体上的 MYOZ1蛋白的特异性抗体。所述基因芯片可用于检测包括人MYOZ1基因在内的多个基因（例 如与帕金森病相关的多个基因）的表达水平。所述蛋白质芯片可用于检测包括人MYOZ1蛋 白在内的多个蛋白质（例如与帕金森病相关的多个蛋白质）的表达水平。通过将多个帕金 森病的标志物同时检测，可大大提高帕金森诊断的准确率。
[0013] 其中，所述试剂盒包括基因检测试剂盒和蛋白免疫检测试剂盒；所述基因检测试 剂盒包括用于检测MYOZ1基因转录水平的试剂；所述蛋白免疫检测试剂盒包括MYOZ1蛋白 的特异性抗体。
[0014] 进一步，所述试剂包括使用RT-PCR、实时定量PCR、免疫检测、原位杂交或芯片方 法检测MYOZ1基因表达水平的试剂。优选地，所述试剂包括针对MYOZ1基因的引物和/或 探针。根据MYOZ1核苷酸序列信息容易设计出可以用于检测MYOZ1基因表达水平的引物和 探针。
[0015] 进一步，与MYOZ1基因的核酸序列杂交的探针可以是DNA、RNA、DNA-RNA嵌合体、 PNA或其它衍生物。所述探针的长度没有限制，只要能完成特异性杂交、与目的核苷酸序列 特异性结合，任何长度都可以。所述探针的长度可短至25、20、15、13或10个碱基长度。同 样，所述探针的长度可长至60、80、100、150、300个碱基对或更长，甚至整个基因。由于不同 的探针长度对杂交效率、信号特异性有不同的影响，所述探针的长度通常至少是14个碱基 对，最长一般不超过30个碱基对，与目的核苷酸序列互补的长度以15-25个碱基对最佳。所 述探针自身互补序列最好少于4个碱基对，以免影响杂交效率。
[0016] 进一步，所述MYOZ1蛋白的特异性抗体包括单克隆抗体、多克隆抗体。所述MYOZ1 蛋白的特异性抗体包括完整的抗体分子、抗体的任何片段或修饰（例如，嵌合抗体、scFv、 Fab、F(ab'）2、Fv等。只要所述片段能够保留与MYOZ1蛋白的结合能力即可。用于蛋白质 水平的抗体的制备是本领域技术人员公知的，并且本发明可以使用任何方法来制备所述抗 体。
[0017] 本发明还提供了人MYOZ1基因及其表达产物在制备治疗帕金森病的药物中的应 用。
[0018] 进一步，所述药物的主要活性成分包括抑制MYOZ1基因表达的物质、影响MYOZ1基 因表达产物稳定性的物质、和/或抑制MYOZ1基因表达产物活性的物质。
[0019] 进一步，本发明所述的治疗帕金森病的药物包括：通过干扰RNA抑制MYOZ1基因表 达的双链核糖核酸，或基于MYOZ1抗原蛋白的肿瘤疫苗、或用于抑制MYOZ1蛋白活性的蛋白 质。
[0020] 本发明还提供了一种用于治疗帕金森病的药物组合物，所述药物组合物包含 MY0Z1基因和/或其表达产物抑制剂。所述抑制剂包括抑制MY0Z1基因表达的物质、抑制MY0Z1基因表达产物稳定性的物质、和/或抑制MY0Z1基因表达产物活性的物质。
[0021] 进一步，本发明所述抑制剂包括：通过干扰RNA抑制MY0Z1基因表达的双链核糖核 酸，或基于MY0Z1抗原蛋白的肿瘤疫苗、或用于抑制MY0Z1蛋白活性的蛋白质。
[0022] 在本发明中，所述RNA干扰（RNAinterference，RNAi)是指内源性或外源性双链 RNA(double-strandedRNA，dsRNA)介导的细胞内mRNA发生特异性降解，从而导致革E1基因 的表达沉默，产生相应的功能表型缺失的现象。RNAi技术是一种典型的负调控机制，使用该 技术可以特异性剔除或关闭特定基因的表达，该技术已被广泛用于探索基因功能、基因治 疗及新药开发领域。以细胞为基础的RNAi筛选在功能基因学研宄方面具有许多优势，主要 表现在大多数细胞类型都能使用RNAi方法，并且相对较容易下调或沉默目的基因的表达。
[0023] 为了确保MY0Z1基因能够被高效剔除或沉默，根据MY0Z1基因的mRNA序列设计 了siRNA特异性片段。siRNA的设计根据已发表的通用设计原则（Elbashiret.al2001， Schwarzet.al2003,Khvorovaet.al2003,Reynoldset.al2004,Hsiehet.al2004, Ui-Teiet.al2004)，通过在线工具完成设计，该在线工具为：siRNASelectionProgram ofWhiteheadInstitute(BingbingYuanet.al2004,http://jura.wi.mit.edu/bi°C/siRNAext/)和BL°CK-iTTMRNAiDesigneroflNVITROGEN(winnerofthe 2004Frost&Sul1ivanExcell