制霉菌素的提纯方法
【技术领域】
[0001] 本发明涉及抗生素的提纯方法，具体地，涉及一种制霉菌素的提纯方法。
【背景技术】
[0002] 制霉菌素是一种具有共辄多烯大环内酯结构的多烯型抗生素，主要用于内服治疗 消化道真菌感染或外用于表面皮肤真菌感染炎、鸡和火鸡哺囊真菌病等，对曲霉菌、毛霉菌 引起的乳腺炎，乳管灌注也有效。是一种常用的抗生素。
[0003]目前，现有技术制备的制霉菌素主要是通过发酵诺尔斯链霉菌，提纯诺尔斯链霉 菌的发酵液制成，现有的提纯主要是单纯的利用乙醇对制霉菌素进行萃取，这种提纯方法 不能除去诺尔斯链霉菌的发酵液中存在的很多杂质，从而使得提取的制霉菌素纯度较低， 极大的降低了制霉菌素的药效。
【发明内容】
[0004] 本发明的目的是提供一种制霉菌素的提纯方法，通过该方法提纯的制霉菌素具有 优异的纯度，且提纯过程简便易行，成本低廉。
[0005] 为了实现上述目的，本发明提供了一种制霉菌素的提纯方法，该提纯方法包括：
[0006] (1)将醇加入诺尔斯链霉菌发酵液中进行萃取取上层液体得到萃取液Ml;
[0007] (2)将所述萃取液Ml蒸发制得沉淀物M2 ;
[0008] (3)将所述沉淀物M2置于丙酮溶液中热处理制得混合物M3 ;
[0009] (4)将所述混合物M3第一冷却后取上清液并过滤得到沉淀物M4 ;
[0010] (5)将所述沉淀物M4置于焦磷酸盐的异丁醇溶液中加热制浆得到混合物M5 ;
[0011] (6)将所述混合物M5第二冷却至25 °C、过滤制得制霉菌素。
[0012] 通过上述技术方案，本发明将诺尔斯链霉菌发酵液在醇中进行萃取反应，蒸发萃 取剂得到沉淀物，再将沉淀物置于丙酮溶液中进行热处理，将得到的混合物冷却静置，取上 清液并过滤，接着将过滤产物在焦磷酸盐的异丁醇水溶液中加热制浆，最后将浆液冷却、过 滤得到纯度较高的制霉菌素，通过上述提纯方法制得了高纯度的制霉菌素。
[0013] 本发明的其他特征和优点将在随后的【具体实施方式】部分予以详细说明。
【具体实施方式】
[0014] 以下对本发明的【具体实施方式】进行详细说明。应当理解的是，此处所描述的具体 实施方式仅用于说明和解释本发明，并不用于限制本发明。
[0015] 本发明提供了一种制霉菌素的提纯方法，该提纯方法包括：
[0016] (1)将醇加入诺尔斯链霉菌发酵液中进行萃取取上层液体得到萃取液Ml;
[0017] (2)将所述萃取液Ml蒸发制得沉淀物M2 ;
[0018] (3)将所述沉淀物M2置于丙酮溶液中热处理制得混合物M3 ;
[0019] (4)将所述混合物M3第一冷却后取上清液并过滤得到沉淀物M4 ;
[0020] (5)将所述沉淀物M4置于焦磷酸盐的异丁醇溶液中加热制浆得到混合物M5 ;
[0021] (6)将所述混合物M5第二冷却至25°C、过滤制得制霉菌素。
[0022] 上述提纯方法将诺尔斯链霉菌发酵液在醇中进行萃取反应，蒸发萃取剂得到沉淀 物，再将沉淀物置于丙酮溶液中进行热处理，将得到的混合物冷却静置，取上清液并过滤， 将过滤产物在焦磷酸盐的异丁醇水溶液中加热制浆，将浆液冷却至25°C后过滤得到纯度较 高的制霉菌素，通过上述提纯方法制得了高纯度的制霉菌素。
[0023] 在上述提纯方法中，醇可以在宽的范围内选择，可以是C1-C6中的任意一种醇，为 了能溶解更多的制霉菌素，优选地，醇为正丙醇、异丙醇、甲醇中的一种或多种。
[0024] 同样地，醇和诺尔斯链霉菌发酵液的用量的用量均可以在宽的范围内选择，为了 使萃取反应进行的更快，优选地，相对于100体积份的醇，所述诺尔斯链霉菌发酵液的用量 为45-55体积份。
[0025] 当然，对萃取反应的温度、时间均不作进一步限定，为了使萃取反应进行的更快， 优选地，萃取反应至少满足以下条件：反应温度为25-40°C，反应时间为l_3h。
[0026] 同样地，蒸发的温度和时间均可以在宽的范围内选择，为了能更快的除去萃取剂， 优选地，蒸发满足以下条件：蒸发温度为100-120°C，蒸发时间为l-2h。
[0027] 同时，沉淀物M2和丙酮溶液的用量均可以在宽的范围内选择，为了去除更多的杂 质，优选地，相对于100重量份的沉淀物M2,所述丙酮溶液的用量为250-350重量份。
[0028] 在上述提纯方法中，丙酮溶液的浓度和溶剂均不作进一步的限定，为了使制得的 制霉菌素具有较高的浓度，优选地，丙酮溶液为丙酮水溶液，并且含有33-55重量％的丙 酮。
[0029] 同样地，步骤（3)中热处理的温度和时间均可以在宽的范围内选择，为了使制得 的制霉菌素具有较高的浓度，优选地，热处理的条件为：加热温度为35-45°C，加热时间为 30-60min〇
[0030] 同时，步骤（4)中第一冷却的温度和时间可以在宽的范围内选择，为了使沉淀物 加快析出，优选地，第一冷却的条件为：冷却温度为15_25°C，冷却时间为30-60min。
[0031] 当然，沉淀物M4和焦磷酸盐的异丁醇溶液的用量可以在宽的范围内选择，为了使 制得的制霉菌素具有较高的浓度，优选地，相对于100重量份的所述沉淀物M4,所述焦磷酸 盐的异丁醇溶液的用量为150-250重量份。
[0032] 同样，焦磷酸盐的种类可以在宽的范围内选择，可以是焦磷酸钾、焦磷酸钠、焦磷 酸钙和酸式焦磷酸钠中的一种或多种，为了使制得的制霉菌素的浓度更高，优选地，磷酸盐 选自焦磷酸钾、焦磷酸钠和焦磷酸钙中的一种或多种。
[0033] 另外，焦磷酸盐的异丁醇溶液中焦磷酸盐浓度可以在宽的范围内选择，优选地，焦 磷酸盐的异丁醇溶液中焦磷酸盐浓度为5-15重量％。
[0034] 在上述提纯方法中，步骤（5)中加热的温度和时间均未做进一步限定，为了使制 得的制霉菌素具有较高的浓度，优选地，步骤（5)中加热的条件为：加热温度为50-70°C，加 热时间为40-80min。
[0035] 以下将通过实施例对本发明进行详细描述。以下实施例中，诺尔斯链霉菌发酵液 为沈阳华飞有限公司的市售品，丙酮溶液为中润化工有限公司的市售品，焦磷酸盐购自银 河化工科技有限公司，异丁醇购自惠丰化工有限公司。制霉菌素的纯度（w)通过分光光度 法测定而得。
[0036] 实施例1
[0037] (1)在35°C下，将正丙醇加入诺尔斯链霉菌发酵液中（体积比为100 :50)，萃取2h 后取上层液体得到萃取液Ml;
[0038] (2)在IKTC下，蒸发萃取液M12h以制得沉淀物M2 ;
[0039] (3)在40°C下，将沉淀物M2置于40重量％的丙酮溶液（质量比为100 :300)中热 处理40min制得混合物M3 ;
[0040] (4)将混合物M3在20°C下第一冷却40min，取上清液并过滤得到沉淀物M4 ;
[0041] (5)在60°C下，将沉淀物M4置于10重量％的焦磷酸钾的异丁醇溶液（质量比为 100 :200)中加热60min制浆得