在EtOAc中，经饱和K2C03，饱和食盐水洗涤，Na2S04 干燥，浓缩得到粗制品。经柱层析纯化得到淡黄色固体4。
[0058] 3.化合物5的合成
[0059] 将NaBD4 (0? 50mmol)于0°C加入到化合物4 (0? 25mmol)的4mL甲醇溶液中，30°C搅 拌0.5小时后，旋去溶剂。将残留物溶于2mol/L盐酸溶液（2mL)中，室温搅拌10分钟。加 入饱和1(20)3溶液调节pH为7。反应液用CH2C12提取3次，合并有机层。有机层经饱和食 盐水洗涤，Na2S04干燥，浓缩，再经柱层析纯化得到淡黄色固体5,收率94%，纯度98%。
[0060] 实施例3
[0061] 化合物5的合成
[0062] 将LiAlD4(0. 50mmol)于-20°C加入到化合物4(0. 25mmol)的2mL四氢呋喃溶液中， 〇°C搅拌1小时后，旋去溶剂。将残留物溶于2mol/L盐酸溶液（2mL)中，室温搅拌10分钟。 过滤，滤液经乙酸乙酯提取3次，合并有机层。有机层依次经饱和K2C03溶液、饱和食盐水洗 涤，Na2S04干燥，浓缩，再经柱层析纯化得到淡黄色固体5,收率92%，纯度98%。
[0063] 实施例4
[0064] 化合物5的合成
[0065] 将LiAlD4 (0? 50mmol)于-20°C加入到化合物 4 (0? 25mmol)的 4mL乙醚溶液中，0°C 搅拌1小时后，旋去溶剂。将残留物溶于2mol/L盐酸溶液（2mL)中，室温搅拌10分钟。过 滤，滤液经乙酸乙酯提取3次，合并有机层。有机层依次经饱和K2C03溶液、饱和食盐水洗 涤，Na2S04干燥，浓缩，再经柱层析纯化得到淡黄色固体5,收率93%，纯度98%。
[0066] 为了说明本发明的有益效果，本发明提供以下试验例。
[0067] 试验例1、本发明化合物的体外ID0抑制活性
[0068] 试验方法：
[0069] 将0. 5mL标准反应混合物（含100mM磷酸钾缓冲液，pH6. 5,40mM抗坏血酸， 200mg/mL过氧化氢酶，20mM亚甲基蓝和0. 05mMrhIDO)加入到含有底物L-色氨酸和待测 化合物的溶液中。反应液在37°C培育30分钟后加入200mL的30%三氯乙酸终止。加热至 65°C保持10分钟后，取100mL上清液转移至96孔板中，加入100mL的2%对二甲氨基苯甲 醛的醋酸溶液混合均匀。使用酶标仪在波长492nm处测定反应液中由犬尿氨酸产生的黄色 色素的吸光度。对照物选择ID0抑制剂1-甲基色氨酸、NLG919,实验结果见表1。
[0070] 表1、不同化合物的体外ID0抑制活性
[0071]
[0072] 实验结果表明，本发明氘代的式I所示化合物具有良好的IDO抑制活性，其IDO体 外抑制IC50小于1yM，明显优于1-甲基色氨酸的ID0抑制活性，与NLG919的ID0抑制活 性相当。
[0073] 试验例2、本发明化合物在人肝微粒体中的代谢情况
[0074] 试验方法：
[0075] 分别取10yL的NLG919和氘代化合物5的磷酸盐缓冲液（10yM，pH7. 4,含5 % MeOH)加入到96孔板中，再加入80yL/孔的人肝微粒体（蛋白浓度为0. 5mg/mL，微粒体来 源于Corning公司），于37°C中培育10分钟。然后，加入10yL/孔的NADPH降解系统启动 反应，于37°C中培育。
[0076] 分别于0, 5, 10, 20, 30and60分钟加入300yL/孔的含内标（100ng/mL甲苯磺丁 脲和100ng/mL拉贝洛尔）的4°C乙腈溶液终止反应。样品振摇5分钟后，于4000rpm离心 20分钟。取100yL上清液加入300yL超纯水稀释（1:3)，进行LC/MS/MS分析。
[0077] 体外微粒体稳定性实验中，主要基质是微粒体，监测微粒体在实验中的活性是否 正常，可反映实验过程是否正常。本实验针对微粒体中三种主要代谢酶（3A4,2C9,2D6)，选 择其各自特异性底物，即睾酮（3A4底物），普罗帕酮（2D6底物）和双氯芬酸（2C9底物）作 为阳性对照物。
[0078] 基于化合物与内标的峰面积之比，按下式计算化合物的T1/2和清除率。
[0081] CLint(nic)=Vd?ke
[0082] Vd= 2mL/mg
[0083] 实验结果如表2所示。
[0084] 表2、不同化合物的人肝微粒体测试结果
[0085]
[0086] 由表2可知，本发明氘代的式I所示化合物的T1/2为16. 8min，剩余百分数（T= 60min)为11. 1%，均远大于NLG919的T1/2和剩余百分数（T= 60min)，这都表明了本发明 氘代的式I所示化合物的代谢稳定性得到了明显的提高，可以长时间的发挥药效，降低了 给药频次和/或药物用量，提高临床使用的药效。
[0087]T1/2:药物的半衰期。指药物在血浆中最高浓度降低一半所需的时间。T1/2反映了 药物在体内消除的速度，表示了药物在体内的时间与血药浓度间的关系，它是决定给药剂 量、次数的主要依据。
[0088] 综上所述，本发明氘代的式I所示化合物，在具有良好的ID0抑制活性的同时，明 显提高了药物的代谢稳定性，不仅可以使药物长时间的发挥药效，还降低了给药频次和/ 或药物用量，提高了药物临床使用的药效；同时，本发明的制备方法，具有收率高、纯度高、 能耗低、步骤少、操作简便、成本低、环保、安全等优点，非常适合产业上的应用。
【主权项】
1. 一种氘代的吲哚胺-2, 3-双加氧酶抑制剂，其特征在于：所述吲哚胺-2, 3-双加氧 酶抑制剂的结构如式I所示：其中，R1~R9分别或同时选自氢、Ci~C6烷基或Ci~C6烷氧基。2. 根据权利要求1所述的吲哚胺-2, 3-双加氧酶抑制剂，其特征在于：RR9同时为 氢。3. -种氘代的吲哚胺_2, 3-双加氧酶抑制剂的制备方法，其特征在于：所述制备方法 的合成路线为：其中，R1-R9分别或同时选自氢、C广C6烷基或C广C6烷氧基； 所述制备方法包括以下步骤： a、 化合物1、化合物2与氢化钠在醚类溶剂中，于室温下搅拌反应6小时~18小时，得 到反应液；对反应液进行分离、纯化，得到化合物3 ; 所述化合物1、化合物2与氢化钠的摩尔比为1 :1~3 :1~5 ;所述化合物1与醚类溶 剂的摩尔体积比为1:5~15mmol/ml; b、 将步骤a得到的化合物3与乙酸、甲醇混合，于80°C~100°C下搅拌反应1小时~5 小时，得到反应液；对反应液进行分离、纯化，得到化合物4 ; 所述化合物3与乙酸的摩尔体积比为1 :1~3mmol/ml;所述化合物3与甲醇的摩尔体 积比为 1 :5 ~10mmol/ml； C、步骤b得到的化合物4与氘代试剂在有机溶剂中，于0°C~40°C下搅拌反应0. 5 小时~5小时，得到反应液；对反应液进行分离、纯化，得到化合物5,即为氘代的吲哚 胺-2, 3-双加氧酶抑制剂； 所述化合物4与氘代试剂的摩尔比为1 :1~5 ;所述化合物4与有机溶剂的摩尔体积 比为 1 :5 ~20mmol/ml。4. 根据权利要求3所述的制备方法，其特征在于：步骤a中，所述的醚类溶剂选自四氢 呋喃、乙醚中的任意一种或两种； 步骤c中，所述的氘代试剂选自NaBD4、LiAlD4*的任意一种或两种；所述的有机溶剂 选自甲醇、四氢呋喃、乙醚中的任意一种或两种以上。5. 根据权利要求3所述的制备方法，其特征在于：步骤a中，搅拌反应的时间12小时~ 18小时。6. 根据权利要求3所述的制备方法，其特征在于：步骤a中，所述化合物1、化合物2与 氢化钠的摩尔比为I:1. 5~3 :2~5 ;所述化合物1与醚类溶剂的摩尔体积比为1:10~ 1.Smmol/ml； 步骤b中，所述化合物3与乙酸的摩尔体积比为I:2~3mmol/ml;所述化合物3与甲 醇的摩尔体积比为1 :6~lOmmol/ml; 步骤c中，所述化合物4与氘代试剂的摩尔比为I:2~3 ;所述化合物4与有机溶剂的 摩尔体积比为1 :8~16mmol/ml。7. 根据权利要求3所述的制备方法，其特征在于：步骤a中，对反应液进行分离、纯化 的步骤为：除去反应液中的溶剂，得到残留物；残留物用饱和氯化铵水溶液稀释后，用二氯 甲烷萃取，取有机相，洗涤，干燥，浓缩，得到化合物3 ; 步骤b中，对反应液进行分离、纯化的步骤为：将反应液冷却，除去反应液中的溶剂，得 到残留物；残留物溶解于乙酸乙酯中，经饱和碳酸钾水溶液、饱和食盐水洗涤，干燥，浓缩， 柱层析纯化，得到化合物4; 步骤c中，对反应液进行分离、纯化的步骤为：除去反应液中的溶剂，得到残留物；将残 留物溶解于2mol/L盐酸溶液，搅拌均匀，加入饱和碳酸钾水溶液调节pH= 6. 5~7. 5后， 用二氯甲烷萃取，取有机相，洗涤，干燥，浓缩，柱层析纯化，得到化合物5。8. 式I所示化合物在制备吲哚胺-2, 3-双加氧酶抑制剂类药物中的应用。9. 根据权利要求8所述的应用，其特征在于：所述的吲哚胺-2, 3-双加氧酶抑制剂类 药物为治疗和/或预防细胞免疫激活相关的感染、恶性肿瘤、自身免疫性疾病、艾滋病的药 物。10. -种药物组合物，其特征在于：所述药物组合物是以式I所示化合物或其晶型、药 学上可接受的盐、水合物或溶剂合物为活性成分，加上药学上常用的辅料或辅助性成分制 备得到的制剂。
【专利摘要】本发明公开了一种氘代的吲哚胺-2,3-双加氧酶抑制剂，所述吲哚胺-2,3-双加氧酶抑制剂的结构如式Ⅰ所示：其中，R1～R9分别或同时选自氢、C1～C6烷基或C1～C6烷氧基。本发明氘代的式Ⅰ所示化合物，在具有良好的IDO抑制活性的同时，明显提高了药物的代谢稳定性，不仅可以使药物长时间的发挥药效，还降低了给药频次和/或药物用量，提高了药物临床使用的药效；同时，本发明的制备方法，具有收率高、纯度高、能耗低、步骤少、操作简便、成本低、环保、安全等优点，非常适合产业上的应用。
【IPC分类】A61P37/02, A61P35/00, A61K31/4188, A61P31/18, C07B59/00, C07D487/04, A61P31/00
【公开号】CN105037371
【申请号】CN201510375004
【发明人】钱珊, 刘为峰, 陈泉龙, 何彦颖, 张曼, 王伟, 杨羚羚, 王周玉
【申请人】西华大学
【公开日】2015年11月11日
【申请日】2015年6月30日