胞癌发生之间的关系日益受到关注。1976年 Alexander等从莫桑比克一名原发性肝癌男性患者分离到一株人肝癌细胞系，命名为PLC/ PRF/5(以下简称PLC)，该细胞系能够持续稳定产生HBsAg，自报道以来，PLC已成为国际上 研究HBV与肝癌关系的一个重要实验模型。
[0060] 以此肝癌细胞模型研究抗体是否能够抑制肝癌细胞中HBsAg释放。cIg、A3D 5、B2E5、 D3F6及F 2E5抗体组分别处理PLC/RPF/5细胞，24小时后撤除抗体，代以新鲜的培养基。3、6、 12、24小时时间点，检测细胞上清中的HBsAg的含量。如图6所示，抗体撤除后，随时间推 移抗体D3F6及F2E5两处理组中细胞上清中HBsAg与对照组（clg组）上升速率几乎无差别。 抗体A3D5及B 2E5处理组细胞上清中的HBsAg的含量上升速率明显低于clg组、D 3F6及F 2E5 处理组，但A3D5抗体抑制HBsAg释放效果明显优于B 2E5抗体组（*p < 0. 05)，A 3D5抗体能够 有效抑制肝癌细胞HBsAg释放。
[0061] 实施例的作用与效果
[0062] 实施例提供了一种抗乙肝病毒表面抗原的全人源抗体，实验表明其能够特异性结 合HBsAg蛋白，有较好的HBV中和活性，进而可能阻止HBV的感染及其相关的肝炎、肝硬化 及肝癌的进程。同时，由于该抗体是从接种乙肝疫苗的志愿者外周血中HBsAg特异的记忆 性B细胞中克隆获得的全人源抗体，其具有较鼠源、嵌合及人源化抗体更低的免疫原性。
[0063] 参考文献
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[0072] 本发明不限于【具体实施方式】的范围，对本技术领域的普通技术人员来讲，只要各 种变化在所述的权利要求限定和确定的本发明的精神和范围内，这些变化是显而易见的， 一切利用本发明构思的发明创造均在保护之列。
[0073]
【主权项】
1. 一种抗乙肝病毒表面抗原的全人源抗体A 3D5，其特征在于，具有： 重链可变结构域，包含高变区OTR1、⑶R2、⑶R3;以及 轻链可变结构域，包含高变区⑶R/、⑶R/、OTR3'， 其中，所述⑶Ri的氨基酸序列为：Met-Tyr-Ala-Phe-Ser ; 所述 CDR2 的氨基酸序列为：Gly-I le_I Ie-Pro-Ser-Phe-Asp-Thr-Thr-Asn-Tyr-Ala-Gl n-Lys-Phe-Gln-Cys ； 所述 CDR3 的氨基酸序列为：Ser-Val-I Ie-Thr-Asp-Leu-Asp-Thr-Val-Gly-Asn-Asp-Gl U-Ser-Gly-Asp-Ala-Ser-Tyr-Tyr-Tyr-Met-Asp-Val ； 所述 CDR1'的氨基酸序列为：Arg-Ser-Ser-Glu-Ser-Leu-Gln-His-Ser-Asp-Gly-Thr-Tyr-Tyr-Leu-Asp ； 所述 CDR/ 的氨基酸序列为：Ser-Ala-Ser-Asn-Thr-Ala-Pro ; 所述 CDR3'的氨基酸序列为：Met-Gln-Ala-Leu-Glu-Thr-Pro-Phe-Thr。2. 根据权利要求1所述的抗乙肝病毒表面抗原的全人源抗体A 3D5，其特征在于： 其中，所述重链可变结构域的氨基酸序列如SEQ ID NO. 6所示，所述轻链可变结构域的 氨基酸序列如SEQ ID NO. 8所示。3. 根据权利要求2所述的抗乙肝病毒表面抗原的全人源抗体A 3D5，其特征在于： 其中，所述抗体A3D5选自抗乙肝病毒表面抗原的单克隆抗体以及所述单克隆抗体片段 中的任意一种， 所述单克隆抗体片段为所述单克隆抗体的Fab片段或F(ab'）2片段。4. 一种抗乙肝病毒表面抗原的全人源抗体片段，其特征在于： 所述抗体片段为权利要求1或2所述的抗乙肝病毒表面抗原的全人源抗体A3D5的Fab 片段或F(ab'）2片段。5. -种编码权利要求1或2所述的抗乙肝病毒表面抗原的全人源抗体A3D5的基因，其 特征在于： 编码所述重链可变结构域的核苷酸序列如SEQ ID NO. 5所示，编码所述轻链可变结构 域的核苷酸序列如SEQ ID NO. 7所示。6. -种表达载体，其特征在于： 所述表达载体含有至少一个拷贝的权利要求5所述的基因。7. -种宿主细胞，其特征在于： 所述宿主细胞含有至少一个权利要求6所述的表达载体。8. 权利要求1~3任一项所述的抗乙肝病毒表面抗原的全人源抗体A 3D5在制备预防 或治疗乙肝病毒相关肝病的药物或诊断试剂中的用途。9. 权利要求4所述的抗乙肝病毒表面抗原的全人源抗体片段在制备预防或治疗乙肝 病毒相关肝病的药物或诊断试剂中的用途。10. -种含有权利要求1~3任一项所述的抗乙肝病毒表面抗原的全人源抗体A 3D5的 药物或诊断试剂，其特征在于： 其中，所述药物或诊断试剂还包含可药用赋形剂、稀释剂与载体中的任意一种。11. 一种含有权利要求4所述的抗乙肝病毒表面抗原的全人源抗体片段的药物或诊断 试剂，其特征在于：
【专利摘要】本发明提供一种抗乙肝病毒表面抗原的全人源抗体A3D5及编码的该抗体的基因。实验表明抗体A3D5能够特异性结合HBsAg蛋白，有较好的HBV中和活性，进而可能阻止HBV的感染相关的肝炎、肝硬化及肝癌的进程。同时，由于该抗体是从接种乙肝疫苗的志愿者外周血中HBsAg特异的记忆性B细胞中克隆获得的全人源抗体，其具有较鼠源、嵌合及人源化抗体更低的免疫原性，可用于制备预防或治疗乙肝病毒相关肝病的药物或诊断试剂。
【IPC分类】C12N15/13, G01N33/569, A61P31/20, A61K39/42, C07K16/08
【公开号】CN105061591
【申请号】CN201510469066
【发明人】李博华, 孟艳春, 王华菁, 杨扬, 于晓杰
【申请人】中国人民解放军第二军医大学
【公开日】2015年11月18日
【申请日】2015年8月3日