案中，当分离1号峰化合物时，在进行了 1次C18 常压柱色谱分离后，将产物再次进行C18常压柱色谱分离，所用流动相为5%甲醇水（含 0. 2%甲酸），以每5mL为一个流份，将纯度相近的部分合并（例如通过上面的HPLC检测条 件检测），减压浓缩除去甲醇后，冷冻干燥，即得95%以上纯度儿茶素巯乙胺基取代物。
[0054] 在本发明的一个优选的实施方案中，当分离3号峰化合物时，在进行了 1次C18 常压柱色谱分离后，将产物再次进行C18常压柱色谱分离，所用流动相为10%甲醇水（含 0. 2%甲酸），以每5mL为一个流份，将纯度相近的部分合并（例如通过上面的HPLC检测条 件检测），减压浓缩除去甲醇后，冷冻干燥，即得95%以上纯度表儿茶素没食子酸酯巯乙胺 基取代物。
[0055] 根据本发明任一项所述的方法，其还包括步骤（2)，
[0056] (2)将步骤（1)中的产物进行半制备HPLC分离；
[0057] 优选地，半制备HPLC的条件如下：
[0058]色谱柱：YMC-Pack0DS-A 色谱柱（10mmX25〇mm，5ym);柱温：3〇°C;流速：lmL/ min ;进样量：lmL ;检测波长：280nm ;
[0059] 流动相：以0.2%甲酸水（A)和0.2%甲酸甲醇（B)为流动相梯度洗脱，洗脱程序 如下面的表3。
[0060] 表3:梯度洗脱程序
[0061]
[0062] 〇
[0063]在本发明的一个优选的实施方案中，当分离2号峰化合物时，在进行了 1次C18常 压柱色谱分离后，将产物进行半制备HPLC。优选地，按照上述半制备HPLC色谱条件进行制 备。根据出峰的情况收集馏分：前33min的馏分作为前杂质馏分收集在一起，33min~43min 的馏分作为产品馏分收集在一起，43min后用收集在一起为后杂质馏分。将前后杂质馏分合 并浓缩，按照上述方法再进样一次，产品馏分按上述的HPLC条件检测，减压浓缩除去甲醇 后，冷冻干燥，即得95%以上纯度表儿茶素巯乙胺基取代物。
[0064]本发明的另一方面涉及一种制备羟基黄烷类化合物巯乙胺基取代物的方法，包括 上面任一项所述的分离羟基黄烷类化合物巯乙胺基取代物的方法。
[0065]本发明中，属于"C18常压柱"是一种填料为十八烷基硅烷键合硅胶的反相色谱柱。 十八烷基硅烷键合硅胶（Ostadecylsilane，简称0DS或C18)是一种完全球型、表面光滑的 多孔硅胶，具有非常高的表面键合覆盖率，借助于化学反应的方法将十八烷基以硅烷键连 接在硅胶上而获得。由于C18柱的所用的键合固定相表面是极性很小的十八烷基，因而洗 脱液大多采用强极性溶剂，如水、甲醇、乙腈、或无机盐的缓冲液。在洗脱时，溶质按其疏水 性大小进行分离，极性越大疏水性越小的溶质，越不易与非极性的固定相结合，所以先被洗 脱下来。由于C18是长链烷基键合相，有较高的碳含量和更好的疏水性，因此常用于分离分 析中等极性化合物和溶于水的高极性化合物。
[0066] 不拘于理论的限制，常压柱色谱分离操作略麻烦，但是不损失样品；而半制备液相 操作简便，会损失比较多的样品。因3个化合物只有2号峰的量较多，因此只有2号峰的进 一步纯化采用了半制备液相的方法。
[0067]本发明中所述甲醇或甲酸的百分比浓度，如果没有特别说明，均指体积百分比浓 度。
[0068]有益效果
[0069]本发明的分离或者制备羟基黄烷类化合物巯乙胺基取代物的方法操作简便。本发 明还进一步具有得率较高，产物纯度较高等优点。具有良好的应用前景。
【附图说明】
[0070] 图1 :缩和鞣质部位（威麦宁原料药）硫解产物HPLC图。
[0071] 图2 :制备得到的3个95%以上纯度化合物的HPLC图。图2A为1号峰，图2B为 2号峰，图2C为3号峰。
【具体实施方式】
[0072] 下面将结合实施例对本发明的实施方案进行详细描述，但是本领域技术人员将会 理解，下列实施例仅用于说明本发明，而不应视为限定本发明的范围。实施例中未注明具体 条件者，按照常规条件或制造商建议的条件进行。其中，所用试剂或仪器未注明生产厂商 者，均为可以通过市购获得的常规产品。
[0073] 仪器和试剂：
[0074] LC-20A高效液相色谱仪，日本岛津公司（用于实施例2硫解产物的HPLC分析）； HPLC-MS系统，美国Agilent公司（配有1200型高效液相色谱仪和6330型离子阱质谱仪， 用于实施例2硫解产物的HPLC-MS分析）；KQ2200E型超声清洗器，昆山市超声仪器有限公 司；Sartorius-BS 124S电子天平，北京赛多利斯天平有限公司；N-1001D-WA旋转蒸发仪， 日本Eyela公司；Hff*SY-K4型智能电热恒温水浴锅，北京市长风仪器表公司。日立L-2000 高效液相色谱仪，日本Hitachi公司（用于实施例4半制备HPLC分离）JMN-ECA-400型超 导NMR仪，日本电子。
[0075] 威麦宁原料药（批号：12003)，北京华顾药业提供；水为娃哈哈纯净水；甲醇及乙 腈为色谱纯，美国Fisher公司；甲酸为分析纯，国药集团化学试剂有限公司。C18填料（规 格：120A，50 y m)，日本 YMC 公司。
[0076] 实施例1 :缩合輮质部位（威耒宁原料药）的硫解及HPLC分析
[0077] 取威麦宁原料药200.0 mg，溶于20.0 mL甲醇，加入100mg/mL盐酸疏乙胺溶液 21. 6mL (含浓盐酸1. 6mL)，置于250mL蒸馏瓶中，65°C水浴15min，冷却后，加入160.0 mL水 淬灭，浓缩至大约3. OmL，即得硫解溶液。
[0078] 实施例2 :硫解产物的HPLC分析及色谱峰的宙件鉴别
[0079] 所用样品为实施例1制得的硫解溶液。
[0080] HPLC 条件：色谱柱：Thermo Syoronis C18 色谱柱（4. 6mmX 250mm，5 y m);柱温： 30°C ;流速：lmL/min;进样量：20yL;检测波长：280nm;流动相：以0. 2%甲酸水（A)和 0.2%甲酸乙腈（B)为流动相梯度洗脱，洗脱程序见下面的表2。
[0081] 表2 :HPLC分析硫解产物的梯度洗脱程序
[0082]
[0083] HPLC-MS 分析条件：
[0084] HPLC 条件：色谱柱：Agilent TC-C18(2)色谱柱（250mmX4.6mm，5ym);柱温： 25°C;流速：lmL/min;进样量20 y L;流动相：以0. 2%甲酸水（A)和0. 2%甲酸乙腈⑶为 流动相梯度洗脱，洗脱程序同表2。
[0085]MS条件：离子源为ESI，负离子扫描模式，雾化气压力为40.0 psi，干燥气流量为 10.0 L/min，离子源温度为350°C，化合物稳定性为100%，阱深为100%。
[0086] 分析结果如附图1所示。
[0087] 结合HPLC-MS分析结果以及文献报道的出峰先后顺序，将其中较大的三个巯乙胺 基取代物分别命名为1号峰（推测为儿茶素巯乙胺基取代物）、2号峰（推测为表儿茶素巯 乙胺基取代物）和3号峰（推测为表儿茶素没食子酸酯巯乙胺基取代物）。
[0088]实施例3:缩合輮质部位硫解产物的C18常压梓色谱分离
[0089] C18常压柱采用湿法装柱，湿法上样。装柱（柱体积为250mL)后用甲醇冲洗至无 杂质（HPLC检测），再将流动相逐步过渡至起始比例。
[0090] 取威麦宁原料药硫解溶液3mL(参照实施例1制备）进行C18常压柱色谱分离，流 动相为10%甲醇水（含〇.2%甲酸），以每5mL为一个流份，按实施例2中的HPLC检测条 件检测，将每个化合物纯度相近的部分合并，合并原则是：HPLC归一化法测得纯度在95% 以上的合并在一起，95%以下的合并在一起并再次进行纯化。减压浓缩除去甲醇后，冷冻干 燥，分别得到4个样品：1号峰C18常压柱色谱分离样品、2号峰C18常压柱色谱分离样品 1(纯度95%以上）和2号峰C18常压柱色谱分离样品2(纯度95%以下）、3号峰C18常压 柱色谱分离样品。
[0091] 将1号峰C18常压柱色谱分离样品再次进行C18常压柱色谱分离，所用流动相为 5%甲醇水（含0. 2%甲酸），以每5mL为一个流份，按实施例2的HPLC检测条件检测，将纯 度相近的部分合并，减压浓缩除去甲醇后，冷冻干燥，即得95%以上纯度（HPLC归一化法测 定）的1号峰化合物（推测为儿茶素巯乙胺基取代物）。
[0092] 将3号峰C18常压柱色谱分离样品再次进行C18常压柱色谱分离，所用流动相为 10%甲醇水（含0. 2%甲酸），以每5mL为一个流份，按实施例2的HPLC检测条件检测，将 纯度相近的部分合并，减压浓缩除去甲醇后，冷冻干燥，即得95%以上纯度的3号峰化合物 (推测为表儿茶素没食子酸酯巯乙胺基取代物）。
[0093]实施例4:半制备HPLC分离2号峰化合物
[0094] 实验样品：前面实施例3制得的2号峰C18常压柱色谱分离样品2 (纯度95%以 下）。
[0095] 半制备HPLC条件：色谱柱：YMC-Pack 0DS-A色谱柱（10mmX 250mm，5ym);柱温： 30°C ;流速：lmL/min ;进样量：lmL ;检测波长：280nm ;以0. 2%甲酸水⑷和0. 2%甲酸甲 醇（B)为流动相梯度洗脱，洗脱程序见下面的表3。
[0096] 表3:半制备HPLC梯度洗脱程序
[0097]
[0098] 对2号峰样品进行半制爸HPLC分呙纯化：取C18芾压柱色谱分离2号峰样品溶液 进样，lmL/次，按上述半制备HPLC色谱条件进行制备。根据出峰的情况收集2号峰样品的 馏分：前33min的馏分作为前杂质馏分收集在一起，33min~43min的馏分作为产品馏分收 集在一起，43min后用收集在一起为后杂质馏分。将前后杂质馏分合并浓缩，按照