的实例包括(i)Fab片段，由V L、VH、a与 Cnd或组成的单价片段；（iDFUV )2片段，包括在铰链区由二硫键连接的两个Fab片段的二 价片段；（iii)由Vh和Chi域组成的Fd片段；（iv)由抗体的单臂的Vl和Vh域组成的Fv片段；（v) dAb片段(Ward等人，（1989)Nature 341:544-546)，其由Vh域组成；（vi)分离的互补决定域 (0)1〇;(>；[；0微体(111；[11；[130(150、双抗体、三链抗体、四体（丨61^3130(150、和10体(1^。。3 130(150 (见，例如III等，Protein Eng 1997;10:949-57);(￥丨^)骆驼186 ;和（丨1)18祖1?。另外，虽然 Fv片段的两个域VL和VH通过分别的基因编码，但可使用重组方法，通过合成接头将它们联 结，使它们能够作为单蛋白质链制备，其中VjPV H区配对以形成单价分子(被称为单链Fv (scFv);见例如，Bird 等人（1988)Science 242:423-426;和 Huston 等人（1988) Proc. Natl. Acad. Sci. USA 85:5879-5883)。这样的单链抗体也意在包含在抗体的术语"抗 原结合部分"中。这些抗体片段使用本领域技术人员已知的常规技术获得，并且使用完整抗 体的相同方式分析所述片段。
[0023] 另外，可以预期的是抗原结合片段可包含在抗体模拟物中。在本文中使用的术语 "抗体模拟物"或"模拟物"意指展示与抗体相似结合，但是更小的可选抗体或非抗体蛋白质 的蛋白质。这样的抗体模拟物可被包括在支架上。术语"支架"指的是用于具有修改的功能 和特征的新产品的工程改造的多肽平台。
[0024]如本文所用，术语"抑制结合"和"阻断结合"（例如指将TFPI配体对TFPI的结合的 抑制/阻断)可互换地使用并且包括部分的或全部的抑制或阻断。抑制和阻断还意在包括相 比于未与抗TFPI抗议接触的TFPI，当与抗TFPI抗体接触时，任何TFPI对生理底物的结合亲 和力的可测量的减少，例如，TFPI与因子Xa的相互作用的阻断或阻断TFPI因子Xa复合物与 组织因子、因子Vila或组织因子/因子Vila复合物的相互作用至少约10%、20%、30%、 40%、50%、60%、70%、80%、90%、95%、96%、97%、98%、99% 或 100%。
[0025]治疗性抗体已通过由Koehler和Milstein在"Continuous Cultures of Fused Cells Secreting Antibody of Predefined Specificity/'Nature 256,495-497(1975) 中描述的杂交瘤技术制备。完全人抗体还可在原核生物和真核生物中重组制备。在宿主细 胞中的抗体的重组生产而不是杂交瘤生产被优选用于治疗性抗体。重组生产具有更大的产 品一致性的优点、可能更高的生产水平和受控的制造，其最小化或消除了动物衍生蛋白质 的存在。由于这些原因，期望具有重组产生的单克隆抗-TFPI抗体。如本文所用的术语"单克 隆抗体"或"单克隆抗体组合物"指的是抗体分子的单分子组合物的制备。单克隆抗体组合 物展示了对特别的表位的单一结合特异性和亲和力。一般地，用于人疾病的治疗性抗体以 使用基因工程改造产生，以生成鼠的、嵌合的、人源化或完全人抗体。由于短暂的血清半衰 期、不能触发人效应子功能、和人类抗小鼠抗体的生产，鼠类单克隆抗体显示作为治疗剂具 有有限的用途(Brekke和Sandlie，"Therapeutic Antibodies for Human Diseases at the Dawn of the Twenty-first Century"Nature 2,53,52-62,Jan .2003)。嵌合抗体已经 显示引起人类抗嵌合抗体应答。人源化抗体进一步最小化了抗体的小鼠组分。然而，全人抗 体完全避免了与鼠元素相关的免疫原性。因此，需要将人的或人源化的抗体发展到能够避 免与其它形式的基因工程改造的单克隆抗体相关联的免疫原性的程度。特别地，由于需要 频繁给药和治疗的长持续时间，如果使用具有鼠组分或鼠源的抗体，将诸如需要使用抗 TFPI单克隆抗体治疗血友病的慢性预防性治疗会具有发展对所述治疗的免疫应答的高风 险。例如，用于血友病A的抗体治疗可以需要对患者终身进行每周给药。这将是对免疫系统 的持续挑战。因此，存在对用于对血友病和相关遗传和后天缺陷或凝血缺陷的抗体治疗的 全人抗体的需要。因此，术语"人单克隆抗体"指展示单一结合特异性的抗体，其具有源自人 种系免疫球蛋白序列的至少一部分可变区和恒定区。本发明的人抗体可包括不是人种系免 疫球蛋白序列编码的氨基酸残基(例如，通过随机或位点特异性的体外诱变或通过体内体 细胞突变导入的突变）。这些人抗体包括嵌合抗体，诸如小鼠/人和人源化抗体，其保留了非 人序列。
[0026] 如本文所用的"分离的抗体"意指这样的抗体，其基本上不含具有不同抗原特异性 的其它抗体(例如，结合至TFPI的分离的抗体基本上不含结合除了 TFPI的抗原的抗体）。然 而，结合人TFPI的表位、同种型或变体的分离抗体可以具有与其它相关抗原，例如，来自其 它物种的（例如，TFPI物种同系物)的交叉反应性。此外，分离抗体可以基本上不含其它细胞 材料和/或化学品。
[0027] 如本文所用，"特异性结合"是指抗体结合预定的抗原。通常地，抗体以至少约105 的亲和力结合，并且以比其结合至除了预定的抗原或非常相关的抗原的不相关抗原(例如， BSA、酪蛋白）更高的，例如至少是其两倍的亲和力结合到预定的抗原。词语"识别抗原的抗 体"和"对抗原特异的抗体"在本文中与术语"特异地结合抗原的抗体"可互换地使用。
[0028]如本文所用的，用于IgG抗体的"高亲和力"指至少约107的结合亲和力，在一些实 施方案中为至少约1〇8,在一些实施方案中为至少约109、101Q、10 n或更高，例如，达到1〇13或 更高。然而，对于其它抗体同种型，"高亲和力"结合可以变化。例如，用于IgM同种型的"高亲 和力"结合指至少约1.0X10 7的结合亲和力。如本文所用，"同种型"指的是通过由重链恒定 区基因编码的抗体类别（例如，IgM或IgGl)。
[0029] "互补决定区"或"CDR"指抗体分子的重链可变区或轻链可变区内的三个高变区之 一，其形成互补于结合抗原的三维结构的N-末端抗原结合表面。自重链或轻链的N-末端开 始，这些互补决定区被分别表示为"CDR1"、"CDR2"和"CDR3" XDR参与到抗原-抗体结合中， 且CDR3包括用于抗原-抗体结合的独特的区域特异性。因此，抗原结合位点可以包括六个 ⑶R，其包括来自各个重链或轻链V区域的⑶R区域。
[0030] 如本文所用，除以下描述的有关的个别的或多个的组氨酸取代，"保守取代"指多 肽的修饰，其涉及对具有相似生化性质的氨基酸的一个或多个氨基酸取代，其不导致多肽 的生物学或生物化学功能的缺失。"保守氨基酸取代"是使用具有相似侧链的氨基酸残基替 换氨基酸残基。已在现有技术中定义了具有相似侧链的氨基酸残基家族。这些家族包括具 有碱性侧链(例如，赖氨酸、精氨酸、组氨酸）、酸性侧链(例如，天冬氨酸、谷氨酸）、不带电荷 的极性侧链(例如，甘氨酸、天冬酰胺、谷氨酰胺、丝氨酸、苏氨酸、酪氨酸、半胱氨酸）、非极 性侧链(例如，丙氨酸、缬氨酸、亮氨酸、异亮氨酸、脯氨酸、苯丙氨酸、甲硫氨酸、色氨酸）、β_ 分支侧链(例如，苏氨酸、缬氨酸、异亮氨酸)和芳族侧链(例如，酪氨酸、苯丙氨酸、色氨酸、 组氨酸)的氨基酸。预期本发明的抗体可具有保守氨基酸取代且仍然保留活性。
[0031] 术语"基本同源"指示当进行最优比对和比较时，两个多肽或其指定的序列（具有 适当的氨基酸插入或缺失）至少约80 %的氨基酸，通常至少约85 %，优选地约90 %、91 %、 92%、93%、94%或95%，更优选地至少约96%、97%、98%、99%、99.1%、99.2%、99.3%、 99.4%、或99.5%的氨基酸是同一的。本发明包括具有与本文中列举的特别的氨基酸序列 的基本同源的多肽序列。
[0032] 两个序列之间的百分比同一性是所述序列共享的相同位置数目的函数（即，同 源％=相同位置#/位置总#Χ 1〇〇)，考虑到缺口数量和每个缺口的长度，其需要被引入以用 于两个序列的最优比对，可使用诸如VectorNTITM的AlignXTM模块（Invitrogen公司， Carlsbad，CA)的数学算法得到两个序列之间的序列比较和百分比同一性的确定。对于 AlignXTM，多比对的缺省参数为:缺口开放罚分：10;缺口延伸罚分:0.05;缺口分离罚分范 围：8; %比对延迟同一"性:40。（更多细节见
[0033] http://www.invitrogen.com/site/us/en/home/LINNEA-Online_Guides/ LINNEA-Communi ties/Vector-NTI-Community/Sequence-analysi s-and-data-management-sof tware-for-PCs/A1 ig