一种从印度防己中提取、分离和纯化印防己苦内酯的方法
【技术领域】
[0001]本发明涉及一种药用植物领域，一种从印度防己中提取、分离和纯化印防己苦内酯的方法。
【背景技术】
[0002]印防己苦内酯(Picroxin)是从防己科植物印度防Amamirta cocculus L.(Cocculus indicus)种子的提取出来的一种化合物，熔点248?250°C，分子式C15H18O7,药理研究表明，印防己苦内酯具有中枢兴奋和解毒作用(动物试验)。目前，国内外对印防己苦内酯的研究较少，尚未检索到制备印防己苦内酯的方法报道。
【发明内容】
[0003]本发明目的在于提供一种印防己苦内酯的制备方法，以填补该化合物制备方法的空白。
[0004]本发明的目的主要通过以下技术过程来实现:
具体步骤如下:
(I)乙醇提取:印度防己切片，晒干，用粉碎机粉碎5kg，得到印度防己粉末，过20目筛，将印度防己粉末于纱布袋中包住，在60 0C水浴中用200mL 60-95%的乙醇回流提取6_12h，收集印度防己乙醇提取液。减压除去部分乙醇，得到浸膏适量，待用。
[0005](2)D101大孔树脂富集:将DlOl型大孔树脂采用湿法装柱(树脂量以湿体积计为200-300mL，径高比为1: (10-15))，先用乙醇清洗至洗出液澄清后，再用蒸馏水脱出至无醇味，备用。称取上述印度防己乙醇提取物浸膏50g，经200?500mL的60?95%乙醇充分溶解后，向其中加入80?150mL水，静置过夜。将静置后的药液抽滤(0.22μπι的滤膜)，减压回收上清液中的乙醇除净，所得的印度防己水溶液，用DlOl型大孔树脂按30%?100%的甲醇梯度进行洗脱，分段收集洗脱液。用HPLC进行分析，确定选用90-100%甲醇洗脱液作为印度防己粗提物，待分离。按上述方法共得到印度防己乙醇提取物浸膏80g，得到待分离纯化的印度防己粗提物。
[0006](3 )高速逆流色谱进行分离和纯化:用分液漏斗中配制石油醚-氯仿-甲醇-水的两相溶剂体系，充分摇匀后，室温静置过夜。两相溶剂分配达到平衡后，按上相和下相分开放入棕色广口瓶中，超声脱气20min，备用。准确称取印度防己粗提物5.5g溶解于下相中，超声溶解，得到16.7g/L的样品溶液，备用。将两相溶剂系统中已超声脱气的上相为固定相，下相为流动相，以10?25mL/min的速度栗入高速逆流色谱分离管中，待上相充满分离管后，顺时针旋转，缓慢均匀调节主机转速至600?900r/m in，同时以1.5mL/min的速度将下相注入其中，待两相平衡，将适量印度防己粗提物溶液注入分离管中，采集数据，按照色谱峰收集目标成分。
[0007]所述步骤(2)中用到的大孔树脂是经过预处理的。
[0008]所述步骤(2)用DlOl型大孔树脂按30%?100%的甲醇梯度进行洗脱时，甲醇的浓度是逐渐递增的。
[0009]所述步骤(3)用到的溶剂系统石油醚-氯仿-甲醇-水的体积比为(3-6):(2-9):(1-7):(3-8)o
[0010]该发明所说的一种从印度防己中提取、分离和纯化印防己苦内酯的方法的优势在于:
本发明(I)先用大孔树脂有效成分进行富集，降低了后续工序的处理量；(2)采用高速逆流色谱进行分离和纯化，不仅实现了连续化作业、动态逆流提取，且提高了有效成分的得率。
[0011]下面结合具体实施例对本发明做进一步的解释。
[0012]实例I
印度防己切片，晒干，用粉碎机粉碎5kg，得到印度防己粉末，过20目筛，将印度防己粉末于纱布袋中包住，在60°C水浴中用200mL 75%的乙醇回流提取1h，收集印度防己乙醇提取液。减压除去部分乙醇，得到浸膏适量，待用。将DlOl型大孔树脂采用湿法装柱(树脂量以湿体积计为200mL，径高比为1:12)，先用乙醇清洗至洗出液澄清后，再用蒸馏水脱出至无醇味，备用。称取上述印度防己乙醇提取物浸膏50g，经200mL的75%乙醇充分溶解后，向其中加入150mL水，静置过夜。将静置后的药液抽滤(0.22μπι的滤膜)，减压回收上清液中的乙醇除净，所得的印度防己水溶液，用DlOl型大孔树脂按30%?100%的甲醇梯度进行洗脱，分段收集洗脱液。用HPLC进行分析，确定选用90-100%甲醇洗脱液作为印度防己粗提物，待分离。按上述方法共得到印度防己乙醇提取物浸膏80g，得到待分离纯化的印度防己粗提物。用分液漏斗中配制石油醚-氯仿-甲醇-水的两相溶剂体系，充分摇匀后，室温静置过夜。两相溶剂分配达到平衡后，按上相和下相分开放入棕色广口瓶中，超声脱气20min，备用。准确称取印度防己粗提物5.5g溶解于下相中，超声溶解，得到16.7g/L的样品溶液，备用。将两相溶剂系统中已超声脱气的上相为固定相，下相为流动相，以15mL/min的速度栗入高速逆流色谱分离管中，待上相充满分离管后，顺时针旋转，缓慢均匀调节主机转速至700r/m in，同时以1.5mL/min的速度将下相注入其中，待两相平衡，将适量印度防己粗提物溶液注入分离管中，采集数据，按照色谱峰收集目标成分。HPLC检测含量为97.8%ο
[0013]实例2
印度防己切片，晒干，用粉碎机粉碎5kg，得到印度防己粉末，过20目筛，将印度防己粉末于纱布袋中包住，在60°C水浴中用200mL 85%的乙醇回流提取6-12h，收集印度防己乙醇提取液。减压除去部分乙醇，得到浸膏适量，待用。将DlOl型大孔树脂采用湿法装柱(树脂量以湿体积计为250mL，径高比为1:10)，先用乙醇清洗至洗出液澄清后，再用蒸馏水脱出至无醇味，备用。称取上述印度防己乙醇提取物浸膏50g，经300mL的85%乙醇充分溶解后，向其中加入10mL水，静置过夜。将静置后的药液抽滤(0.22μπι的滤膜)，减压回收上清液中的乙醇除净，所得的印度防己水溶液，用DlOl型大孔树脂按30%?100%的甲醇梯度进行洗脱，分段收集洗脱液。用HPLC进行分析，确定选用90-100%甲醇洗脱液作为印度防己粗提物，待分离。按上述方法共得到印度防己乙醇提取物浸膏80g，得到待分离纯化的印度防己粗提物。用分液漏斗中配制石油醚-氯仿-甲醇-水的两相溶剂体系，充分摇匀后，室温静置过夜。两相溶剂分配达到平衡后，按上相和下相分开放入棕色广口瓶中，超声脱气20min，备用。准确称取印度防己粗提物5.5g溶解于下相中，超声溶解，得到16.7g/L的样品溶液，备用。将两相溶剂系统中已超声脱气的上相为固定相，下相为流动相，以15mL/min的速度栗入高速逆流色谱分离管中，待上相充满分离管后，顺时针旋转，缓慢均匀调节主机转速至700r/m in，同时以1.5mL