/min的速度将下相注入其中，待两相平衡，将适量印度防己粗提物溶液注入分离管中，采集数据，按照色谱峰收集目标成分。HPLC检测含量为96.9%ο
[0014]实例3
印度防己切片，晒干，用粉碎机粉碎5kg，得到印度防己粉末，过20目筛，将印度防己粉末于纱布袋中包住，在60°C水浴中用200mL 90%的乙醇回流提取6-12h，收集印度防己乙醇提取液。减压除去部分乙醇，得到浸膏适量，待用。将DlOl型大孔树脂采用湿法装柱(树脂量以湿体积计为300mL，径高比为1:15)，先用乙醇清洗至洗出液澄清后，再用蒸馏水脱出至无醇味，备用。称取上述印度防己乙醇提取物浸膏50g，经200?500mL的95%乙醇充分溶解后，向其中加入80mL水，静置过夜。将静置后的药液抽滤(0.22μπι的滤膜)，减压回收上清液中的乙醇除净，所得的印度防己水溶液，用DlOl型大孔树脂按30%?100%的甲醇梯度进行洗脱，分段收集洗脱液。用HPLC进行分析，确定选用90-100%甲醇洗脱液作为印度防己粗提物，待分离。按上述方法共得到印度防己乙醇提取物浸膏80g，得到待分离纯化的印度防己粗提物。用分液漏斗中配制石油醚-氯仿-甲醇-水的两相溶剂体系，充分摇匀后，室温静置过夜。两相溶剂分配达到平衡后，按上相和下相分开放入棕色广口瓶中，超声脱气20min，备用。准确称取印度防己粗提物5.5g溶解于下相中，超声溶解，得到16.7g/L的样品溶液，备用。将两相溶剂系统中已超声脱气的上相为固定相，下相为流动相，以15mL/min的速度栗入高速逆流色谱分离管中，待上相充满分离管后，顺时针旋转，缓慢均匀调节主机转速至700r/m in，同时以1.5mL/min的速度将下相注入其中，待两相平衡，将适量印度防己粗提物溶液注入分离管中，采集数据，按照色谱峰收集目标成分。HPLC检测含量为98.7%。
[0015]实例4
印度防己切片，晒干，用粉碎机粉碎5kg，得到印度防己粉末，过20目筛，将印度防己粉末于纱布袋中包住，在60 0C水浴中用200mL 75%的乙醇回流提取8h，收集印度防己乙醇提取液。减压除去部分乙醇，得到浸膏适量，待用。将DlOl型大孔树脂采用湿法装柱(树脂量以湿体积计为300mL，径高比为1:10)，先用乙醇清洗至洗出液澄清后，再用蒸馏水脱出至无醇味，备用。称取上述印度防己乙醇提取物浸膏50g，经200mL的65%乙醇充分溶解后，向其中加入120mL水，静置过夜。将静置后的药液抽滤(0.22μπι的滤膜)，减压回收上清液中的乙醇除净，所得的印度防己水溶液，用DlOl型大孔树脂按30%?100%的甲醇梯度进行洗脱，分段收集洗脱液。用HPLC进行分析，确定选用90-100%甲醇洗脱液作为印度防己粗提物，待分离。按上述方法共得到印度防己乙醇提取物浸膏80g，得到待分离纯化的印度防己粗提物。用分液漏斗中配制石油醚-氯仿-甲醇-水的两相溶剂体系，充分摇匀后，室温静置过夜。两相溶剂分配达到平衡后，按上相和下相分开放入棕色广口瓶中，超声脱气20min，备用。准确称取印度防己粗提物5.5g溶解于下相中，超声溶解，得到16.7g/L的样品溶液，备用。将两相溶剂系统中已超声脱气的上相为固定相，下相为流动相，以15mL/min的速度栗入高速逆流色谱分离管中，待上相充满分离管后，顺时针旋转，缓慢均匀调节主机转速至700r/m in，同时以
1.5mL/min的速度将下相注入其中，待两相平衡，将适量印度防己粗提物溶液注入分离管中，采集数据，按照色谱峰收集目标成分。HPLC检测含量为95.9%。
【主权项】
1.一种从印度防己中提取、分离和纯化印防己苦内酯的方法，其特征在于制备具体步骤如下:(I)乙醇提取:印度防己切片，晒干，用粉碎机粉碎5kg，得到印度防己粉末，过20目筛，将印度防己粉末于纱布袋中包住，在60°C水浴中用200mL 60-95%的乙醇回流提取6-12h，收集印度防己乙醇提取液;减压除去部分乙醇，得到浸膏适量，待用；(2)D101大孔树脂富集:将DlOl型大孔树脂采用湿法装柱(树脂量以湿体积计为200-300mL，径高比为1:(10-15))，先用乙醇清洗至洗出液澄清后，再用蒸馏水脱出至无醇味，备用；称取上述印度防己乙醇提取物浸膏50g，经200?500mL的60?95%乙醇充分溶解后，向其中加入80?150mL水，静置过夜;将静置后的药液抽滤(0.22μπι的滤膜)，减压回收上清液中的乙醇除净，所得的印度防己水溶液，用DlOl型大孔树脂按30%?100%的甲醇梯度进行洗脱，分段收集洗脱液;用HPLC进行分析，确定选用90-100%甲醇洗脱液作为印度防己粗提物，待分离;按上述方法共得到印度防己乙醇提取物浸膏80g，得到待分离纯化的印度防己粗提物；(3)高速逆流色谱进行分离和纯化:用分液漏斗中配制石油醚-氯仿-甲醇-水的两相溶剂体系，充分摇匀后，室温静置过夜;两相溶剂分配达到平衡后，按上相和下相分开放入棕色广口瓶中，超声脱气20min，备用;准确称取印度防己粗提物5.5g溶解于下相中，超声溶解，得到16.7g/L的样品溶液，备用;将两相溶剂系统中已超声脱气的上相为固定相，下相为流动相，以10?25mL/min的速度栗入高速逆流色谱分离管中，待上相充满分离管后，顺时针旋转，缓慢均匀调节主机转速至600-900r/m in，同时以1.5mL/min的速度将下相注入其中，待两相平衡，将适量印度防己粗提物溶液注入分离管中，采集数据，按照色谱峰收集目标成分。2.权利要求1所述的一种从印度防己中提取、分离和纯化印防己苦内酯的方法，其特征在于所述步骤(2)中用到的大孔树脂是经过预处理的。3.根据权利要求1所述的一种从印度防己中提取、分离和纯化印防己苦内酯的方法，其特征在于所述步骤(3)用到的溶剂系统石油醚-氯仿-甲醇-水的体积比为(3-6):(2-9):(1-7):(3-8)o
【专利摘要】本发明公开了一种从防己科植物印度防己？Amamirta？cocculus？L.(Cocculus？indicus)种子提取、分离和纯化印防己苦内酯的方法。将印度防己晒干、粉碎后，乙醇回流提取，D101大孔树脂富集，后采用高速逆流色谱进行分离和纯化。该发明的优势：本发明（1）先用大孔树脂有效成分进行富集，降低了后续工序的处理量；（2）采用高速逆流色谱进行分离和纯化，不仅实现了连续化作业、动态逆流提取，且提高了有效成分的得率。
【IPC分类】C07D493/18
【公开号】CN105669693
【申请号】CN201511013680
【发明人】王宁, 白凤阁
【申请人】南京欣昊医药科技有限公司
【公开日】2016年6月15日
【申请日】2015年12月31日