一种制备水凝胶的多肽及其制备的水凝胶的制作方法
【技术领域】
[0001] 本发明设及的水凝胶的制备技术领域，具体设及一种制备水凝胶的多肤及其制备 的水凝胶。
【背景技术】
[0002] 现有技术制备水凝胶可分为大分子交联和小分子自组装两类。小分子合成较为容 易，但由于其结构为人工设计、形成凝胶的利用的均为次级键作用力，造成了凝胶降解困 难，形成的凝胶强度有限。高分子凝胶具备制备简单、结构易控、强度可观的特点，但难W实 现生物降解;同时难W实现对细胞特定功能的调控。目前采用的高分子材料如几下质、海藻 酸钢、胶原蛋白或经化学修饰的合成高分子如聚乙二醇等，运类高分子材料具备良好的支 撑性，但在合成中的化学残留、自由基引发剂、紫外线等问题限制了其广泛应用。
【发明内容】
[0003] 本发明的目的是提供一种制备水凝胶的多肤及其制备的水凝胶，从而弥补现有技 术的不足。
[0004] 本发明首先提供一种制备水凝胶的多肤，其氨基酸序列为IIISLKGQ(SEQ ID NO: 1)；
[0005] 上述多肤的N端进行了乙酷化，C端进行氨基化；
[0006] 上述的多肤用于制备水凝胶；
[0007] 本发明还提供一种水凝胶，其制备方法如下:将结构式为Ac-IsSLKGQ-N也的多肤在 pH为7~8的缓冲溶液中加热并冷却，然后加入谷氨酷胺转氨酶，37°C解育24小时后形成水 凝胶。
[000引所述的缓冲溶液，优选为化pes溶液；
[0009] 所述的谷氨酷胺转氨酶加入浓度范围为0. lU/mL至20U/mL，优选为0.9υ/ιΛ;
[0010] 短肤的添加浓度为4-32mM，优选为8mM;
[0011] -种降解上述水凝胶的方法，是加入基质金属蛋白酶-II;
[0012] 使用的基质金属蛋白酶-Π 浓度为25ng/mL至500ng/mL，优选浓度为lOOng/mL。
[0013] 上述制备的水凝胶在制备细胞培养支架中的应用。
[0014] 本发明的多肤在生理条件下，利用生物体自身的酶进行催化，形成水凝胶，避免了 外加化学剂、紫外光等对组织的伤害。且可利用生物酶进行降解，实现了通过生物体内源性 物质对凝胶的降解，避免了引入外源化学剂造成的潜在毒性和免疫原性风险;是一类较为 理想的组织工程材料，对人类生命健康具有重要意义。
【附图说明】
[0015] 图1是Ac-IsSLKGQ-N也分子经基质金属蛋白酶-Π 降解后的基质辅助激光解吸电离 分型时间质谱图；
[0016] 图2是本发明Ac-IsSLKGQ-N此分子加入谷氨酷胺转氨酶后所形成水凝胶的原子力 显微镜形貌图；
[0017] 图3是本发明AC-I3SLKGQ-N出分子加入谷氨酷胺转氨酶前的原子力显微镜形貌图； [001引图4是本发明AC-I3SLKGQ-N出分子经基质金属蛋白酶-Π 降解前水凝胶的机械强度 (储能模量G'与耗能模量G")与应力之间的关系；
[0019]图5是本发明Ac-IsSLKGQ-N出分子形成的水凝胶经基质金属蛋白酶-II降解后的机 械强度(储能模量G'与耗能模量G")与应力之间的关系；
[0020]图6是本发明本发明Ac-IsSLKGQ-N出分子形成的水凝胶经基质金属蛋白酶-Π 降解 后的原子力显微镜扫描图。
【具体实施方式】
[0021 ]下面结合具体实施例对本发明做进一步详细说明。
[0022] 首先对本发明实施例中具体选用的主要实验仪器的规格、型号做简要说明，下列 实验仪器均可通过商业渠道购买获得：
[0023] 微波辅助多肤合成仪(CEM公司，Libertyl型），
[0024] 高效液相色谱仪(Waters公司2695型分离单元，配备Waters2996型二极管阵列检 测器），
[0025] 低溫透射电子显微镜(Cyro-TEM，JE0L1400P1US型，日本电子公司，日本），
[00%] 原子力显微镜(AFM，Multimode VIII型，布鲁克公司，德国），
[0027] 旋转流变仪化aake Mars III型，热电公司，美国），
[0028] 台式离屯、机(艾本德福公司，德国），
[00巧]二氧化碳细胞培养箱化eracell 150i型，热电公司，美国），
[0030] 超净工作台(Airtech型，江苏安泰公司），
[0031] 培养级倒置显微镜(TS100型，尼康公司，日本），
[0032] 巧光倒置显微镜(DMI3000B型，莱卡公司，德国），
[0033] 一次性细胞培养瓶(25cm2costar型，康宁公司，美国），
[0034] 一次性移液管(5mL costar型，康宁公司，美国），
[0035] -次性细胞培养板(3599型，康宁公司，美国），
[0036] -次性细胞培养板(3548型，康宁公司，美国），
[0037] 液氮容器(YDS-30-125型，东亚液氮容器公司）。
[003引检测Ac-l3化KGQ-N此在Tris-HCl缓冲液中的自组装形貌检测（AFM，切ro-TEM)方 法，具体检测方法如下：
[0039] AFM扫描:取化L配好的多肤样品滴加在干净的单晶娃片表面上，迅速滴加30化L超 纯水，吸附10s，然后高纯氮气吹干样品，AFM显微镜下W轻敲模式（tapping mode)完成扫 描，扫描角度为0°，扫描速率1~1.甜Z，探针为TESP-V2型娃探针(布鲁克公司，德国），针尖 半径约为lOnm，振臂长127皿，弹性系数42N/m，同一样品在不同位置扫描5次，其结果显示， Ac-l3化KGQ-N此、Ac-IsSLKGK-N此在Tris-HCl缓冲液中的自组装形成纳米纤维结构，如图2 所示。
[0040] 切ro-TEM:吸取10化多肤溶液滴加在微栅表面，吸附6s后吸去表面液体，迅速浸没 入液态乙烧中，冷冻5min后保存于液氮中，之后使用透射电子显微镜观察。结果显示，通过 透射电子显微镜观察到两个多肤样品在Tris-HCl缓冲溶液中均体现为纤维结构，与原子力 显微镜观察到的一致，如图3所示。
[0041 ] 实施例1:
[0042] 本实施例水凝胶的制备方法，包括W下步骤：
[00