]将Mpa(Trt)-D-Tyr(Et)-OSu加入到H-1le-OH的碱性盐溶液中，TLC检测反应终，调节溶液pH值至2?3，乙酸乙酯萃取，经浓缩、石油醚析晶、干燥、重结晶得Mpa(Trt)-D-Tyr(Et)-1le-OH;
[0040](3c)、Mpa(Trt)-D-Tyr(Et)-1le-Th;r(tBu)-OH的制备:
[0041 ] 将步骤(3b)中制备的Mpa(Trt)-D-Tyr(Et)-1le-OH和HOSu溶于有机溶剂中，加入DCC，室温反应，经过滤、浓缩、石油醚析晶得Mpa (Trt) -D-Tyr (Et)-1l e-0Su ；
[0042]将Mpa(Trt)-D-Tyr(Et)-1le-OSu 加入到H-Thr(tBu)_0H 的碱性盐溶液中，TLC 检测反应终点，调节溶液pH值至2?3，乙酸乙酯萃取，经浓缩、石油醚析晶、干燥、重结晶得四肽片段[l-4]:[Mpa(Trt)-D-Tyr(Et)-1le-Thr(tBu)-0H];
[0043]其中反应步骤(3&)、(313)、(3(:)中:四肽片段的制备方法中1^&(1^0-0^?&(Trt)-D-Tyr(Et)-0H、Mpa(Trt)_D-Tyr(Et)-1le-0H分别与HOSu和DCC摩尔比为1:1?I.1:1?I.I ;H-D-Tyr(Et)-0H、H-1le-0H、H-Thr(tBu)-0H分别与碱性盐摩尔比为1:1?2;Mpa(Trt)-Osu与H-D-Tyr(Et)-OH.HCl、Mpa(Trt)-D_Tyr(Et)-Osu与H-1le_OH、Mpa(Trt)-D-Tyr(Et)-1le_0su与H-Thr(tBu)-OH的摩尔比为1:0.8?I.2。
[0044]上述步骤中有机溶剂为四氢呋喃、二氧六环、丙酮中一种或几种;碱性盐是碳酸氢钠、碳酸氢钾、碳酸钠、碳酸钾中的一种。
[°°45] 上述步骤(4)中带有侧链保护基的全保护肽链Mpa(Trt)-D-Tyr(Et)-1le-Thr(tBu) -Asn-Cys (Trt) -Pro-Orn (Boc) -Gly-Mfe 的制备方法为:
[0046]将步骤(3)中制备的四肽片段[l-4]Mpa(Trt)-D-Tyr(Et)-1Ie-Thr(tBu)-OH和HOSu 反应得 Mpa (Trt) -D-Tyr (Et) -1 I e_Thr (tBu) -OSu，再与步骤(2)中制备的五肽片段[5-9 ]NH2_Asn-Cy s (Trt)-Pro-Orn (Boc)-Gly-NIfe 偶联得带有侧链保护基的肽链 Mpa (Trt)-D-Tyr (Et)-1 I e-Thr (tBu)-Asn-Cy s (Trt)-Pro-Orn (Boc)-Gl y-NH2 ；其中 Mpa(Trt)-D-Tyr“七)-116-11^(七811)-0311与五肽片段的比例为1:0.8?1.2。
[0047]步骤(5)中的裂解试剂为加入体积比1-5%清除剂的三氟乙酸溶液;所述清除剂为三异丙基硅烷、苯甲硫醚、I，2_乙二硫醇、苯酚、水中的一种或几种。
[0048]优选的，一种液相制备阿托西班的方法，包括以下步骤:
[0049](I)、制备Tfa-Asn-OH
[0050]用三氟乙酸溶解H-Asn-0H，-10°C下加入I倍摩尔量的三氟乙酸酐，在10°C下反应30分钟，30°C下经减压浓缩，热甲苯析晶、干燥、重结晶，得到Tfa-Asn-OH；
[0051](2)、制备五肽片段[5-9]
[0052]将Tfa-Asn-OH和HOSu溶于四氢呋喃中，冰浴条件下缓慢滴加入含DCC的四氢呋喃溶液，室温搅拌反应，反应结束后滤掉不溶物，浓缩滤液，加入石油醚析晶，干燥得Tfa-Asn-Osu ；
[0053]将H-Cys(Trt)-OH溶于含有等摩尔量的碳酸氢钠水溶液中，2_8°C下加入含等摩尔量的Tfa-Asn-OSu的四氢呋喃溶液，搅拌反应，TLC监测反应终点，反应结束后，减压蒸掉四氢呋喃，加入10%柠檬酸水溶液调溶液pH值至2?3，乙酸乙酯萃取3次，合并有机相，旋蒸浓缩，饱和食盐水洗3次，无水硫酸钠干燥，加入石油醚析晶，过滤收集结晶，干燥后重结晶得Tfa-Asn-Cys(Trt)-OH;
[0054]依次偶联H-Pro-0H、H-0rn(Boc)-0H、H-Gly-NH2，得到片段 Tfa-Asn-Cys (Trt)-Pro-Orn(Boc)-Gly-NH2,用IM的哌啶水溶液脱去N端Tfa保护基，得到五肽片段[5-9] =NH2-Asn-Cys(Trt)-Pro-Orn(Boc)-Gly-Mfe ；
[0055](3)、制备四肽片段[1-4]
[0056]将Mpa(Trt)-OH和HOSu溶于丙酮中，冰浴条件下缓慢滴加入含DCC的丙酮溶液，室温搅拌反应，反应结束后滤掉不溶物，浓缩滤液，加入石油醚析晶得Mpa(Trt)-0Su。
[0057]将H-D-Tyr(Et)-0H.HCl溶于2倍摩尔量的碳酸氢钾水溶液中，2_8°C下加入含等量摩尔量的Mpa(Trt)-OSu的丙酮溶液，搅拌反应，TLC监测反应终点，反应结束后，减压蒸掉丙酮，加入1 %柠檬酸水溶液调溶液pH值至2?3，乙酸乙酯萃取3次，合并有机相，旋蒸浓缩，饱和食盐水洗3次，无水硫酸钠干燥，加入石油醚析晶，过滤收集结晶，干燥后重结晶得Mpa(Trt)-D-Tyr(Et)-OH;
[0058]然后依次偶联H-1le-0H、H-Thr(tBu)-0H，得到四肽片段[1-4] =Mpa(Trt)-D-Tyr(Et)-1Ie-Thr(tBu)-OH；
[0059](4)、制备全保护肽链
[0060]将四肽片段[l-4]Mpa(Trt)-D-Tyr(Et)-1le-Thr(tBu)-0H和 HOSu 溶于四氢呋喃中，冰浴条件下边搅拌边缓慢滴加DCC的四氢呋喃溶液，室温搅拌反应，反应结束后滤掉不溶物，浓缩滤液，加入石油醚析晶得Mpa (Trt) -D-Tyr (Et)-1l e-Thr (tBu) -OSu ；
[0061 ]将五肽片段[5-9]NH2-Asn-Cys(Trt)-Pro-0rn(Boc)-Gly-NH2 溶于碳酸钠水溶液中，2-8°C下加入Mpa(Trt)-D-Tyr(Et)-1Ie-Thr(tBu)-OSu的二氧六环溶液，搅拌反应，TLC监测反应终点，反应结束后，减压蒸掉有机溶剂，加入10 %柠檬酸水溶液调溶液pH值至2?3，过滤收集固体，水洗3 次，干燥后得 Mpa (Trt)-D-Tyr (Et)-1 I e-Thr (tBu)-Asn-Cys (Trt)-Pro-Orn(Boc)-Gly-NH2 ；
[0062](5)、制备阿托西班线性粗肽
[0063]将步骤(4)中制备的带有侧链保护基的肽链加入预冻后的TFA/苯酚/水/苯甲硫醚/I，2-乙二硫醇=82.5/5/5/5/2.5的裂解液中，氮气保护，避光，冰浴下搅拌反应0.5h，后撤去冰浴，25 °C搅拌反应3.5h;将裂解液缓慢倾倒入冷的甲叔醚中，冰柜内静置，离心得固体，用甲叔醚洗涤6次后真空干燥得除去侧链的线性粗肽Mpa-D-Tyr(Et)-1Ie-Thr-Asn-Cys-Pro-0rn-Gly-NH2 ；
[0064](6)、液相氧化，制备阿托西班线性精肽
[0065]称取步骤(5)中阿托西班线性粗肽按照lmg/ml的比例溶于体积比为2/8的乙腈/水溶液中，碳酸氨调节溶液的PH值到8.0，室温下搅拌反应，HPLC监控反应进程，反应结束后加入冰乙酸调节溶液的pH值至4.0?5.0，旋蒸，除去乙腈，经HPLC纯化、冻干后得到醋酸阿托西班精肽 c [Mpa-D-Tyr (Et)-1I e-Thr-Asn-Cys ] -Pro-Orn-Gly-Mfe。
[0066]本发明的有益效果是:
[0067](I)阿托西班线性肽合成中使用三氟乙酰基作为五肽片段的N端保护基，选用Trt、tBu、Boc作为侧链保护基，这3种保护基用常规的含三氟乙酸的裂解试剂即可去除，无需使用氢解或者极低温条件下的液氮/钠处理，简便易行，大大降低了操作难度，从而解决了 Boc策略的液相合成方法中侧链苄基脱除条件苛刻，难操作的问题；
[0068](2)全部采用液相方法，线性肽分两段合成，工序简单，相比于固相合成法或固液结合法，生产设备简单，不需要树脂、超量的保护氨基酸和缩合剂、大量的洗涤溶剂，成本更低，更易于实现大规模工业化生产。
【具体实施方式】
[0069]下面用具体实施例对本发明进行详细说明，但不限定本专利;根据本发明改变原料的投料比、或是反应溶剂或及缩合剂等，均在本发明的保护范围内。
[0070]说明书和权利要求书中所使用的缩写含义如下:
[0071 ] tBu 叔丁基
[0072]Trt 三苯甲基
[0073]Tfa 三氟乙酰基
[0074]Boc 叔丁氧羰基
[0075]HOSu N-轻基琥珀酰亚胺
[0076]DCC 二环己基碳二亚胺
[0077]实施例1: Tf a-Asn-OH的制备
[0078]将26.428(0.20!1101)!1-4811-0!1溶解于1201111三氟乙酸中，-10°(:的条件下加入28.19ml(0.20mol)三氟乙酸酐，升温到10°C，搅拌30分钟。30°C减压浓缩至60ml，加入120ml热甲苯，放置。过滤收集结晶，干燥后重结晶，得到40.18g Tfa-Asn-OH，收率88.05 %。
[0079]实施例2: Tf a-Asn-OH的制备
[0080]将39.648(0.3!1101)!1-4811-0!1溶解于1501111三氟乙酸中，-10°(:的条件下加入50.75ml(0.36mol)三氟乙酸酐，升温到10°C，搅拌30分钟。30°C减压浓缩至70ml，加入150ml热甲苯，放置。过滤收集结晶，干燥后重结晶，得到59.01 g Tfa-Asn-OH，收率86.22 %。
[0081 ]实施例 3: Tfa-Asn-Cys (Trt) -OH 的制备
[0082]将实施例1或2 中制备的 99.00g(0.43mol )Tfa-Asn_0H 和 49.48g(0.43mol )H0Su 溶于800ml四氢呋喃中，冰浴条件下边搅拌边缓慢滴加入400ml含88.66g( 0.43mol )DCC的四氢呋喃溶液，室温搅拌反应，反应结束后滤掉不溶物，浓缩滤液至500ml，加入1000ml石油醚析晶，干燥得123.62g Tfa-Asn-Osu，收率88.37 %。
[008