1.一种植物-细菌-真菌-鼠李糖脂联合修复石油污染土壤的方法,其特征在于,包括如下步骤:
1)清除石油污染土壤表面的杂质;
2)将复合微生物菌剂与地表至10~20cm深的石油污染土壤混合均匀后,均匀喷洒鼠李糖脂溶液;
3)播种狗牙根种子,覆土1~2cm。
2.根据权利要求1所述的方法,其特征在于,所述复合微生物菌剂包括枯草芽孢杆菌、荧光假单胞菌、粪链球菌和热带假丝酵母。
3.根据权利要求2所述的方法,其特征在于,所述复合微生物菌剂的制备方法包括如下步骤:
1)将枯草芽孢杆菌在lb培养基中培养至菌落数大于1×1010cfu·ml-1;
2)将荧光假单胞菌在牛肉膏蛋白胨培养基中培养至菌落数大于1×1010cfu·ml-1;
3)将粪链球菌在mrs培养基中培养至菌落数大于1×1010cfu·ml-1;
4)将热带假丝酵母在yepd培养基中培养至菌落数大于1×1010cfu·ml-1;
5)将培养后的枯草芽孢杆菌、荧光假单胞菌、粪链球菌和热带假丝酵母按体积比1:1:1:1进行混合,得混合菌;
6)将混合菌接种于载体上,于25℃恒温箱培养48小时,得复合微生物菌剂;所述载体由腐植酸和诺沃肥按重量比1:1混合制得;按质量比,混合菌:载体=1:2.5。
4.根据权利要求3所述的方法,其特征在于,所述lb培养基的组成为:蛋白胨10g,酵母膏5g,氯化钠10g,蒸馏水1l,ph=7.5,121℃灭菌20min。
5.根据权利要求3所述的方法,其特征在于,所述牛肉膏蛋白胨培养基的组成为:牛肉膏5g,蛋白胨10g,氯化钠5g,蒸馏水1l,ph=7.2~7.4,121℃灭菌20min。
6.根据权利要求3所述的方法,其特征在于,所述mrs培养基的组成为:酪蛋白10g,牛肉膏10g,酵母浸出汁5g,葡萄糖5g,醋酸钠5g,柠檬酸二铵2g,tween-801ml,mgso4·7h2o0.2g,蒸馏水1l。
7.根据权利要求3所述的方法,其特征在于,所述yepd培养基的组成为:酵母粉1g,蛋白胨20g,葡萄糖20g,蒸馏水1l,ph=6.0,115℃湿热灭菌20min。
8.根据权利要求2所述的方法,其特征在于,所述复合微生物菌剂的施撒量为2~3kg/m2。
9.根据权利要求1所述的方法,其特征在于,所述鼠李糖脂的制备方法包括如下步骤:
1)将铜绿假单胞杆菌接种于斜面培养基上,放入振荡培养箱中,37℃,转速250r/min下震荡培养24后,于110~115℃灭菌30min,得种子培养液;所述斜面培养基组成为:葡萄糖4g,蛋白胨5g,nacl5g,蒸馏水1l,ph=7~7.2,121~126℃灭菌30min;
2)将步骤1)所得种子培养液按体积百分比5%的接种量接种于发酵培养基中,放入振荡培养箱中,37℃,转速250r/min下发酵56h后,调节所得发酵液的ph至8,再将发酵液在转速为8000r/min、温度为4℃的条件下离心20min除去菌体,离心后,将上清液的ph调至2以下,放入4℃的冰箱中静置12h,再用体积比为2:1的氯仿/甲醇萃取液等体积萃取上清液,静置分层后,取下层;将中层再萃取,静置使白色沉淀层压缩,再取下层,合并下层萃取液,置于旋转蒸发器中,在真空度为0.05mpa~0.07mpa、温度为40℃的条件下蒸干溶剂,得到鼠李糖脂;
所述发酵培养基组成为:玉米油80g,kh2po44g,k2hpo46g,nano33g,nacl1.1g,kcl1.1g,mgso4·7h2o0.2g,无水cacl20.02g,蒸馏水1l,ph=7。
10.根据权利要求1所述的方法,其特征在于,所述鼠李糖脂溶液的浓度为4g/l;鼠李糖脂溶液的施撒量为1l/m2~1.5l/m2。