技术特征：
1.一种固定化金属离子亲和色谱吸附剂的制备方法，首先以带有环氧官能团的聚合物微球为基质，乙二胺为氨基化试剂，利用环氧-胺开环反应，对微球表面进行氨基化处理，再以3,4,5-三羟基苯甲醛为修饰剂，利用氨醛缩合反应在微球表面引入邻苯三酚基团，形成席夫碱，还原后，与ti
4+
离子进行螯合，即制备出ti
4+-imac功能材料，该材料可用作固定化金属离子亲和色谱的吸附剂。2.按照权利要求1所述固定化金属离子亲和色谱吸附剂的制备方法，其特征在于：(1)以二缩三丙二醇二丙烯酸酯和甲基丙烯酸缩水甘油酯为单体，聚乙烯醇为分散剂，过氧化苯甲酰为引发剂，采用悬浮聚合法制备带有环氧官能团的聚合物微球；(2)以乙二胺为氨基化试剂，利用环氧-胺开环反应，对微球表面进行氨基化处理；(3)以3,4,5-三羟基苯甲醛为修饰剂，利用氨醛缩合反应，在微球表面形成含邻苯三酚基团的席夫碱，再用硼氢化钠将席夫碱中可逆的的氨氮双键还原为不可逆的氨氮单键，增加材料的稳定性；(4)以硫酸钛为螯合剂在微球表面螯合ti
4+
离子，制备ti
4+-imac功能材料。3.根据权利要求2所述的制备方法，其特征在于：可按如下步骤操作，(1)带有环氧官能团的聚合物微球的制备：先将0.2～0.6g的聚乙烯醇加入到20～60ml水-甲苯的混合溶剂中(水/甲苯＝5/1～5/3，体积比)，在50～150rpm的机械搅拌下，升温到70～85℃使其完全溶解后再冷却至室温；然后逐滴加入2.0～4.0ml甲基丙烯酸缩水甘油酯和3.0～6.0ml二缩三丙二醇二丙烯酸酯，接着加入50～100mg的过氧化苯甲酰，继续以50～150rpm的搅拌速率进行机械搅拌，2～3h后升温至85～95℃，继续反应2～4h后停止加热；产物依次用甲醇和水为洗涤剂进行洗涤，50～70℃真空干燥6～12h，得到带有环氧官能团的聚合物微球；(2)邻苯三酚功能化的聚合物微球的制备：在容器中将1.0～3.0g步骤(1)中得到的带有环氧官能团的聚合物微球分散在20～50ml无水乙二胺中，在60～80℃条件下，以50～150rpm的搅拌速度加热回流4～8h；反应结束后，用乙醇将材料洗至中性，得到氨基功能化的聚合物微球；接着将该微球分散到50～200ml浓度为0.02～0.05g/ml的3,4,5-三羟基苯甲醛的乙醇溶液中，在60～80℃条件下，以50～150rpm的速率搅拌，加热回流4～12h，产物用乙醇洗涤；然后再将得到的产物分散在50～200ml浓度为0.005～0.02g/ml的硼氢化钠水溶液中，室温下以50～150rpm的速率搅拌2～10h；反应结束后，所得材料用水洗至中性，得到邻苯三酚基团功能化的聚合物微球；(3)ti
4+-imac功能材料的制备：将步骤(2)中得到的邻苯三酚基团功能化的聚合物微球材料重新分散在10～20ml浓度为0.5～1.0g/ml的硫酸钛(ti(so4)2)溶液中，室温下以50～150rpm的频率，孵育振荡反应4～16h，反应结束后用去离子水洗涤至中性，50～80℃真空干燥5～12h，得到ti
4+-imac功能材料。4.一种权利要求1～3任一所述方法制备获得的ti
4+-imac功能材料。5.一种权利要求4所述ti
4+-imac功能材料的应用，其作为固定化金属离子亲和色谱的吸附剂，用于富集生物样品中的磷酸化肽段。6.根据权利要求5所述的应用，其特征在于：所述的生物样品为人体或动物的体液、组织或细胞酶解液等。
技术总结
本发明涉及一种可重复使用的固定化金属离子亲和色谱(Immobilizedmetal affinity chromatography，IMAC)吸附剂及其制备和应用。具体是以二缩三丙二醇二丙烯酸酯和甲基丙烯酸缩水甘油酯为单体，采用悬浮聚合法制备带有环氧官能团的聚合物微球，然后用乙二胺将微球表面进行氨基功能化，接着以3,4,5-三羟基苯甲醛为修饰剂，在微球表面引入邻苯三酚基团，其可作为配体与钛离子(Ti
技术研发人员：欧俊杰 孙传盛 马淑娟
受保护的技术使用者：威高集团有限公司
技术研发日：2021.03.16
技术公布日：2022/9/19