一种便捷的测定食品血糖生成指数的体外方法与流程

文档序号:11913041阅读:来源:国知局

技术特征:

1.一种测定试验食品GI的体外消化模型方法,所述方法包括:

1)测定试验食品的组成成分含量;

2)称取合适的测试样品,将测试样品在人体口腔模型中进行消化;

3)将步骤2)中样品在人体胃模型中进行消化;

4)将步骤3)中样品在人体肠道模型中消化;

5)将步骤4)中经过所述固定时间消化后,立即将模拟消化的样品取样处理,已停止酶反应;

6)测定来自步骤5)的消化样品中不同消化时间的葡萄糖含量;

7)使用预测方程,从步骤6)中得到的试验数据,计算该试验食品的GI,所述预测方程源自校准样品的校准数据分析,其中所述校准数据为相同类型,且以与步骤(1)至(6)中测定的试验食品的数据相同的方式获得,且其中所述校准样品具有已知的体内GI值。

2.权利要求1的体外消化模型方法,其中步骤1)中食品的组成成分含量包括:水分含量测定采用GB 5009.3-2010中的烘干法;粗蛋白质采用GB 5009.5-2010中的凯氏定氮法;灰分的测定采用GB 5009.4-2010灼烧法;脂肪的测定采用GB 5009.6-2003中的索氏抽提法;膳食纤维的测定采用GB 5009.88-2014中的酶重量法;总碳水化合物的测定采用差减法。

3.权利要求1的体外消化模型方法,其中步骤2)中称取测试的样品量依据步骤1)测定结果进行计算,使得称取的最终样品中有效碳水化合物含量为1 g。

4.权利要求1的体外消化模型方法,其中步骤2)中人体口腔模型的建立,其特征在于:固体样品通过粉碎机常温粉碎后,过60目筛网,半固体样品通过打浆机打碎至浆,液体样品直接吸取适量体积即可;将合适重量或体积的样品加入到250 mL碘量瓶中,加入1 mL在37 oC预热的模拟唾液和3 mL浓度为0.1 mol/L的磷酸缓冲溶液,混匀后在37 oC的环境中用研钵棒轻轻上下敲打15次(或15 s);所使用的模拟唾液用克隆来源于人类唾液的α-淀粉酶(Sigma,CAS号9000-90-2)配制,其通过以下步骤配制:0.025 g酶粉加入100 mL蒸馏水,在35 oC,150 rpm中保持20 min,然后在1500 rpm,离心15 min,上清液即为模拟唾液,并且需要现用现配。

5.权利要求1的体外消化模型方法,其中步骤3)中人体胃模型的建立,其特征在于:立即用4 mL pH 6.9的磷酸缓冲液(0.1 mol/L)冲洗研钵棒,保证研钵棒上的样品都转移至碘量瓶中,加入6 mL模拟胃液,利用2 mol/L HCl溶液调到pH 1.5,放入3-5颗玻璃球,然后放在37 oC摇床中保温30 min,水浴摇床转速为120 rpm;所使用的模拟胃液用克隆来源于猪胃粘膜胃蛋白酶(Sigma,CAS号9001-75-6)配制,其通过以下步骤配制:0.5 g胃蛋白酶粉和0.024 g NaCl溶解于60 mL pH 6.9的磷酸缓冲液(0.1 mol/L),待全部溶解后,缓慢加入0.5 g瓜尔豆胶,边加入边搅拌,直至溶解,所形成的溶液即为模拟胃液,此胃液需要现用现配。

6.权利要求1的体外消化模型方法,其中步骤4)中人体肠道模型的建立,其特征在于:将10 mL磷酸缓冲液(pH 6.9,0.1 mol/L)加入到权利要求1中的步骤3)溶液中,利用50%的NaOH溶液调节pH为6.9;然后加入650 μL模拟胰液,补充蒸馏水至50 mL,在37 oC摇床中保温180 min,摇床转速为120 rpm;所使用的模拟胰液由以下A、B、C和D四部分组成:1)A部分是含有0.06 mol/L MgCl2和0.3 mol/L CaCl2的MgCl2-CaCl2溶液;2)B部分是由来源于猪胰腺的胰酶(Sigma,CAS号8049-47-6)配制,其通过以下步骤配制而成:4 g胰酶粉和4 g猪胆盐加入100 mL蒸馏水,在35 oC,150 rpm中保持20 min,然后在1500 rpm,离心15 min,取上清液即为B部分;3)C部分是来源于黑曲霉的淀粉葡萄糖苷酶(Sigma,CAS号9032-08-0);4)D部分是由来源于面包酵母的蔗糖酶(Sigma,CAS号9001-57-4)配制,其通过以下步骤而成:0.01 g酶粉加入到10 mL pH 6.9,0.1 mol/L的磷酸缓冲液中,搅拌均匀后,10000 rmp,冷冻离心10 min,吸取上清液即为D部分;具体的为:125 μL的A部分,125 μL的B部分,200 μL的C部分和200 μL的D部分组成,并且B和D部分需要现用现配。

7.权利要求1的体外消化模型方法,其中步骤5)中所述固定时间一般是指:0、5、10、15、20、30、45、60、90、120和180 min,但不局限于以上固定时间点,可以是包含120 min在内的模拟消化3 h过程内的随意点,所取固定时间点越多越有利于结果分析,但结合难以程度和对结果分析的影响情况,建议选取8-12个固定时间点,并且在模拟消化前期所取固定时间点多一些;步骤5)中所述样品取样处理是指,从模拟消化体系中均匀吸取1 mL消化液;步骤5)中所述停止酶反应其特征在于:将上述的消化液加入到含有4 mL无水乙醇的试管中,于60 oC加热10 min,然后立即在冰水浴中冷却。

8.权利要求1的体外消化模型方法,其中步骤6)中消化样品中不同消化时间葡萄糖含量的测定,其特征在于采用高效液相方法测定,包括以下具体步骤:采用Hypersil-NH2柱(250 mm×4.6 mm,5 μm);流动相为乙腈-水(70:30,v/v)混合液,流动相使用前以微孔有机滤膜(0.45 μm)过滤,超声脱气;流速为1.0 mL/min;柱温温度为30 oC;监测器为示差检测器;进样量为10 μL;样品在冷冻离心机中离心,10000 rmp,10 min,吸取上清液,用双蒸水稀释合适比例后,利用0.45 μm水相微孔过滤膜除杂,装入液相检测样品瓶中,封盖即可;以不同浓度的葡萄糖标准溶液与峰面积作图制作标准曲线,样品中葡萄糖浓度依据所绘制的标准曲线进行计算。

9.权利要求1的体外消化模型方法,其中步骤7)中的预测方程为GI=0.862HI+8.189(HI为2 h内水解率);其中HI的获得,是通过以下步骤计算得到:1)依据权利8获得不同消化时间葡萄糖含量,绘制葡萄糖浓度变化图(折线图);2)利用分段梯形面积计算方法求得2 h内曲线下的面积A;3)以参照品的HI为100,根据1)中参照品和样品模拟消化过程中葡萄糖浓度变化图下的面积比,计算样品的HI,即HI样品=A参照品/A样品×100;其中参照品选为麦芽糖,其特征在于麦芽糖的GI值为已知,同时食品中的有效碳水化合物多数为淀粉类物质,通过消化途径降解过程中有麦芽糖产生,而麦芽糖能被淀粉葡萄糖苷酶完全降解生成葡萄糖(即水解率为100),进入血液,引起血糖升高;其中步骤7)中计算样品的GI值,其特征在于利用上述的预测方程及上述获得的样品HI计算求得。

10.权利要求4、5和6中的pH 6.9,0.1 mol/L的磷酸缓冲液,其特征在于:由0.1 mol/L磷酸二氢钠和0.1 mol/L磷酸氢二钠进行配制而成。

当前第2页1 2 3 
网友询问留言 已有0条留言
  • 还没有人留言评论。精彩留言会获得点赞!
1