1.一种快速、低毒的蚊虫石蜡切片制作方法,其特征在于,包括以下步骤:
1)人工喂养取若干只蚊虫,饥饿10-24h,放入蚊笼内,并放入蘸满小鼠血的海绵块,30min-60min后取出蚊虫;
2)取材与固定将喂养后的蚊虫冻麻,然后去除腿和翅,放入固定液中固定,在负压下固定1h,继续室温下固定12-24h,用60%酒精清洗2-3次,然后保存在60%酒精中备用;
3)脱水、透明取固定后的虫体,在4℃条件下,依次用浓度梯度为60%、70%、90%、100%Ⅰ、100%Ⅱ的乙醇溶液脱水,每个梯度的处理时间至少为1小时,最后加入到透明剂中加热煮沸,进行透明;
4)透蜡、包埋将3)中透明好的虫体,在负压条件下放入Hemo-De和石蜡1:1的混合溶液中浸泡20-40min,然后放入石蜡中浸泡30min-1h三次,完成透蜡过程,最后,放入硬蜡中完成包埋过程;
5)切片将4)中包埋好的石蜡块经过分割、修整与固着,然后经切片机将石蜡块切成5-8μm的切片,并展片;
6)染色具体步骤为:采用苏木精染液染色2-3min,自来水冲洗5-10min,1%盐酸酒精5-10s,自来水洗3-5min,弱碱性水溶液显蓝30s,自来水洗5-10min,蒸馏水洗2-3次,0.25%水溶液伊红染液染色2-3min,蒸馏水洗1-2次,最后用梯度酒精脱水;
7)封片采用松节油稀释的树胶封片。
2.如权利要求1所述的快速、低毒的蚊虫石蜡切片制作方法,其特征在于,步骤2)中,所述固定液为Bouin氏液或含4%甲醛的PBS溶液。
3.如权利要求1所述的快速、低毒的蚊虫石蜡切片制作方法,其特征在于,步骤2)中的负压为-0.05~-0.3MPa,步骤4)中的负压为-0.1~-0.5MPa。
4.如权利要求2所述的快速、低毒的蚊虫石蜡切片制作方法,其特征在于,所述的Bouin氏液是由下列试剂按体积比配制而成:饱和苦味酸15份,福尔马林5份,冰醋酸1份。
5.如权利要求1所述的快速、低毒的蚊虫石蜡切片制作方法,其特征在于,步骤3)中,所述透明剂为甲基环己烷、氯仿或正丁醇中的一种。
6.如权利要求1所述的快速、低毒的蚊虫石蜡切片制作方法,其特征在于,步骤4)中,虫体放入石蜡中浸泡30min-1h三次具体为分别在50-55℃下浸泡30min,55-58℃下浸泡30min,58-60℃下浸泡1h。
7.如权利要求1所述的快速、低毒的蚊虫石蜡切片制作方法,其特征在于,步骤5)中,所述切片机为轮转式石蜡切片机。