原血红素和β‑葡萄糖醛酸苷酶联合在宫颈上皮细胞异质性增生检测中的应用及试剂盒的制作方法

本发明涉及液体活检病理学检测
技术领域：
，具体而言，涉及原血红素和β-葡萄糖醛酸苷酶联合在宫颈上皮细胞异质性增生检测中的应用及试剂盒。
背景技术：
：宫颈上皮细胞异质性增生的结果是宫颈癌。宫颈癌是全球女性的第二大癌症杀手，我国宫颈癌的发病率更是发达国家的6倍，且呈年轻化趋势。我国每年约有15万新发宫颈癌病例，约占全球患者总数的1/3，近8万妇女因此死去。这说明，宫颈癌成中国女性的杀手之一，摧残数以万计女性的健康，影响到中国千万家庭的幸福生活。近年来，子宫内膜癌的发病率在“超速”发展，大有赶超宫颈癌的趋势，并且其发病年龄也在逐渐年轻化。提高癌症治愈率的关键在于“三早”(早发现、早诊断、早治疗)。有证据表明，如果女性适时地进行检查，在早期发现宫颈癌并且将其扼杀在萌芽阶段的几率将会大大增高。目前检测宫颈上皮细胞异质性增生的筛查方法比较繁琐。我国推荐的宫颈癌筛查方法诸如醋酸白染色、巴氏涂片、阴道镜、液基细胞学(TCT)、人类乳头瘤病毒(HPV)等，检测步骤繁琐复杂而且收费较高，诊治脱节，诊断符合率低，性价比低等不足。这就需要寻求更简便易行和经济有效的方法来弥补以上不足。另外，目前临床检测宫颈上皮细胞异质性增生的筛查方法都是针对单个的标志物进行检测，检测结果的敏感度和特异度并不高，对宫颈癌的诊断结果不准确。有鉴于此，特提出本发明。技术实现要素：本发明的目的在于提供原血红素和β-葡萄糖醛酸苷酶作为联合标志物在制备宫颈上皮细胞异质性增生检测试剂盒中的应用，将原血红素和β-葡萄糖醛酸苷酶同时作为联合标志物，用于检测宫颈上皮细胞异质性增生，具有敏感度和特异度高的特点，有助于提高对由宫颈上皮细胞异质性增生引起的宫颈癌的诊断结果的准确性。本发明的另一目的在于提供一种宫颈上皮细胞异质性增生检测试剂盒，该试剂盒以原血红素和β-葡萄糖醛酸苷酶作为标志物进行联合检测，可用于对由宫颈上皮细胞异质性增生引起的宫颈癌的筛查、早诊、预后判断及指导个体治疗等领域，具有较高的敏感度和特异度。本发明是这样实现的：原血红素和β-葡萄糖醛酸苷酶作为联合标志物在制备宫颈上皮细胞异质性增生检测试剂盒中的应用。一种宫颈上皮细胞异质性增生检测试剂盒，其以原血红素和β-葡萄糖醛酸苷酶作为标志物进行联合检测，该宫颈上皮细胞异质性增生检测试剂盒包括：用于检测原血红素的原血红素检测试剂膜和用于检测β-葡萄糖醛酸苷酶的β-葡萄糖醛酸苷酶检测试剂膜。本发明的原血红素和β-葡萄糖醛酸苷酶联合在宫颈上皮细胞异质性增生检测中的应用及试剂盒的有益效果是：相较于以单个的原血红素或β-葡萄糖醛酸苷酶作为标志物，本发明首次提出将原血红素或β-葡萄糖醛酸苷酶作为联合标志物，应用于检测宫颈上皮细胞异质性增生的情况，令人惊喜的发现，相较于单独地以原血红素和β-葡萄糖醛酸苷酶作为标志物进行检测，将原血红素和β-葡萄糖醛酸苷酶作为联合标志物进行检测的敏感度(87％)、特异度(95％)以及约登指数(0.82)均明显提高，有助于提高对由宫颈上皮细胞异质性增生引起的宫颈癌的诊断结果的准确性。附图说明为了更清楚地说明本发明实施例的技术方案，下面将对实施例中所需要使用的附图作简单地介绍，应当理解，以下附图仅示出了本发明的某些实施例，因此不应被看作是对范围的限定，对于本领域普通技术人员来讲，在不付出创造性劳动的前提下，还可以根据这些附图获得其他相关的附图。图1为本发明实施例1提供的原血红素比色板的结构示意图；图2为本发明实施例1提供的β-葡萄糖醛酸苷酶比色板的结构示意图。具体实施方式为使本发明实施例的目的、技术方案和优点更加清楚，下面将对本发明实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述。实施例中未注明具体条件者，按照常规条件或制造商建议的条件进行。所用试剂或仪器未注明生产厂商者，均为可以通过市售购买获得的常规产品。下面对本发明实施例的原血红素和β-葡萄糖醛酸苷酶联合在宫颈上皮细胞异质性增生检测中的应用及试剂盒进行具体说明。原血红素是血红素家族的重要成员，是血红素在人体内的存在形式，是血红素结合蛋白的活性基。它由原卟啉IX与二价铁离子结合而成。据其分子结构和功能不同又分为原血红素a、b、c，在肿瘤发生过程中被释放，属于医学相关生物标志(medicine-relatedbiomarker)。致癌因素导致宫颈上皮细胞糖代谢异常，肿瘤细胞的耗糖量是正常细胞的十倍，而且磷酸戊糖途径代谢活跃，称为“瓦博格氏效应”。在肿瘤细胞能量代谢电子传递过程中，其间芬顿氏反应产生的羟自由基、过氧自由基等对线粒体造成氧化损伤，改变细胞蛋白的极性量值，使位居线粒体基膜中血红素结合蛋白疏水核(又称血红素口袋)中的原血红素释放，导致宫颈部位的分泌液、组织渗液和粘液组成的混合液体液中原血红素含量增加，其释放量与细胞癌变程度呈正相关。原血红素具有过氧化物酶的作用，可以使过氧化物脱氧，进而使供氢体氧化成含显色集团的物质。用比色法测定宫颈部位分泌液、组织渗液和粘液组成的混合液体中原血红素含量，即可显示宫颈上皮细胞是否存有异质性增生。β-葡萄糖醛酸苷酶是宫颈上皮细胞异质性增生过程中活性增强的一种生物标志物。它是由四个相同亚单位组成的糖蛋白，广泛存在于人体的各种组织及体液中，生理状态下具有参与细胞增生的作用，而在病理状态下，β-葡萄糖醛酸苷酶可以作用于葡萄糖醛酸甙的β一糖苷键，水解癌周结缔组织中的蛋白多糖及糖蛋白，破坏其网状结构的防御作用，有利于癌细胞的浸润与扩散。有关宫颈癌β-葡萄糖醛酸苷酶活性增高的机制，一是为适应肿瘤生存引起的机体对酶代谢的改变，如癌细胞分泌β-葡萄糖醛酸苷酶增强，癌细胞膜对β-葡萄糖醛酸苷酶通透性改变，对该酶抑制剂的缺乏或增加；二是肿瘤组织浸润并且破坏周围正常组织，引起其它组织酶生成异常，或因肿瘤压迫梗阻引起该酶的大量释放，造成β-葡萄糖醛酸苷酶增高。通过联合应用形态学细胞水平的免疫组化技术、亚细胞水平的免疫电镜技术和机能学的ELISA技术，对宫颈癌组织及宫颈部位分泌液、组织渗液和粘液组成的混合液体中β-葡萄糖醛酸苷酶进行的同步检测显示，β-葡萄糖醛酸苷酶在宫颈癌患者组织及宫颈部位分泌液、组织渗液和粘液组成的混合液体中增高，是由癌细胞自身的生物学特性决定的，缘于肿瘤细胞为适应其快速过度增殖和异常分化的自主性生长的生存方式而产生的自我调控，由其自身独特的生长方式决定并成为内因的。在最适温度与PH条件下，酚酞葡萄糖醛酸甙经β-葡萄糖醛酸苷酶催化水解，释放出游离酚酞。加碱性溶液终止反应，酚酞呈红色。观察酚酞指示的颜色变化，即可了解样本液中β-葡萄糖醛酸苷酶的活性，显示宫颈上皮细胞是否存有恶变及其程度。但是，以单个的原血红素a/b/c作为标志物检测宫颈上皮细胞异质性增生的特异度比较低，而以单个的β-葡萄糖醛酸苷酶作为标志物检测宫颈上皮细胞异质性增生的敏感度比较低。鉴于此，一方面，本发明提供了原血红素和β-葡萄糖醛酸苷酶作为联合标志物在制备宫颈上皮细胞细胞异质性增生检测试剂盒中的应用。再进一步地，上述的宫颈上皮细胞为宫颈鳞状上皮细胞或柱状上皮细胞。也就是说，本发明提供的原血红素和β-葡萄糖醛酸苷酶可作为联合标志物在检测宫颈鳞状上皮细胞或宫颈柱状上皮细胞异质性增生中进行应用，根据对原血红素和β-葡萄糖醛酸苷酶的检测结果反映出检测宫颈鳞状上皮细胞或柱状上皮细胞异质性增生情况。此外，进一步地，上述的宫颈上皮细胞细胞异质性增生检测试剂盒使用宫颈部位的分泌液、组织渗液和粘液组成的混合液体作为检验样本，检测样本内是否含有异质性增生的宫颈上皮细胞例如宫颈鳞状上皮细胞或宫颈柱状上皮细胞。本发明首次提出将原血红素和β-葡萄糖醛酸苷酶作为联合标志物，用于检测宫颈上皮细胞异质性增生(例如检测宫颈上皮细胞异质性增生尤其是宫颈鳞状上皮细胞异质性增生或宫颈柱状上皮细胞异质性增生)。相较于单独地以原血红素或β-葡萄糖醛酸苷酶作为标志物，将原血红素和β-葡萄糖醛酸苷酶作为联合标志物，用于检测宫颈上皮细胞异质性增生，这两种标志物的检测结果可相互印证，相互补充，从而弥补其各自的不足，因而具有更高的敏感度和特异度，有助于提高对由宫颈上皮细胞异质性增生引起的宫颈癌的诊断结果的准确性。另一方面，本发明还提供了一种宫颈上皮细胞异质性增生检测试剂盒，以原血红素和β-葡萄糖醛酸苷酶作为标志物进行联合检测，该宫颈上皮细胞异质性增生检测试剂盒包括：用于检测原血红素的原血红素检测试剂膜和用于检测β-葡萄糖醛酸苷酶的β-葡萄糖醛酸苷酶检测试剂膜。本发明所提供的宫颈上皮细胞异质性增生检测试剂盒可对宫颈上皮细胞异质性增生的标志物原血红素和β葡萄糖醛酸苷酶进行同时联合检测，具有操作简单，检测结果准确的特点。其可用于对由宫颈上皮细胞异质性增生(例如宫颈鳞状上皮细胞异质性增生或宫颈柱状上皮细胞异质性增生)引起的宫颈癌的筛查、早诊、预后判断及指导个体治疗等领域，具有较高的敏感度和特异度。进一步地，上述宫颈上皮细胞异质性增生检测试剂盒还包括样本前处理液，该样本前处理液由pH为6.8-7.8、浓度为0.05mol/L的Tris-Hcl(三羟甲基氨基甲烷-盐酸)缓冲液与EDTA(乙二胺四乙酸二钠)混合制得。优选地，Tris-Hcl缓冲液的pH为7.4。优选地，EDTA在样本前处理液的浓度为0.01-0.03mol/L，更优选地，EDTA在样本前处理液的浓度为0.02mol/L。进一步地，上述的原血红素检测试剂膜由以下方法制得：(1)将聚乙烯吡咯烷酮与磷酸缓冲液混合，得到第一混合液；(2)将原血红素空白试剂膜浸泡于上述第一混合液中，去除上述原血红素空白试剂膜的水分后，得到原血红素试剂膜半成品；其中，去除上述原血红素空白试剂膜的水分为：淋去原血红素空白试剂膜上的多余试剂，烘干，得到原血红素试剂膜半成品，当然，也可按其他的方法将浸泡后的原血红素空白试剂膜的水分除去，其也属于本发明的保护范围。(3)将上述原血红素试剂膜半成品浸泡于第二混合液中，去除上述原血红素试剂膜半成品的水分后，得到成品的原血红素检测试剂膜，上述第二混合液由3，3’，5，5’-四甲基联苯胺、无水乙醇和过氧化羟基异丙苯混合制得。其中，去除上述原血红素试剂膜半成品的水分为：淋去原血红素试剂膜半成品上多余的试剂，均匀地烘干即可。优选地，上述的磷酸缓冲液的浓度为0.8-2mol/L、pH为3.2-6.8。更优选地，上述的磷酸缓冲液的浓度为1.75mol/L、pH为4.5。优选地，上述的第一混合液中的聚乙烯吡咯烷酮的浓度为7-9g/100ml。即每100ml第一混合液中含有聚乙烯吡咯烷酮7-9g。更优选地，上述的第一混合液中的聚乙烯吡咯烷酮的浓度为8g/100ml。优选地，上述的第二混合液按以下方法制得：将0.5-1g的3，3’，5，5’-四甲基联苯胺加入到500ml的无水乙醇中，然后加入1-2ml的过氧化羟基异丙苯后制得第二混合液。更优选地，3，3’，5，5’-四甲基联苯胺的加入量为0.75g，过氧化羟基异丙苯的加入量为1ml。进一步地，上述β-葡萄糖醛酸苷酶检测试剂膜由以下方法制得：(1)将聚乙烯吡咯烷酮、酚酞葡萄糖醛酸苷辛可尼丁盐与醋酸缓冲液混合，得到第三混合液；(2)将β-葡萄糖醛酸苷酶空白试剂膜浸泡于上述第三混合液中，去除上述β-葡萄糖醛酸苷酶空白试剂膜的水分后，得到β-葡萄糖醛酸苷酶试剂膜半成品；其中，去除上述β-葡萄糖醛酸苷酶空白试剂膜的水分为：淋去β-葡萄糖醛酸苷酶空白试剂膜上的多余试剂，避光条件下，28℃流动空气干燥2小时。(3)将上述β-葡萄糖醛酸苷酶试剂膜半成品浸泡于甘氨酸缓冲液中，去除β-葡萄糖醛酸苷酶试剂膜半成品的水分，得到β-葡萄糖醛酸苷酶检测试剂膜。其中，去除β-葡萄糖醛酸苷酶试剂膜半成品的水分为：淋去β-葡萄糖醛酸苷酶试剂膜半成品上多余的试剂，于40℃均匀地烘干。优选地，醋酸缓冲液的浓度为0.1-0.3mol/L、pH为6.5-7.58，更优选地，醋酸缓冲液的浓度为0.2mol/L、pH为5.0。优选地，上述第三混合液中的酚酞葡萄糖醛酸苷辛可尼丁盐的浓度为0.5-1g/100ml，更优选地，第三混合液中的酚酞葡萄糖醛酸苷辛可尼丁盐的浓度为0.79g/100ml。优选地，第三混合液中的聚乙烯吡咯烷酮浓度为7-9g/100ml，更优选地，第三混合液中的聚乙烯吡咯烷酮浓度为8g/100ml。优选地，甘氨酸缓冲液的浓度为0.2-0.3mol/L、pH为9-12。更优选地，甘氨酸缓冲液的浓度为0.22mol/L、pH为10.5。需要说明的是，本发明提供的原血红素检测试剂膜和β-葡萄糖醛酸苷酶检测试剂膜的制作方法并不限于上述的制作方法，在其他的实施例中，按其他的方法所制作得到的可用于检测的原血红素的原血红素检测试剂膜和可用于检测的β-葡萄糖醛酸苷酶检测试剂膜，只要将其用于同时应用于检测原血红素和β-葡萄糖醛酸苷酶，将二者作为联合标志物，用于检测宫颈上皮细胞异质性增生则均属于本发明的保护范围。还需要说明的是，在本发明的实施例中，上述制作方法中所用的原血红素空白试剂膜可为31ET滤纸；β-葡萄糖醛酸苷酶空白试剂膜也可为31ET滤纸，在其他的实施例中，原血红素空白试剂膜可和β-葡萄糖醛酸苷酶空白试剂膜也可以是其他的类型的滤纸，其并不限于31ET滤纸。以下结合实施例对本发明的特征和性能作进一步的详细描述。实施例1本实施例提供了一种宫颈上皮细胞异质性增生检测试剂盒，该试剂盒以原血红素和β-葡萄糖醛酸苷酶作为标志物进行联合检测。通过对原血红素和β-葡萄糖醛酸苷酶的检测结果，用于判断样本的宫颈上皮细胞异质性增生(例如宫颈鳞状上皮细胞异质性增生或宫颈柱状上皮细胞异质性增生)情况。本实施例提供的宫颈上皮细胞异质性增生检测试剂盒，其包括用于检测原血红素的原血红素检测试剂膜和用于检测β-葡萄糖醛酸苷酶的β-葡萄糖醛酸苷酶检测试剂膜。其中，本发明提供的原血红素检测试剂膜按如下方法制作：1.1、制作磷酸缓冲液。缓冲液为1.75mol/L、PH值4.5磷酸盐缓冲液。1.2、把定量聚乙烯吡咯烷酮K30加入上述磷酸缓冲液中，得到第一混合液，搅拌至全溶；其中，聚乙烯吡咯烷酮K30用量为8g/100ml。即每100ml磷酸缓冲液中加入8g聚乙烯吡咯烷酮K30。1.3、将裁切好的31ET滤纸(即原血红素空白试剂膜)在以上步骤1.2制得的第一混合液中均匀浸泡至透，淋去多余试剂，烘干，为原血红素试剂膜半成品。1.4、将定量3，3’，5，5’-四甲基联苯胺加入到无水乙醇500ml中，搅拌至完全溶解；其中，3，3’，5，5’-四甲基联苯胺加入量为0.75g。1.5、将定量过氧化羟基异丙苯加入到上述步骤1.4得到的混合溶液中，得到第二混合液，搅拌至完全溶解；过氧化羟基异丙苯的加入量为1ml。1.6、将步骤1.3制得的原血红素试剂膜半成品在步骤1.5制得的第二混合液中均匀浸泡至透，淋去多余试剂，均匀地烘干，即得原血红素检测试剂膜。1.7、避光、干燥条件下保存。本发明提供的β-葡萄糖醛酸苷酶检测试剂膜按如下方法制作：2.1、取100ml0.2mol/LpH5.0的醋酸缓冲液。2.2、将定量的0.79g酚酞葡萄糖醛酸苷辛可尼丁盐(PGA)溶于步骤2.1的醋酸缓冲液中混匀。2.3、把定量聚乙烯吡咯烷酮K30加入上述步骤2.2得到的溶液，得到第三混合液搅拌至全溶；聚乙烯吡咯烷酮K30为8g/100ml。2.4、将裁切好的31ET滤纸(β-葡萄糖醛酸苷酶空白试剂膜)在步骤2.3制得的第三混合液中均匀浸泡至透，淋去多余试剂，得β-葡萄糖醛酸苷酶试剂膜半成品。2.5、避光条件下，28℃流动空气干燥2小时。2.6、取0.22mol/L、PH值为10.5的碱性甘氨酸缓冲液。2.7、将步骤2.4制得的β-葡萄糖醛酸苷酶试剂膜半成品在步骤2.6制得的甘氨酸缓冲液中均匀浸泡至透，淋去多余试剂，40℃均匀地烘干，即得到β葡萄糖醛酸苷酶检测试剂膜。2.8、避光、干燥条件下保存。本发明提供的宫颈上皮细胞异质性增生检测试剂盒参考如下步骤进行检测：3.1、将来自某个体(宫颈癌患者、或非宫颈癌患者、或疑似宫颈癌患者)的宫颈部位分泌液、组织渗液和粘液组成的混合液体样本与样本前处理液(购买或配制)混合，得到样本混合液。样本的采集可参考：(1)戴好无菌乳胶手套，按常规对受检者作妇科内诊检查。(2)获取宫颈渗液：在做妇科内诊的同时，选用适宜的宫颈拭子，在宫颈部位以右上、右下、左下、左上及宫颈口循序轻轻擦拭，获取宫颈渗液。采液量为0.5～1ml，一般以采样拭子全部湿润为度。(3)采样后把拭子插入样本瓶保存液中轻轻搅动，使拭子上获取的宫颈渗液与样本保存液混匀，制得样本液。3.2、取宫颈上皮细胞异质性增生检测试剂盒中的原血红素检测试剂膜和β-葡萄糖醛酸苷酶检测试剂膜分别插入至样本混合液中，根据显色结果，与相应的比色板相比较，判断出单个标物的情况。通常情况下，原血红素检测试剂膜呈现蓝色为阳性，即样本中含有原血红素，否则为阴性；β-葡萄糖醛酸苷酶检测试剂膜呈现红色为阳性，即样本中含有β-葡萄糖醛酸苷酶，否则为阴性。具体地，原血红素检测结果判读标准参考图1，图1示出了原血红素比色板的颜色(蓝色)深浅所对应的判读结果(阴性、可疑阳性、阳性或强阳性)，根据原血红素检测试剂膜的显色深浅与图1所示的原血红素比色板相比较，进而判读出样本中的原血红素结果(阴性、可疑阳性、阳性或强阳性)。β-葡萄糖醛酸苷酶检测检测结果判读标准可参考图2，图2示出了β-葡萄糖醛酸苷酶比色板的颜色(红色)深浅所对应的判读结果(阴性、可疑阳性、阳性或强阳性)。根据β-葡萄糖醛酸苷酶检测试剂膜的显色深浅与图2所示的β-葡萄糖醛酸苷酶比色板相比较，进而判读出样本中的β-葡萄糖醛酸苷酶结果(阴性、可疑阳性、阳性或强阳性)。对个体的宫颈上皮细胞异质性增生的情况按表1的判读规则进行判读。其中，样本前处理液参考下方法制作：称取Tris试剂6.05g，少许水溶解，水定容至500ml；3.6ml浓盐酸用蒸馏水定容到420ml；二者混合，再加入水80ml，共1000ml的Tris-Hcl缓冲液；取7.44gEDTA加入前述的1000mlTris-Hcl缓冲液中，混合保存。表1.采用本实施例提供的细胞异质性增生检测试剂盒对检测结果的判读规则表1中的检测结果的临床意义如下：宫颈上皮细胞异质性增生判读结果为阳性是指：宫颈上皮细胞存在异质性增生；宫颈上皮细胞异质性增生判读结果为阴性是指：宫颈上皮细胞不存在异质性增生；宫颈上皮细胞异质性增生判读结果为可疑阳性是指：宫颈上皮细胞可能存在异质性增生。采用本实施例提供的宫颈上皮细胞异质性增生检测试剂盒对样本的检测结果可供临床医生在对受检者进一步检查时参考。本实施例提供的试剂盒以原血红素和β-葡萄糖醛酸苷酶作为标志物进行联合检测，可用于宫颈上皮细胞的异质性增生进行判断，具有较高的敏感度和特异度，并可进一步对对由宫颈上皮细胞异质性增生引起的宫颈癌的进行筛查、早诊、预后判断及用于指导个体治疗等领域。实施例2本实施例提供了一种宫颈上皮细胞异质性增生检测试剂盒，该试剂盒以原血红素和β-葡萄糖醛酸苷酶作为标志物进行联合检测。通过对原血红素和β-葡萄糖醛酸苷酶的检测结果，用于判断样本的细胞异质性增生情况。本实施例提供的宫颈上皮细胞异质性增生检测试剂盒，其包括用于检测原血红素的原血红素检测试剂膜、用于检测β-葡萄糖醛酸苷酶的β-葡萄糖醛酸苷酶检测试剂膜以及用于对样本进行处理的样本前处理液。其中，原血红素检测试剂膜、β-葡萄糖醛酸苷酶检测试剂膜以及样本前处理液的制作方法可参考实施例1。本实施例提供的宫颈上皮细胞异质性增生检测试剂盒的效果同实施例1。实施例3本实施例提供了将原血红素和β-葡萄糖醛酸苷酶作为联合标志物用于检测宫颈上皮细胞异质性增生的敏感度、特异度以及约登指数的验证。灵敏度(sensitivity)：又称敏感度，是指筛检方法能将实际有病的人正确地判定为患者的比例；特异度(specificity)：是指筛检方法能将实际无病的人正确地判定为非患者的比例。3.1敏感度验证3.1.1标本来源：某医疗单位临床检验室收纳的宫颈癌病人宫颈部位分泌液、组织渗液和粘液组成的混合液体标本100份。宫颈癌均经病理学检查确诊。3.1.2检测方法：采用实施例2提供的宫颈上皮细胞异质性增生检测试剂盒对上述的100份样本进行原血红素和β-葡萄糖醛酸苷酶的联合检测，并按实施例1提供的判读规则进行判读。(需要说明的是，也可以采用其他的试剂盒或方法检测100份样本原血红素和β-葡萄糖醛酸苷酶，只要以原血红素和β-葡萄糖醛酸苷酶作为联合标志物用于对宫颈上皮细胞的异质性增生进行检测即可)，宫颈上皮细胞异质性增生的检测结果见表2。表2.以原血红素和β-葡萄糖醛酸苷酶作为联合标志物与单独的以原血红素或β-葡萄糖醛酸苷酶作为标志物的检测宫颈癌样本的敏感度标志物强阳性阳性阴性可疑阳性敏感度(％)原血红素38529191β-葡萄糖醛酸苷酶84940360原血红素+β-葡萄糖醛酸苷酶1060131787注：表中数据为相应检测结果的宫颈癌样本数。表2显示了以原血红素和β-葡萄糖醛酸苷酶作为联合标志物与单独的以原血红素或β-葡萄糖醛酸苷酶作为标志物的检测宫颈癌样本的敏感度，从表2可知，单独地以原血红素作为标志物检测样本的敏感度明显高于单独地以β-葡萄糖醛酸苷酶作为标志物检测样本的敏感度(p<0.01)；以原血红素和β-葡萄糖醛酸苷酶作为联合标志物检测样本的敏感度高于单独地以β-葡萄糖醛酸苷酶作为标志物检测样本的敏感度(p<0.01)；以原血红素和β-葡萄糖醛酸苷酶作为联合标志物检测样本的敏感度与以原血红素作为标志物检测样本的敏感度差异并不显著(p>0.05)。3.2特异度验证3.2.1标本来源：与步骤3.1.1中的相同医疗单位临床检验室收纳的非宫颈癌患者宫颈部位分泌液、组织渗液和粘液组成的混合液体标本100份。非宫颈癌患者为其它原因需要进行宫颈细胞病理学检查，均除外宫颈癌者。3.2.2检测方法：同步骤3.1.2，异质性增生的检测结果见表3。表3.以原血红素和β-葡萄糖醛酸苷酶作为联合标志物与单独的以原血红素或β-葡萄糖醛酸苷酶作为标志物的检测非宫颈癌样本的特异度标志物强阳性阳性阴性可疑阳性特异度(％)原血红素42964367β-葡萄糖醛酸苷酶0390797原血红素+β-葡萄糖醛酸苷酶05672895注：表中数据为相应检测结果的非宫颈癌样本数。表3显示了以原血红素和β-葡萄糖醛酸苷酶作为联合标志物与单独的以原血红素或β-葡萄糖醛酸苷酶作为标志物的检测非宫颈癌样本的特异度，从表3可看出，以原血红素和β-葡萄糖醛酸苷酶作为联合标志物检测样本的特异度明显高于单独地以原血红素作为标志物检测样本的特异度(p<0.01)，并且以原血红素和β-葡萄糖醛酸苷酶作为联合标志物检测样本的特异度与单独地以β-葡萄糖醛酸苷酶作为标志物检测样本的特异度差异并不明显(p>0.05)。3.3约登指数3.3.1单独地以原血红素作为标志物检测的约登指数为0.58；3.3.2单独地以β-葡萄糖醛酸苷酶作为标志物检测的约登指数为0.57；3.3.3以原血红素和β-葡萄糖醛酸苷酶作为联合标志物检测的约登指数为0.82。约登指数是指：敏感度与特异度之和减去1，其表示筛检方法发现真正的患者与非患者的总能力，指数越大说明筛查实验的效果越好，真实性越大。由上述结果可知，以原血红素和β-葡萄糖醛酸苷酶作为联合标志物用于筛查宫颈上皮细胞的异质性增生的效果更好，其真实性越大，相应地诊断结果也准确，大大地提高了对由宫颈上皮细胞异质性增生引起的宫颈癌的诊断结果的准确性。综上，本发明首次以原血红素和β-葡萄糖醛酸苷酶作为联合标志物用于检测宫颈上皮细胞异质性增生情况，令人惊讶的结果是其敏感度达到87％、特异度达到95％、约登指数达到0.82，均明显高于单独地以原血红素或β-葡萄糖醛酸苷酶作为标志物的检测，且漏诊率和误诊率都非常低，符合筛查试剂的要求，适合于做大数据人群的由宫颈上皮细胞异质性增生引起的宫颈癌筛查，有助于提高对由宫颈上皮细胞异质性增生引起的宫颈癌的诊断结果的准确性。以上所述仅为本发明的优选实施例而已，并不用于限制本发明，对于本领域的技术人员来说，本发明可以有各种更改和变化。凡在本发明的精神和原则之内，所作的任何修改、等同替换、改进等，均应包含在本发明的保护范围之内。当前第1页1 2 3