一种基于流式细胞术定量分析细胞核内转录因子含量的方法与流程

文档序号:20002537发布日期:2020-02-22 03:18阅读:来源:国知局

技术特征:

1.一种基于流式细胞术定量分析细胞核内转录因子含量的方法,其特征在于,其包括如下步骤:

细胞核分离步骤:将待检测的细胞进行细胞核分离,得到细胞核;

转录因子染色步骤:用转录因子抗体与所述细胞核孵育,然后用荧光素标记的二抗进行孵育,得到荧光染料标记的细胞核。

流式细胞术分析步骤:采用流式细胞术分析染色后的细胞核的荧光强度。

2.根据权利要求1所述的方法,其特征在于,在细胞核分离步骤中,将待检测的细胞与核质分离试剂混合,经静置、离心后,弃去上清胞质,再往沉淀中加入核质分离试剂,经静置、离心后,弃去上清,获得沉淀,即为所述细胞核。

3.根据权利要求2所述的方法,其特征在于,静置的条件为:温度3-6℃,时间4-6min。

4.根据权利要求2所述的方法,其特征在于,离心的条件为:转速:450-550g,时间4-6min。

5.根据权利要求1所述的方法,其特征在于,在转录因子染色步骤中,在用转录因子抗体孵育前,将得到的所述细胞核用多聚甲醛固定,再用tritonx-100透化,接着用山羊血清进行封闭。

6.根据权利要求5所述的方法,其特征在于,所述多聚甲醛的浓度为3%-5%。

7.根据权利要求5所述的方法,其特征在于,所述tritonx-100的浓度为0.1%-0.3%。

8.根据权利要求5所述的方法,其特征在于,所述山羊血清的浓度为4%-6%。

9.根据权利要求5-8任一项所述的方法,其特征在于,封闭后,载玻片上的所述细胞核用抗褪色封片剂包埋封片。

10.根据权利要求1所述的方法,其特征在于,所述荧光染料选自异硫氰酸荧光素、四甲基罗丹明-5(6)-异硫氰酸、cy2、cy3、cy5、cy7和alexafluor染料;

优选的,所述转录因子选自tfeb、nf-kappab、keap1、beta-catenin、hgncsymbol、nfya、arx、hoxa11、sox8、zfx、dlx6、etv1、pax6、tead3、e2f2、tfap2b、tfap2d、nfix、pax7、mlxipl、etv7、znf200、hivep2、nr1h4、isl1、snai2、runx3、hsf2、nr1h3、pou2f2、arntl2、nr2e3、hoxc8、sox30、barx2、zic2、nfe2l3、alx4、foxc1、prdm1、mxd1、csda、gsc2、dlx3、dmrt3、mef2b、pou1f1、znf76、foxj2、ybx1、nfyc、spi1、klf6、zfy、cbfb、mef2a、tfe3、pitx1、rora、hes2、mnt、tcf3、srebf1、nfatc3、tp63、tbx21、gli2、tead2、znf37a、fosl2、pax2、rarb、nfkb2、hoxa9、tp73、cic、rfx3、tcf7、mef2c、pgr、nfe2l1、grhl2、rest、nfx1、tfap2c、rfx2、tbx5、rcor1、tfap4、znf10、pou4f3、esr1、cebpe、crem、hivep1、cdc5l、mzf1、sox10、xbp1、six4、hif1a、yy1、nfatc4、vsx1、mybl2、hnf4a、nfatc2、tcfl5、gmeb2、e2f1、elf4、gata1、klf8、klf5、tsc22d1、hsf4、nfat5、ctcf、znf174、sall1、maz、trps1、relb、lyl1、crx、meis3、znf175、dbp、klf1、etv2、usf2、znf14、erf、hbp1、sp4、dlx5、tfec、hoxa1、hoxa2、hoxa3、hoxa5、hoxa6、hoxa13、pax4、ezh2、meox2、pou6f2、gli3、lhx2、lhx6、creb3、lhx3、gata3、tlx1、pitx3、ebf3、tfam、ubtf、hoxb6、hnf1b、mlx、ezh1、dlx4、foxn1、phox2b、nfkb1、elf2、whsc1、sox6、prdm4、myf6、myf5、gli1、elk3、foxm1、cux2、crebl2、vdr、nanog、ppard、bach2、znf451、e2f3、nr2e1、tfeb、srf、hand1、irx4、nr3c1、smad5、cdx1、bcl6、tfdp2、hes1、foxp1、tfcp2l1、tlx2、stat1、otx1、id2、cebpz、dlx2、atf2、epas1、vax2、nfe2l2、prrx1、ash1l、mef2d、prdm2、zbtb17、tfap2e、nr5a2、etv3、id3、irf6、prox1、atf6、creb1、plagl1、myb、tcf21、klf12、satb2、klf9、nr4a3、onecut2、prox2、vsx2、esrrb、znf410、nkx2-3、mxi1、hoxb8、hoxb5、hoxb7、hoxb3、hoxb1、msx2、elf1、smad9、egr1、nr2c1、nfyb、tbx2、tbx4、tshz3、lhx4、myog、znf205、znf644、hoxa7、twist1、neurog3、egr2、atf1、nr4a1、hoxc13、hoxc11、nfe2、hoxc12、mxd4、ctcfl、znfx1、snai1、rbpjl、hif3a、trerf1、spdef、sox4、rreb1、runx2、gcm2、sox21、irf1、sox9、barhl1、bhlhb4、pax8、fosb、foxa2、pax1、tcf15、max、id1、plagl2、thra、nr1d1、irf3、stat5a、dach2、znf384、elk1、six1、prdm7、hivep3、bcl11b、klf2、atf4、foxp2、irf5、hoxd1、hoxd3、hoxd9、hoxd10、hoxd11、hoxd13、myod1、sox15、foxa1、nrl、klf16、jund、gata5、npas1、znf236、nfatc1、cdx4、nr1h2、barx1、rara、rfx1、pparg、e2f5、arntl、dpf2、gsc、bhlhb2、meis2、grhl1、mycn、rax、sox5、sox3、clock、ets1、hnf1a、tbx3、dmtf1、ehf、elf5、tfcp2、hey2、pax3、nkx2-1、gata4、skil、hlx、klf4、nr5a1、lmx1b、myc、dmrt1、tfap2a、irf4、gcm1、crebzf、pou2f3、six3、lbx1、stat4、prdm5、lef1、etv6、ascl1、pdx1、esr2、tcf12、zfhx3、irf8、gata6、tp53、foxk2、smad4、nfic、spib、znf593、barhl2、rxrg、tbx19、pou2f1、mael、nr1i3、lhx9、rorc、rfx5、arnt、creb3l4、sox13、meis1、dlx1、nr1i2、rbak、creb5、znf157、znf182、st18、znf7、nfib、nr6a1、zeb1、vax1、tcf7l2、nkx6-2、znf215、tbx6、thrb、pou4f2、nr3c2、fli1、pou4f1、tcf7l1、hhex、zic1、nr4a2、ubp1、tgif2lx、hoxa10、jazf1、cebpg、gabpa、klf10、batf、alx3、bach1、znf19、tsc22d3、erg、ets2、creb3l1、ski、grhl3、elk4、usf1、hoxb13、runx1、irx6、isl2、znf230、nr2f6、pknox1、aire、zbtb7b、foxh1、ikzf3、znf385a、bcl6b、gmeb1、nfia、znf281、lmx1a、atf3、rel、neurod1、znf2、msx1、elf3、fev、eomes、nkx6-1、hesx1、znf148、klf15、heyl、pitx2、hand2、ebf1、tlx3、t、neurod6、znf12、hey1、sox17、hnf4g、zhx1、phox2a、znf22、cdx2、otx2、sohlh1、dach1、snapc4、gfi1b、sall2、spic、znf202、znf143、znf3、stat6、smad3、nkx3-1、tef、pbx3、prrx2、sp2、znf91、znf23、znf180、znf146、znf444、rcor2、tbx10、e4f1、batf2、rbpj、ptf1a、foxi1、irf2、stat3、znf30、shox2、sox14、e2f6、ar、atf5、nr0b1、zeb2、bnc1、hic2、znf32、gsx1、onecut1、klf13、zfpm2、znf35、hoxd4、hoxd12、znf282、fos、smad1、emx2、sp7、npas2、irx1、irx2、six2、stat2、foxa3、scrt1、znf16、atf7、hoxb9、foxn2、znf160、znf350、sox7、junb、neurod2、znf274、etv5、foxb1、klf11、cebpb、atoh1、mizf、arnt2、znf24、hoxc5、rarg、sp3、rela、esrra、dmrt2、insm1、znf622、stat5b、hoxb2、zbtb4、zhx3、glis1、nr1d2、ddit3、prop1、smad2、znf25、fosl1、mlxip、nr2f1、etv4、hoxd8、ascl3、hsf5、foxg1、zscan2、tgif2ly、sox11、deaf1、six5、zbtb38、hic1、tgif1、nr2c2、zbtb33、irx3、jun、sox12、znf260、lcorl、maf、zhx2、msc、foxe1、zbtb7a、hes7、gata2、egr3、znf238、zfpm1、atoh7、alx1、bhlhb8、gsx2、hoxc9、hoxc10、bhlhb5、znf322a、sox2、plag1、neurog1、znf708、creb3l2、satb1、hoxb4、mafa、sox1、nkx2-5、figla、ascl2、tbx1、olig1、pou6f1、six6、foxo4、pou3f2、sry、wt1、maff、hsf1、mixl1、irf7、nr2f2、sp1、pbx1、pou3f1、mybl1、ikzf1、znf267、shox、rxra、znf197、znf396、znf395、ppara、tead1、mitf、foxd3、ascl4、mesp2、lbxcor1、mtf1、znf322b、sp6、pax5、myt1、lcor、esrrg、tcf4、pou3f4、znf398、mafg、hoxa4、hoxc6、znf181、znf44、tead4、znf273、zfp161、mier1、tfdp1、hoxc4、znf26、mafk、znf43、znf28、yy2、pax9、srebf2、pou3f3、rorb、sox18、mycl2、mafb、rxrb、pbx2、sp5、znf551、pou5f1、zbtb48、e2f4、olig2、、znf254、mxd3、crebl1、irf9、noto、zbed1、hmx1、、meox1、znf195、znf263、znf207、dpf1、wiz、zbtb32、znf221、znf582、zfp64、znf839、phf20、ikzf2、zzz3、foxp3、foxn3、znf280c、creb3l3、prdm6、zfp112、znf275、zbtb11、zfat、zxdc、znf532、znf510、znf93、znf324、znf671、znf416、znf586、znf446、znf8、znf264、mynn、evi1、znf213、znf343、ebf4、lhx5、znf302、zbtb25、zfhx4、tbx15、ikzf5、znf184、patz1、zbed4、sall4、adnp、znf516、adnp2、rhoxf1、znf629、znf423、znf500、foxf1、znf90、znf550、znf419、pbx4、znf574、znf85、evx1、zkscan1、nobox、glis3、camta2、hlf、nkx3-2、klf3、dbx1、zbtb16、rfx4、prdm13、zbtb24、tbx18、bbx、zbtb47、znf142、gon4l、mycl1、rlf、znf684、dr1、rcor3、znf541、klf7、znf271、znf430、foxo3、zbtb45、bcl11a、zfp30、znf706、znf549、zscan18、znf211、znf639、zscan20、tbx22、bhlhb3、neurod4、ikzf4、esx1、batf3、znf137、znf576、znf45、gzf1、nkx2-4、nkx2-2、znf133、ovol2、znf436、glis2、sebox、zbtb1、znf484、foxj1、zscan10、mllt1、znf557、zbtb46、mnx1、znf337、prdm12、znf317、znf426、znf331、casz1、znf341、znf227、znf141、rhoxf2、znf304、zscan5a、znf132、znf20、lhx1、toe1、znf414、egr4、em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