一种肌钙蛋白I检测试方法与流程

文档序号:19383321发布日期:2019-12-11 00:38阅读:来源:国知局

技术特征:

1.一种肌钙蛋白i检测试方法,其特征在于:包括以下步骤:

s1、fc结合蛋白进行吖啶酯标记:

s2、ctni单抗进行吖啶酯标记;

s3、fc结合蛋白与ctni单抗反应;

s4、分离未结合的bsa。

2.根据权利要求1所述的肌钙蛋白i检测试方法,其特征在于:所述步骤s1,包括以下步骤:

a1、取fc结合蛋白溶解于mes溶液中,充分溶解,配置成0.5-2.0mg/ml的bsa溶液;

a2、向a1的产物中加入偶联剂edc溶液;

a3、向a2的产物中加入吖啶酯溶液;

a4、向a3的产物中加入甘氨酸溶液;

a5、对a4的产物进行超滤,除去未结合的过量的吖啶酯。

3.根据权利要求2所述的肌钙蛋白i检测试方法,其特征在于:

在步骤a1中,所述fc结合蛋白的质量为0.5-2.0mg,所述mes溶液的体积为1ml;

在步骤a2中,所述fc结合蛋白溶液的体积为1ml,所述偶联剂edc的浓度为10-50mg/ml,所述偶联剂edc的体积为50-100ul,于25-37℃温度下,反应0.5-1h;

在步骤a3中,所述吖啶酯溶液的浓度为0.5-2.0mg/ml,所述吖啶酯溶液的体积为50ul,于25-37℃温度下,反应0.5-1h;

在步骤a4中,所述甘氨酸溶液的浓度为5.0-10mg/ml,所述甘氨酸溶液的体积为1ml,于25-37℃温度下,反应20-30min;

在步骤a5中,使用10-30kd超滤管,转速6000-8000rpm,时间15-30min。

4.根据权利要求1所述的肌钙蛋白i检测试方法,其特征在于:所述步骤s2,包括以下步骤:

b1、取ctni单抗溶解于mes溶液中,充分溶解,配置成0.5-1mg/ml的bsa溶液;

b2、向b1的产物中加入偶联剂edc溶液;

b3、向b2的产物中加入吖啶酯溶液;

b4、向b3的产物中加入甘氨酸溶液;

b5、对b4的产物进行超滤,除去未结合的过量的吖啶酯。

5.根据权利要求4所述的肌钙蛋白i检测试方法,其特征在于:

在步骤b1中,所述ctni单抗的质量为0.5-1mg,所述mes溶液的体积为1ml;

在步骤b2中,所述ctni单抗溶液的体积为1ml,所述偶联剂edc的浓度为10-50mg/ml,所述偶联剂edc的体积为50-100ul,于25-37℃温度下,反应0.5-1h;

在步骤b3中,所述吖啶酯溶液的浓度为0.5-1mg/ml,所述吖啶酯溶液的体积为50ul,于25-37℃温度下,反应0.5-1h;

在步骤b4中,所述甘氨酸溶液的浓度为5.0-10mg/ml,所述甘氨酸溶液的体积为1ml,于25-37℃温度下,反应20-30min;

在步骤b5中,使用10-30kd超滤管,转速6000-8000rpm,时间15-30min。

6.根据权利要求1所述的肌钙蛋白i检测试方法,其特征在于:所述步骤s3,包括以下步骤:

c1、将吖啶酯标记的ctni单抗和吖啶酯标记的fc结合蛋白进行混合、反应。

7.根据权利要求6所述的肌钙蛋白i检测试方法,其特征在于:

在步骤c1中,吖啶酯标记的ctni单抗和吖啶酯标记的fc结合蛋白的摩尔比为1:1~1:5,于25-37℃温度下,反应20-30min。

8.根据权利要求1所述的肌钙蛋白i检测试方法,其特征在于:所述步骤s4,包括以下步骤:

d1、使用分子筛层析法,分离纯化ctni-fc结合蛋白复合物。


技术总结
本发明公开了一种肌钙蛋白I检测试方法,本发明优点是吖啶酯属于闪光型标记物,与激发液混合后,能够瞬时达到一个极高的发光值,将吖啶酯标记物标记在cTnI单抗上和Fc结合蛋白上,通过单抗上的Fc区域与Fc结合蛋白反应,形成一个cTnI单抗‑Fc结合蛋白复合物,该复合物将有更多的吖啶酯载量,能够瞬时激发出更高信号的发光值,实现0.01ng/mL功能灵敏度的测定。

技术研发人员:田永帅;刘向祎;杨帆;曲林琳;陈利军;杨致亭
受保护的技术使用者:潍坊市康华生物技术有限公司
技术研发日:2019.09.18
技术公布日:2019.12.10
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