一种同时测定2,4-二氟苯胺中共存杂质含量的方法与流程

本发明属于化学医药中的分析检测领域，具体涉及一种同时测定2,4-二氟苯胺中共存杂质含量的方法。

技术背景

2,4-二氟苯胺作为医药有机合成中一种常用的起始物料,其主要用于制备氟苯水杨酸和妥氟沙星等新药，目前文献报道的合成方法主要有三种分别是以间二氯苯为原料,经硝化、氟代、还原后制得；或以1,2,4-三氯苯为原料,经硝化、氟化、氢解后制备；以及以间二氟苯为原料,经发烟硝酸低温硝化、还原后而得。

受目前生产技术和控制技术水平的限制，实际生产所得的2,4-二氟苯胺中，往往存在多种杂质，如1,3-二氯苯、2,6-二氟苯胺、2,6-二氟硝基苯、2,4-二氟硝基苯、2,6-二氯硝基苯、2,4-二氯硝基苯等，这些杂质与2,4-二氟苯胺一起参与到后续的药物合成中，会严重影响药物的质量和患者的健康。

然而，目前有关2,4-二氟苯胺的质量控制方法，并无相关的报道，为了对2,4-二氟苯胺中杂质进行全面控制，保证2,4-二氟苯胺作为起始物料合成的氟苯水杨酸和妥氟沙星药品的质量，进一步确保患者的用药安全，需要发明一种新的、合理的检测方法，能有效的控制2,4-二氟苯胺中杂质的含量。

技术实现要素：

本发明的目的在于提供一种同时测定2,4-二氟苯胺中共存杂质含量的方法，从而提高以2,4-二氟苯胺作为起始物料制备氟苯水杨酸和妥氟沙星等新药的质量稳定性和临床用药安全性。

本发明提供一种同时测定2,4-二氟苯胺中共存杂质含量的方法，其中所述共存杂质包括1,3-二氯苯、2,6-二氟苯胺、2,6-二氟硝基苯、2,4-二氟硝基苯、2,6-二氯硝基苯、2,4-二氯硝基苯；采用气相色谱法对2,4-二氟苯胺中共存杂质的含量进行检测；所述气相色谱条件如下：

色谱柱：100%二甲基聚硅氧烷为固定液；

升温程序：初始温度40~60℃，维持2分钟，再以每分钟20℃的速率升温至110℃，维持15分钟，再以每分钟10℃的速率升温至180℃，维持5分钟；再以每分钟50℃的速率升温至260℃，维持15分钟；

检测器：fid，温度为250℃；

载气：氮气。

进一步，所述气相色谱法中，供试品溶液的制备为将2,4-二氟苯胺加甲醇配制成浓度为10mg/ml的2,4-二氟苯胺供试品溶液。

进一步，所述气相色谱法中，混合对照品溶液的制备为分别取1,3-二氯苯、2,6-二氟苯胺、2,4-二氟苯胺、2,6-二氟硝基苯、2,4-二氟硝基苯、2,6-二氯硝基苯、2,4-二氯硝基苯对照品各适量，加甲醇稀释制成每1ml中含2,6-二氟苯胺约10μg、2,4-二氟苯胺约2.5μg、1,3-二氯苯约2.5μg、2,6-二氟硝基苯约2.5μg、2,4-二氟硝基苯约2.5μg、2,6-二氯硝基苯约2.5μg、2,4-二氯硝基苯约2.5μg的混合对照品溶液。

进一步，所述载气流速为0.8ml/min。

进一步，所述初始柱温为40~60℃，优选50℃。

进一步，所述进样口温度为150~200℃，优选200℃。

进一步，所述色谱柱的规格100%二甲基聚硅氧烷为db-130m×0.32mm×1.0μm。

本发明提供了一种同时检测2,4-二氟苯胺中共存杂质含量的方法，采用该方法各色谱锋之间的分离度高，相互之间无干扰，且峰型较好，可以同时实现对2,6-二氟苯胺、1,3-二氯苯、2,6-二氟硝基苯、2,4-二氟硝基苯、2,6-二氯硝基苯、2,4-二氯硝基苯各杂质的准确检测，从而有效控制2,4-二氟苯胺的质量。此外，本发明提供的检测方法，操作简单，容易控制，检测成本低，并且具有良好的线性关系、专属性、精密度、稳定性、灵敏度和重复性，加样回收率高，检测结果准确，可靠，为监控以2,4-二氟苯胺作为起始物料制备氟苯水杨酸和妥氟沙星等新药的质量稳定性和临床用药安全性提供了保证。

附图说明

为了更清楚地说明本发明实施例或现有技术中的技术方案，下面将对实施例或现有技术描述中所需要使用的附图作简单地介绍，显而易见地，下面描述中的附图仅仅是本发明的一些实施例，对于本领域普通技术人员来讲，在不付出创造性劳动的前提下，还可以根据这些附图获得其他的附图。

附图1为采用本发明所述方法检测空白溶液的色谱图；

附图2为采用本发明所述方法检测混合对照品溶液的色图谱；

附图3为采用本发明所述方法检测2,4-二氟苯胺供试品溶液的色图谱；

附图4为采用本发明所述方法检测加杂质的供试品溶液色谱图。

具体实施方式

为了更好地阐述该发明的内容，下面通过具体实施例对本发明进一步的验证。特在此说明，实施例只是为更直接地描述本发明，它们只是本发明的一部分，不能对本发明构成任何限制。

实施例1

本发明具体实施例中使用的原料均为已知产品，通过购买市售产品获得，具体信息如下表1；

表1原料信息表

本发明提供的一种同时检测2,4-二氟苯胺中共存杂质含量的方法，具体步骤如下；

色谱条件

仪器：agilent7890b气相色谱仪

色谱柱：100%二甲基聚硅氧烷（db-130m×0.32mm×1.0μm或极性相近）为固定液

检测器：fid检测器250℃

载气：氮气

载气流速:0.8ml/min

稀释剂：甲醇

进样口温度：200℃

进样量：1.0μl

升温程序：初始温度50℃，维持2分钟，以每分钟20℃的速率升温至110℃，维持15分钟，再以每分钟10℃的速率升温至180℃，维持5分钟；再以每分钟50℃的速率升温至260℃，维持15分钟。

检测步骤

空白溶液：甲醇

供试品溶液的制备：取2,4-二氟苯胺100mg，精密称定，置10ml量瓶中，加甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀，即得。

混合对照品溶液的制备：取2,6-二氟苯胺、2,4-二氟苯胺、1,3-二氯苯、2,6-二氟硝基苯、2,4-二氟硝基苯、2,6-二氯硝基苯、2,4-二氯硝基苯对照品各适量，加甲醇稀释制成每1ml中含2,6-二氟苯胺约10μg、2,4-二氟苯胺约2.5μg、1,3-二氯苯约2.5μg、2,6-二氟硝基苯约2.5μg、2,4-二氟硝基苯约2.5μg、2,6-二氯硝基苯约2.5μg、2,4-二氯硝基苯约2.5μg的混合对照品溶液，即得。

加杂质供试品溶液的制备：取2,4-二氟苯胺100mg，精密称定，置10ml量瓶中，加混合对照品溶解并稀释至刻度，摇匀，即得。

分别取上述空白溶液、混合对照品溶液、供试品溶液、加杂质供试品溶液，按上述色谱条件进行测定，记录色谱图，检测结果分别如图1、2、3、4所示。

参照图2、表2，采用本方法检测混合对照品溶液时，2,6-二氟苯胺、2,4-二氟苯胺、1,3-二氯苯、2,6-二氟硝基苯、2,4-二氟硝基苯、2,6-二氯硝基苯、2,4-二氯硝基苯保留时间分别为10.575min、11.733min、14.606min、15.080min、15.708min、28.865min、29.308min；由此可见，混合对照品溶液中各杂质的色谱峰，均能实现良好的分离，且相互之间无干扰。

表2混合对照品溶液中各杂质检测结果

参照图3，图4及表3，采用本发明方法检测供试品溶液及加杂质供试品溶液时，各杂质峰之间的分离度均符合要求。

表3供试品及加杂质供试品溶液中各杂质检测结果

实施例2

系统适应性试验：

加杂质供试品溶液：配制方法如实施例1。

取加杂质供试品溶液，按实施例1中的色谱条件连续进样6针，记录色谱图，检测结果见表4。

从表4中可以看出，连续进样的6份加杂质供试品溶液中，2,6-二氟苯胺、2,4-二氟苯胺、1,3-二氯苯、2,6-二氟硝基苯、2,4-二氟硝基苯、2,6-二氯硝基苯、2,4-二氯硝基苯峰的保留时间rsd均小于0.1%，峰面积rsd均小于2.0%，说明该方法下的各杂质的系统适用性符合要求。

表4：系统适用性检测结果

实施例3

检测限：

loq溶液的制备：取2,6-二氟苯胺、2,4-二氟苯胺、1,3-二氯苯、2,6-二氟硝基苯、2,4-二氟硝基苯、2,6-二氯硝基苯、2,4-二氯硝基苯对照品各适量，加甲醇稀释制成每1ml中含2,6-二氟苯胺约0.4543μg、2,4-二氟苯胺约0.5350μg、1,3-二氯苯约0.9064μg、2,6-二氟硝基苯约0.7353μg、2,4-二氟硝基苯约0.7848μg、2,6-二氯硝基苯约0.5306μg、2,4-二氯硝基苯约0.8222μg的混合溶液，即得。

取上述loq溶液，按实施例1中的色谱条件进行测定，检测结果如表5所示；

表5检测限检测结果分析

实施例4

线性及范围：

loq的制备：配制方法如实施例3。

线性溶液的制备：取2,6-二氟苯胺、2,4-二氟苯胺、1,3-二氯苯、2,6-二氟硝基苯、2,4-二氟硝基苯、2,6-二氯硝基苯、2,4-二氯硝基苯对照品各适量，加甲醇稀释制成每1ml中含2,6-二氟苯胺、2,4-二氟苯胺、1,3-二氯苯、2,6-二氟硝基苯、2,4-二氟硝基苯、2,6-二氯硝基苯、2,4-二氯硝基苯约为1.0μg的混合溶液、1.5μg的混合溶液、2.0μg的混合溶液、2.5μg的混合溶液、3.75μg的混合溶液、7.5μg的混合溶液。

分别取上述loq溶液以及线性溶液，按实施例1中的色谱条件进行测定，检测结果如表6所示：

表6各杂质线性与范围检测结果表

从表6中可以分析得出，采用本发明提供的气相色谱检测方法，检测结果中各杂质的线性关系良好，相关系数r均大于0.99，表明本发明检测方法的线性关系良好。

实施例5

回收率试验：

本实施例中的空白溶液、混合对照品溶液、供试品溶液的制备：均按照实施例1所述方法配制；

回收率溶液的制备：

60%回收率：精密称取本品约100mg置10ml量瓶中，用实施列4中每1ml中含2,6-二氟苯胺、2,4-二氟苯胺、1,3-二氯苯、2,6-二氟硝基苯、2,4-二氟硝基苯、2,6-二氯硝基苯、2,4-二氯硝基苯约为1.5μg的混合溶液稀释至刻度，摇匀，即得。平行制备3份。

100%回收率：精密称取本品约100mg置10ml量瓶中，用实施列4中每1ml中含2,6-二氟苯胺、2,4-二氟苯胺、1,3-二氯苯、2,6-二氟硝基苯、2,4-二氟硝基苯、2,6-二氯硝基苯、2,4-二氯硝基苯约为2.5μg的混合溶液稀释至刻度，摇匀，即得。平行制备3份。

150%回收率：精密称取本品约100mg置10ml量瓶中，用实施列4中每1ml中含2,6-二氟苯胺、2,4-二氟苯胺、1,3-二氯苯、2,6-二氟硝基苯、2,4-二氟硝基苯、2,6-二氯硝基苯、2,4-二氯硝基苯约为3.75μg的混合溶液稀释至刻度，摇匀，即得。平行制备3份。

分别取空白溶液、混合对照品溶液、供试品溶液、回收率溶液，按实施例1中的色谱条件进行测定，检测结果如下。

参照表7~12，从中可以分析出在该检测方法中各杂质的回收率均在80%~120%之间，符合接收标准。

表72,6-二氟苯胺回收率分析结果

注：供试品中2,6-二氟苯胺含量为0.05%。

表81,3-二氯苯回收率分析结果

表92,6-二氟硝基苯回收率分析结果

表102,4-二氟硝基苯回收率分析结果

表112,6-二氯硝基苯回收率分析结果

表122,4-二氯硝基苯回收率分析结果