1.基于生物适配体的催化发夹自组装反应检测水环境中pcb77的方法,其特征在于,包括以下几个步骤:
(1)识别探针合成:将pcb77的适配体与引物按照摩尔比1:1的比例加入到1×tbe缓冲液中,混合均匀;将混合液加热至80~95℃,恒温3~5min;然后将混合液缓慢冷却至室温,室温冷却时间为30~60min;
所述步骤(1)中pcb77的适配体序列为seqidno.1;
所述步骤(1)的引物序列为seqidno.2;
(2)发夹探针合成:将发夹探针h1与发夹探针h2各自加入到1×tbe缓冲液中,混合均匀,将各自的混合溶液加热至80~95℃,恒温3~5min,然后置于冰上,反应时间为3~5min,最后置于室温,反应时间为30~60min;
所述步骤(2)中的发夹探针h1序列为seqidno.3;
所述步骤(2)中的发夹探针h2序列为:
5′-/cy-5/agatgtgtacctcggaaaaaatcactaggtacacatc/bhq-2/ttagtgatt-3′seqidno.4;
(3)荧光测定水样中pcb77含量,包括如下步骤:
①将步骤(1)中的识别探针和步骤(2)中的发夹探针h1与发夹探针h2按照摩尔比1:(1~1.5):(1~1.5)的比例混和均匀制得混合液;
②向步骤①制得的混合液中加入pcb77标准溶液,再用结合缓冲液定容,制备成不同浓度的检测液i,然后,将检测液i加热至30~60℃,反应时间为1~2h;反应完成后,用荧光仪测定检测液i的荧光强度,获得荧光数据,绘制标准曲线;
所述荧光数据是于激发波长635nm、发射波长660nm下测得的;
所述结合缓冲液包括如下组分:nacl的质量浓度为100~150mm,tris-hcl的质量浓度为10~20mm,mgcl2的质量浓度为1~5mm,kcl的质量浓度为1~5mm,cacl2的质量浓度为1~2mm,余量为双蒸水;
③实际水样中pcb77含量的检测:按照步骤②的步骤进行检测,向步骤①制得的混合液中加入实际水样或者实际水样的稀释液制得检测液ii,代替pcb77标准溶液,获得荧光数据,并根据步骤②制备的标准曲线,计算出实际水样中pcb77的质量浓度。
2.如权利要求1所述检测水环境中pcb77的方法,其特征在于,步骤(1)中的加热温度为80℃,恒温时间为3min,室温冷却时间为30min。
3.如权利要求1所述检测水环境中pcb77的方法,其特征在于,步骤(2)中的加热温度为80℃,恒温时间为3min,置于冰上,反应时间为3min,最后置于室温,反应时间为3min。
4.如权利要求1所述检测水环境中pcb77的方法,其特征在于,步骤①中识别探针和发夹探针h1与发夹探针h2按照摩尔比1:1:1的比例混合。
5.如权利要求1所述检测水环境中pcb77的方法,其特征在于,步骤②中结合缓冲液包括如下组分:nacl的质量浓度为100mm,tris-hcl的质量浓度为10mm,mgcl2的质量浓度为1mm,kcl的质量浓度为1mm,cacl2的质量浓度为1mm,余量为双蒸水。
6.如权利要求1所述检测水环境中pcb77的方法,其特征在于,步骤②中反应温度为30℃,反应时间为1h。
7.如权利要求1所述检测水环境中pcb77的方法,其特征在于,步骤②向步骤①制得的混合液中加入pcb77标准溶液,再用结合缓冲液定容,制备成不同浓度的检测液i,以与检测液i平行的,不含pcb77的空白液作为对照液,然后,将检测液i和对照液加热至30~60℃,反应时间为1~2h;反应完成后,用荧光仪测定检测液i和对照液的荧光强度,获得荧光数据,绘制标准曲线。
8.如权利要求7所述检测水环境中pcb77的方法,其特征在于,步骤②中检测液i中pcb77的质量浓度0.1~100μg/l;
优选的,步骤②中检测液i中pcb77的质量浓度为0.1~20μg/l。
9.如权利要求1所述检测水环境中pcb77的方法,其特征在于,步骤③检测液ii中pcb77的质量浓度为0.1~100μg/l。
10.如权利要求1-9任一项所述检测水环境中pcb77的方法,其特征在于,所述步骤③中检测结果的准确性,采用标准加入法进行验证。