一种同时检测血清中多种抗精神病药物浓度的方法与流程

文档序号:22622729发布日期:2020-10-23 19:29阅读:来源:国知局

技术特征:

1.一种同时检测血清中多种抗精神病药物浓度的方法,其特征在于,

所述抗精神病药物分别为:n-去甲氯氮平、奥氮平、氯丙嗪、氯氮平、舒必利、氨磺必利、氟哌啶醇、喹硫平、去甲喹硫平、奋乃静、利培酮、齐拉西酮、9-羟利培酮、氟奋乃静、脱氢阿立哌唑和阿立哌唑;

所述抗精神病药物对应的内标物分别为:n-去甲氯氮平-d8、奥氮平-d3、氯丙嗪-d6、氯氮平-d8、舒必利-d3、氨磺必利-d5、氟哌啶醇-d4、喹硫平-d8、去甲喹硫平-13c4、奋乃静-d8、利培酮-d4、齐拉西酮-d8、9-羟利培酮-d4、氟奋乃静-d8、脱氢阿立哌唑-d8和阿立哌唑-d8;

采用超高效液相色谱串联质谱技术检测经过预处理的血清中的上述抗精神病药物,先利用超高效液相色谱将待测物与血清基质分离,再利用质谱同位素内标定量法,以标准品与内标物的浓度比为x轴,标准品与内标物的峰面积比为y轴,建立校准曲线,计算上述抗精神病药物的含量,具体色谱条件为:

(1)超高效液相色谱条件:

流动相a:0.005%~0.1%甲酸水溶液;流动相b:乙腈;

色谱柱型号:watersbehc18;

采用流动相a和流动相b为混合流动相进行梯度洗脱的方式,所述流动相a和流动相b的初始比例为80~100:20~0;所述梯度洗脱过程如下:在0-1.0分钟内,流动相a和流动相b的体积比由初始比例匀速渐变至30:70;在1.0-3.0分钟内,流动相a和流动相b的体积比由30:70匀速渐变至2:98;在3.0-5.0分钟内,流动相a和流动相b的体积比由2:98变至初始比例;每个样品采集时间为5.0分钟;

(2)质谱条件:

在电喷雾电离正离子检测模式下,采用多反应监测的质谱扫描模式,毛细管电压为2.5kv(esi+);源温度为120℃;雾化气温度为500℃,雾化气流速为800l/h,锥孔气流速为150l/h;同时监测了各目标物及其对应同位素内标。

2.根据权利要求1所述的方法,其特征在于,

所述流动相a和流动相b的初始比例为85~95:15~5;所述流动相a为0.01%~0.1%甲酸水溶液;流速为0.2~0.5ml/min;柱温为30~50℃;进样体积为0.2~5μl。

3.根据权利要求2所述的方法,其特征在于,

所述流动相a和流动相b的初始比例为90:10;所述流动相a为0.05%甲酸水溶液;所述流速为0.4ml/min;所述柱温为45℃;所述进样体积为1μl。

4.根据权利要求1所述的方法,其特征在于,所述血清为人或动物的血清。

5.根据权利要求1所述的方法,其特征在于,

所述经过预处理的血清按照如下方法制备:向血清中加入含内标的蛋白沉淀剂,再振荡离心后取上清液;所述蛋白质沉淀剂为异丙醇、甲醇与乙腈混合溶液;优选地,蛋白质沉淀剂中异丙醇、甲醇与乙腈的体积比为1:1~3:1;更优选地,蛋白质沉淀剂中异丙醇、甲醇与乙腈的体积比1:2:1。

6.根据权利要求5所述的方法,其特征在于,

所述经过预处理的血清按照如下方法制备:取50μl血清于1.5ml离心管中,向其中加入200μl含内标的蛋白质沉淀剂,振荡3~5min,在12000~15000r/min,1~5℃离心4~10min后,转移离心管中的上清液60μl至塑料内衬管中,待进样;所述蛋白质沉淀剂中异丙醇、甲醇与乙腈的体积比1:2:1。

7.根据权利要求6所述的方法,其特征在于,

所述含内标的蛋白沉淀剂按照如下方法制备:

以甲醇配制如下同位素内标母液:n-去甲氯氮平-d80.1mg/ml、奥氮平-d30.1mg/ml、氯丙嗪-d60.1mg/ml、氯氮平-d81mg/ml、舒必利-d30.25mg/ml、氨磺必利-d50.1mg/ml、氟哌啶醇-d40.01mg/ml、喹硫平-d80.1mg/ml、去甲喹硫平-13c40.1mg/ml、奋乃静-d80.01mg/ml、利培酮-d40.01mg/ml、齐拉西酮-d81mg/ml、9-羟利培酮-d40.1mg/ml、氟奋乃静-d80.01mg/ml、脱氢阿立哌唑-d81mg/ml和阿立哌唑-d80.1mg/ml;

分别移取各同位素内标母液:n-去甲氯氮平-d82.5μl、奥氮平-d35μl、氯丙嗪-d610μl、氯氮平-d81μl、舒必利-d34μl、氨磺必利-d510μl、氟哌啶醇-d410μl、喹硫平-d810μl、去甲喹硫平-13c410μl、奋乃静-d825μl、利培酮-d410μl、齐拉西酮-d81μl、9-羟利培酮-d45μl、氟奋乃静-d825μl、脱氢阿立哌唑-d81μl和阿立哌唑-d810μl;再加入至860.5μl甲醇中得到1ml混合内标溶液;

取200ul上述混合内标溶液加入至19.8ml蛋白沉淀剂中,即得含内标的蛋白沉淀剂。

8.根据权利要求7所述的方法,其特征在于,

所述标准品按照如下方法制备:

将上述抗精神病药物配制成如下浓度的标准品母液:n-去甲氯氮平2mg/ml、奥氮平1mg/ml、氯丙嗪5mg/ml、氯氮平5mg/ml、舒必利5mg/ml、氨磺必利2mg/ml、氟哌啶醇2mg/ml、喹硫平5mg/ml、去甲喹硫平10mg/ml、奋乃静1mg/ml、利培酮5mg/ml、齐拉西酮2mg/ml、9-羟利培酮2mg/ml、氟奋乃静2mg/ml、脱氢阿立哌唑2mg/ml和阿立哌唑1mg/ml;

分别移取各标准品母液:n-去甲氯氮平20μl、奥氮平20μl、氯丙嗪8μl、氯氮平10μl、舒必利8μl、氨磺必利25μl、氟哌啶醇1μl、喹硫平10μl、去甲喹硫平5μl、奋乃静1μl、利培酮1μl、齐拉西酮25μl、9-羟利培酮10μl、氟奋乃静1μl、脱氢阿立哌唑20μl和阿立哌唑50μl;再加入至785μl甲醇中得到1ml混合标准储备溶液;

将上述混合标准储备溶液以空白血清基质配制成七个不同浓度点的校准品溶液,所述校准品溶液的七个浓度点为:

氯氮平、氨磺必利、喹硫平、去甲喹硫平、齐拉西酮和阿立哌唑的浓度相同,其七个浓度点为依次为:5ng/ml、12.5ng/ml、25ng/ml、125ng/ml、250ng/ml、1250ng/ml、2500ng/ml;

n-去甲氯氮平、氯丙嗪、舒必利和脱氢阿立哌唑的浓度相同,其七个浓度点为依次为:4ng/ml、10ng/ml、20ng/ml、100ng/ml、200ng/ml、1000ng/ml、2000ng/ml;

奥氮平和9-羟利培酮的浓度相同,其七个浓度点为依次为:2ng/ml、5ng/ml、10ng/ml、50ng/ml、100ng/ml、500ng/ml、1000ng/ml;

利培酮的七个浓度点为依次为:0.5ng/ml、1.25ng/ml、2.5ng/ml、12.5ng/ml、25ng/ml、125ng/ml、250ng/ml;

氟哌啶醇和氟奋乃静的浓度相同,其七个浓度点为依次为:0.2ng/ml、0.5ng/ml、1ng/ml、5ng/ml、10ng/ml、50ng/ml、100ng/ml;

奋乃静的七个浓度点为依次为:0.1ng/ml、0.25ng/ml、0.5ng/ml、2.5ng/ml、5ng/ml、25ng/ml、50ng/ml。

9.根据权利要求7所述的方法,其特征在于,

所述蛋白沉淀剂为异丙醇、甲醇与乙腈混合溶液;优选地,蛋白质沉淀剂中异丙醇、甲醇与乙腈的体积比为1:1~3:1;更优选地,蛋白质沉淀剂中异丙醇、甲醇与乙腈的体积比为1:2:1。

10.根据权利要求8所述的方法,其特征在于,

所述空白血清基质为不含抗精神病目标药物的空白血清。


技术总结
本发明提供了一种同时检测血清中多种抗精神病药物浓度的方法,可以一次性对16种抗精神病药物进行检测,目标药物与代谢产物同时监测,灵敏度高、特异性强、准确且前处理过程简单,5.0分钟之内完成血清中抗精神病药物的分离和检测,准确度与精密度基本满足要求,可用于临床上血清中抗精神病药物的定量分析,为临床上抗精神病药物浓度监测提供简单快速的检测方法。

技术研发人员:成晓亮;李美娟
受保护的技术使用者:南京品生医学检验实验室有限公司
技术研发日:2020.05.29
技术公布日:2020.10.23
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