一种孕马尿中结合雌激素含量的测定方法与流程

文档序号:21647233发布日期:2020-07-29 03:00阅读:来源:国知局

技术特征:

1.一种孕马尿中结合雌激素含量的测定方法,其特征在于,包括以下步骤:

将孕马尿与无机酸混合进行前处理,然后用碱性物质调节ph至7.0~8.0,得到供试品溶液;

将所述供试品溶液进行高效液相色谱检测,以保留时间定性,以标准方程计算得到结合雌激素的含量,所述标准方程是以结合雌激素的浓度为自变量、峰面积为因变量的方程;所述结合雌激素包括雌酮硫酸钠、马烯雌酮硫酸钠和17α-双氢马烯雌酮硫酸钠中的一种或多种;

所述高效液相色谱的色谱条件为:

色谱柱:c18柱;

色谱柱规格:250mm×4.6mm,5μm;

流动相:包括a相和b相,其中a相为磷酸二氢钠水溶液、乙腈和甲醇的混合溶液,所述a相中磷酸二氢钠水溶液的浓度为20mmol/l,ph值为3.5;所述a相中磷酸二氢钠水溶液、乙腈和甲醇的体积比为17:2:1;b相为磷酸氢二钠水溶液和乙腈的混合溶液,所述b相中磷酸氢二钠水溶液的浓度为10mmol/l,ph值为3.5;所述b相中磷酸氢二钠水溶液和乙腈的体积比为3:7;

流动相洗脱程序为:0~18min,a相体积分数由70%逐渐降低为67%;18~23min,a相体积分数由67%逐渐降低为20%;23~28min,a相体积分数由20%逐渐升高为70%;28~35min,a相体积分数稳定在70%;

流速:1.0ml/min;

柱温:40℃;

检测波长:205nm;

进样量:20μl;

不同结合雌激素在同一色谱条件下的不同保留时间处出峰。

2.根据权利要求1所述的测定方法,其特征在于,所述无机酸为盐酸溶液,所述盐酸溶液的浓度为0.1~3mol/l。

3.根据权利要求2所述的测定方法,其特征在于,所述孕马尿与无机酸的体积比为1:1~20:1。

4.根据权利要求1所述的测定方法,其特征在于,所述碱性物质为naoh水溶液,所述naoh水溶液的浓度为0.1~3mol/l。

5.根据权利要求1所述的测定方法,其特征在于,所述调节ph至7.0~8.0后还包括用0.22μm过滤膜过滤两次后,取续滤液作为所述供试品溶液。

6.根据权利要求1所述的测定方法,其特征在于,所述孕马尿离心处理后再与无机酸混合,所述离心处理的时间为10~30min,转速为4000~6000转/分。

7.根据权利要求1所述的测定方法,其特征在于,所述标准方程的测定包括以下步骤:

分别配制17α-双氢马烯雌酮硫酸钠、马烯雌酮硫酸钠和雌酮硫酸钠的二级标准品待测溶液;

分别将所述二级标准品待测溶液进行高效液相色谱检测,分别得到二级标准品的色谱图;

所述高效液相色谱的色谱条件为:

色谱柱:c18柱;

色谱柱规格:250mm×4.6mm,5μm;

流动相:包括a相和b相,其中a相为磷酸二氢钠水溶液、乙腈和甲醇的混合溶液,所述a相中磷酸二氢钠水溶液的浓度为20mmol/l,ph值为3.5;所述a相中磷酸二氢钠水溶液、乙腈和甲醇的体积比为17:2:1;b相为磷酸氢二钠水溶液和乙腈的混合溶液,所述b相中磷酸氢二钠水溶液的浓度为10mmol/l,ph值为3.5;所述b相中磷酸氢二钠水溶液和乙腈的体积比为3:7;

流动相洗脱程序为:0~18min,a相体积分数由70%逐渐降低为67%;18~23min,a相体积分数由67%逐渐降低为20%;23~28min,a相体积分数由20%逐渐升高为70%;28~35min,a相体积分数稳定在70%;

流速:1.0ml/min;

柱温:40℃;

检测波长:205nm;

进样量:20μl;

根据所述二级标准品的色谱图,分别以17α-双氢马烯雌酮硫酸钠、马烯雌酮硫酸钠和雌酮硫酸钠的浓度为自变量、峰面积为因变量,得到标准方程。

8.根据权利要求7所述的测定方法,其特征在于,所述二级标准品待测溶液的溶剂均为甲醇-水的混合液,所述混合液中甲醇与水的体积比为1:1,所述混合液的ph值为9.0。

9.根据权利要求8所述的测定方法,其特征在于,用tris缓冲溶液将所述混合液的ph值调节为9.0。


技术总结
本发明涉及化学检测技术领域,提供了一种孕马尿中结合雌激素含量的方法。孕马尿中的碳酸盐遇到无机酸会形成中性盐、水和二氧化碳气体,从而提高柱效,进而能够解决孕马尿HPLC测定结合雌激素含量时所遇到的,每次测定不到30个样品,柱压升高,柱效降低等诸多问题,保证了样品含量测定准确性,为生产提供可靠的数据。且利用碱性物质调节pH值为7.0~8.0,这是因为:a、碱性条件下,结合雌激素的存在状态相对稳定;b、孕马尿本身的pH值约为7.5~8.5,调节至偏碱性(7.0~8.0)更接近孕马尿原有条件;c、偏碱性时检测结果的真实性与重现性均具有优势。

技术研发人员:高晓黎;黄群群;徐智勇;罗俊;马晋芳;肖雪;郭拓
受保护的技术使用者:新疆新姿源生物制药有限责任公司;新疆医科大学
技术研发日:2020.06.04
技术公布日:2020.07.28
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