检测血液中霉酚酸含量的方法与流程

本发明涉及临床化学
技术领域：
，特别涉及检测血液中霉酚酸含量的方法。
背景技术：
：免疫抑制剂是对机体的免疫反应具有抑制作用的药物，能抑制与免疫反应有关细胞(t细胞和b细胞等巨噬细胞)的增殖和功能，能降低抗体免疫反应。免疫抑制剂主要用于器官移植抗排斥反应和自身免疫病，如类风湿性关节炎、红斑狼疮、皮肤真菌病、膜肾球肾炎、炎性肠病和自身免疫性溶血贫血等。霉酚酸(mpa)是霉酚酸酯(又称麦考酚酸酯mmf，商品名为骁悉)的酯类衍生物，具有独特的免疫抑制作用和较高的安全性。mmf口服给药后在血浆酯酶的作用下迅速水解为游离的活性代谢物mpa；后者通过抑制鸟嘌呤合成，选择性阻滞t和b细胞增殖，对移植排异和自身免疫疾病均有显著的疗效，且不良反应较少。有研究表明，mmf的药动学个体差异较大，且其药动学药-时曲线下面积与药效及不良反应相关。目前少有文献报道患者服用小剂量mmf(如500mg，bid)后的药动学特征，但在临床实际应用中，国内不少肾移植术后患者会长期服用小剂量mmf(如500mg，bid)，因此有必要建立一种检测血液中霉酚酸含量的方法。目前，可以采用液相色谱质谱联用法来检测血液中霉酚酸的含量。例如，专利公开号为cn110554123a的发明专利申请公开了一种快速检测全血中免疫抑制剂的方法，可同时检测待测全血样品中的环孢霉素a、他克莫司、西罗莫司、依维莫司和霉酚酸的浓度。但该检测方法的检测时间略长。技术实现要素：本发明提供了检测血液中霉酚酸含量的方法，检测时间更短。为了达到上述目的，本发明是通过如下技术方案实现的：本发明提供了检测血液中霉酚酸含量的方法，包括：利用高效液相色谱串联质谱仪，在一定检测条件下，分别检测至少三个标准溶液，得到各个标准溶液的色谱图，其中，任一标准溶液中均含有浓度已知的霉酚酸标准品及内标物，不同标准溶液中霉酚酸标准品的浓度不同；根据各个标准溶液的色谱图，拟合得到霉酚酸的标准曲线方程；将一定量的内标工作液添加到一定量的血液样本中，并进行样本前处理以得到待测样本，其中，内标工作液中含有浓度已知的内标物；利用高效液相色谱串联质谱仪，在相同检测条件下检测待测样本，得到待测样本的色谱图；根据待测样本的色谱图和霉酚酸的标准曲线方程，计算血液样本中霉酚酸的含量；其中，所述检测条件中的液相条件包括：watersxbridgec18色谱柱，色谱柱的长度为100mm、内径为2.1mm、填料粒径为5μm，流动相a为含5-10mmol/l乙酸铵的水溶液，流动相b为甲醇，流动相a和流动相b的比例为70:30-80:20，分析时间为1.5-2.5min，柱温为30-40℃，流速为0.2-0.4ml/min，进样量为5-20μl。优选地，流动相a为含10mmol/l乙酸铵的水溶液，流动相a和流动相b的比例为75:25，分析时间为2.0min，柱温为35℃，流速为0.3ml/min，进样量为20μl。优选地，所述检测条件中的串联质谱条件包括：采用电喷雾电离源esi，正离子扫描模式，选择反应监测模式，干燥气温度为150-200℃，干燥气流速为10-15l/min，雾化气压力为25-35psi，毛细管电压为3500-4500v(+)。优选地，干燥气温度为200℃，干燥气流速为13l/min，雾化气压力为30psi，毛细管电压为4000v(+)。优选地，所述将一定量的内标工作液添加到一定量的血液样本中，并进行样本前处理以得到待测样本，包括：取一定量的内标工作液于离心管中，加入一定量的血液样本并混匀，然后加入一定量的盐酸水溶液并混匀，之后加入一定量的甲基叔丁基醚并混匀得到混合液，混合液静置分层，取上清液并用n2吹干，吹干后加入甲醇水溶液并混匀得到待测样本。优选地，所述将一定量的内标工作液添加到一定量的血液样本中，并进行样本前处理以得到待测样本，包括：用移液枪移取5-10μl内标工作液于1.5ml的离心管中，然后加入100-200μl血液样本，在转速为1500-2000rpm下涡旋混匀1-2min后，加入含0.1-0.3％盐酸的水溶液15-25μl，并在转速为1500-2000rpm下涡旋混匀1-3min后，加入800-1200μl甲基叔丁基醚萃取剂，并在转速为1500-2000rpm下涡旋混匀4-7min后，静置0.8-1.5min待分层，得到上清液；取上清液800-900μl放入另一支1.5ml离心管中，在常温下用n2缓慢吹干；向吹干的离心管中加入含60-80％甲醇的水溶液100-200μl，并在转速为1500-2000rpm下涡旋混匀1-3min后，得到待测样品。优选地，在所述分别检测至少三个标准溶液之前，进一步包括：制备至少三个标准工作液，标准工作液中含有浓度已知的霉酚酸标准品，标准工作液中霉酚酸标准品的浓度在0.5-100μg/ml范围内，不同标准工作液中霉酚酸标准品的浓度不同；利用移液器移取10μl标准工作液、10μl内标工作液置于离心管中，再移取加入含60-80％甲醇的水溶液180μl；将该离心管在转速为1500-2000rpm下涡旋混匀2-4min后，得到标准溶液。优选地，各个标准工作液中霉酚酸标准品的浓度分别为0.5μg/ml、1μg/ml、5μg/ml、10μg/ml、25μg/ml、50μg/ml、100μg/ml。优选地，内标物为吲哚美辛，且内标工作液中吲哚美辛的浓度为10μg/ml。优选地，血液样本包括：经处理至少2ml待检测血液而得到的血清、血浆或含有edta抗凝剂的全血。本发明提供了检测血液中霉酚酸含量的方法，该方法包括：基于特定的液相条件，利用高效液相串联质谱仪分别检测至少三个标准溶液，得到各个标准溶液的色谱图，各标准溶液中均含有浓度已知的霉酚酸标准品及内标物；根据各个标准溶液的色谱图拟合得到标准曲线方程；将含已知浓度内标物的内标工作液添加到血液样本中，经样本前处理以得到待测样本，再同样检测待测样本得到其色谱图；根据待测样本的色谱图和标准曲线方程，计算血液样本中霉酚酸的含量。本发明能够更加快速的检测血液样本中霉酚酸的含量。附图说明为了更清楚地说明本发明实施例或现有技术中的技术方案，下面将对实施例或现有技术描述中所需要使用的附图作简单地介绍，显而易见地，下面描述中的附图是本发明的一些实施例，对于本领域普通技术人员来讲，在不付出创造性劳动的前提下，还可以根据这些附图获得其他的附图。图1是本发明一实施例提供的一种检测血液中霉酚酸含量的方法的流程图；图2是本发明一实施例提供的霉酚酸的化学结构式；图3是本发明一实施例提供的一标准溶液中霉酚酸标准品的色谱图；图4是本发明一实施例提供的一标准溶液中吲哚美辛的色谱图；图5是本发明一实施例提供的一待测样本中霉酚酸的色谱图；图6是本发明一实施例提供的一待测样本中吲哚美辛的色谱图；图7是本发明一实施例提供的霉酚酸的线性关系图。具体实施方式为使本发明实施例的目的、技术方案和优点更加清楚，下面将结合本发明实施例中的附图，对本发明实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例是本发明一部分实施例，而不是全部的实施例，基于本发明中的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动的前提下所获得的所有其他实施例，都属于本发明保护的范围。如图1所示，本发明实施例提供了一种检测血液中霉酚酸含量的方法，该检测方法不用于疾病的诊断与治疗，可以包括以下步骤：步骤101：利用高效液相色谱串联质谱仪，在一定检测条件下，分别检测至少三个标准溶液，得到各个标准溶液的色谱图，其中，任一标准溶液中均含有浓度已知的霉酚酸标准品及内标物，不同标准溶液中霉酚酸标准品的浓度不同。请参考图2，图2示出了霉酚酸的化学结构式。本发明实施例中，所述检测条件中的液相条件包括：watersxbridgec18色谱柱，色谱柱的长度为100mm、内径为2.1mm、填料粒径为5μm，流动相a为含5-10mmol/l乙酸铵的水溶液，流动相b为甲醇，流动相a和流动相b的比例为70:30-80:20，分析时间为1.5-2.5min，柱温为30-40℃，流速为0.2-0.4ml/min，进样量为5-20μl。举例来说，乙酸铵的浓度可以为5、8或10mmol/l，流动相a和流动相b的比例可以为70:30、75:25或80:20，分析时间可以为1.5、1.8、2.0、2.2或2.5min，柱温可以为30、32、35、38或40℃，流速为0.2、0.25、0.3、0.35或0.4ml/min，进样量可以为5、10、15或20μl。详细地，使用上述液相条件来检测血液中霉酚酸含量时，具有分析时间短、批次间保留时间稳定、目标峰出峰效果好、分离效果的重复性好等特点。步骤102：根据各个标准溶液的色谱图，拟合得到霉酚酸的标准曲线方程。步骤103：将一定量的内标工作液添加到一定量的血液样本中，并进行样本前处理以得到待测样本，其中，内标工作液中含有浓度已知的内标物。步骤104：利用高效液相色谱串联质谱仪，在相同检测条件下检测待测样本，得到待测样本的色谱图。步骤105：根据待测样本的色谱图和霉酚酸的标准曲线方程，计算血液样本中霉酚酸的含量。本发明实施例中，基于上述检测条件，分析时间可在2.0min左右，分析时间短，分析效率提高，且可减少溶剂用量。此外，本发明实施例中流动相为乙酸铵水溶液和甲醇，液相流动相较为简单，利于推广应用。本发明实施例中，洗脱方式为等度洗脱，使得检测方法的稳定性更好，从而更加有益于临床样本的检测。此外，在保证检测效果的前提下，流动相的配制简单不繁琐，有利于实际检测的应用。本发明实施例提供的这一检测血液中霉酚酸含量的方法，将内标法与高效液相色谱串联质谱法相结合，从而提高了定量结果的准确性，消除系统误差；结合特定的检测条件进行样本检测，使检测过程简便快速，样品分析时间缩短，更利于在临床治疗中对患者体内的霉酚酸的含量进行监测，从而可为相关药物(如骁悉)的个性化给药、减少或避免毒副反应的发生提供实验基础。在本发明一个实施例中，血液样本包括：经处理至少2ml待检测血液而得到的血清、血浆或含有edta(ethylenediaminetetraaceticacid，乙二胺四乙酸)抗凝剂的全血。举例来说，可以取至少2ml待检测血液，在离心速度为3500rpm下离心10min，取上清液得到血清或血浆。通常情况下，可将血液样本置于-20℃冷冻下保存至分析前备用。得到血液样本后，即可作前处理，以得到相应可直接上样的待测样本。基于上述内容可知，本发明实施例的血液样本可以为全血，从而可以简化待检测血液的前处理操作。此外，本发明实施例同样可以适用于检测血清或血浆，检测应用范围广。待检测血液的用量不高，可低至2ml，采血量较少，使得被检测者的采血体验好。在本发明一个实施例中，优选地，流动相a为含10mmol/l乙酸铵的水溶液，流动相a和流动相b的比例为75:25，分析时间为2.0min，柱温为35℃，流速为0.3ml/min，进样量为20μl。在本发明一个实施例中，所述检测条件中的串联质谱条件包括：采用电喷雾电离源esi，正离子扫描模式，选择反应监测模式，干燥气温度为150-200℃，干燥气流速为10-15l/min，雾化气压力为25-35psi，毛细管电压为3500-4500v(+)。举例来说，干燥气温度可以为150、170、190或200℃，干燥气流速可以为10、12、14或15l/min，雾化气压力可以为25、28、32或35psi，毛细管电压可以为3500、3800、4300或4500v(+)。基于上述内容，在本发明一个实施例中，优选地，干燥气温度为200℃，干燥气流速为13l/min，雾化气压力为30psi，毛细管电压为4000v(+)。在本发明一个实施例中，所述将一定量的内标工作液添加到一定量的血液样本中，并进行样本前处理以得到待测样本，包括：取一定量的内标工作液于离心管中，加入一定量的血液样本并混匀，然后加入一定量的盐酸水溶液并混匀，之后加入一定量的甲基叔丁基醚并混匀得到混合液，混合液静置分层，取上清液并用n2吹干，吹干后加入甲醇水溶液并混匀得到待测样本。详细地，血液样本和内标工作液先混匀，之后加入盐酸水溶液并混匀，再加入盐酸水溶液这一萃取剂并混匀，混合液静置待分层，取分层后的上清液并进行氮吹，吹干后再加入甲醇水溶液这一复溶液并混匀，即可得到待测样本。本发明实施例中，加入萃取剂并混匀后，直接静置分层取上清液即可，而无需离心取上清液，可简化血液样本前处理过程。本发明实施例中，通过在萃取之前添加盐酸水溶液，可提高血液样本前处理的萃取效率，提高回收率，且有益于在酸性条件下构成较好的萃取体系。本发明实施例采用内标法来检测血液样本中霉酚酸的含量，可以使用如上所述的前处理方式，该前处理方法操作简单，能够减少或避免操作带来的误差，从而能够更准确的定量。此外，由于前处理方法较为简单，故利于本发明实施例的推广应用。基于上述内容，在本发明一个实施例中，优选地，所述将一定量的内标工作液添加到一定量的血液样本中，并进行样本前处理以得到待测样本，包括：用移液枪移取5-10μl内标工作液于1.5ml的离心管中，然后加入100-200μl血液样本，在转速为1500-2000rpm下涡旋混匀1-2min后，加入含0.1-0.3％盐酸的水溶液15-25μl，并在转速为1500-2000rpm下涡旋混匀1-3min后，加入800-1200μl甲基叔丁基醚萃取剂，并在转速为1500-2000rpm下涡旋混匀4-7min后，静置0.8-1.5min待分层，得到上清液；取上清液800-900μl放入另一支1.5ml离心管中，在常温下用n2缓慢吹干；向吹干的离心管中加入含60-80％甲醇的水溶液这一复溶液100-200μl，并在转速为1500-2000rpm下涡旋混匀1-3min后，得到待测样品。举例来说，内标工作液的用量可以为5、8或10μl，血液样本的用量可以为100、150或200μl，涡旋混匀时的转速可以为1500、1700、1900或2000rpm，盐酸水溶液中盐酸的量可以为0.1、0.15、0.2、0.25或0.3％，盐酸水溶液的用量可以为15、18、22或25μl，萃取剂的用量可以为800、900、1100或1200μl，静置待分层的时间可以为0.8、0.9、1.2或1.5min，甲醇水溶液中甲醇的量可以为60、65、75或80％，复溶液的用量可以为100、150或200μl。以及，加入血液样本后的涡旋时间可以为1、1.5或2min，加入盐酸水溶液后的涡旋时间可以为1、1.5、2、2.5或3min，加入萃取剂后的涡旋时间可以为4、5、6或7min，加入复溶液后的涡旋时间可以为1、1.5、2、2.5或3min。举例来说，含70％甲醇的水溶液，即甲醇：水的体积比为70:30。通常情况下，标准曲线方程的建立至少需要三个坐标点，以保证所建立方程的准确性，故需要预先配制至少三个标准溶液，从而可以根据各个标准溶液检测所得到的色谱图，拟合出霉酚酸的标准曲线方程。详细地，可以结合检测的人群、待检测血液的用量、血液样本稀释程度、标准工作液稀释程度，以及人体内霉酚酸的大致含量范围等，来设定线性范围，以保证大部分的临床样本检测结果落在可报告范围内。基于上述内容，在本发明一个实施例中，在所述分别检测至少三个标准溶液之前，进一步包括：制备至少三个标准工作液，标准工作液中含有浓度已知的霉酚酸标准品，标准工作液中霉酚酸标准品的浓度在0.5-100μg/ml范围内，不同标准工作液中霉酚酸标准品的浓度不同；利用移液器移取10μl标准工作液、10μl内标工作液置于离心管中，再移取加入含60-80％甲醇的水溶液180μl；将该离心管在转速为1500-2000rpm下涡旋混匀2-4min后，得到标准溶液。基于上述内容，在本发明一个实施例中，优选地，各个标准工作液中霉酚酸标准品的浓度分别为0.5μg/ml、1μg/ml、5μg/ml、10μg/ml、25μg/ml、50μg/ml、100μg/ml。详细地，拟合得到的霉酚酸的标准曲线方程通常可以为y＝k×x+b。其中，x、y这两个变量，分别可以为各个标准溶液的色谱图中，霉酚酸标准品与相应内标物的峰面积比值，以及，各个标准溶液中，霉酚酸标准品与相应内标物的浓度比值。如此，根据待测样本的色谱图中，霉酚酸与其内标物的峰面积比值，以及待测样本中该内标物的浓度，代入标准曲线方程即可计算出待测样本中霉酚酸的浓度。在本发明一个实施例中，内标物为吲哚美辛，且内标工作液中吲哚美辛的浓度为10μg/ml。详细地，吲哚美辛为霉酚酸的类似物，其与霉酚酸结构类似、性质类似。本发明实施例以吲哚美辛为内标物，内标成本较低，且同样可以保证良好的检测效果。综上所述，本发明实施例可以检测血液中霉酚酸的含量，如此，可以利用本发明实施例提供的检测方法，在临床治疗中对患者体内的霉酚酸的含量进行监测，为相关药物的个性化给药、减少毒副反应的发生提供实验基础，从而更加利于指导患者用药。以下将通过实施例对本发明进行详细描述，但本发明并不仅限于下述实施例。实施例1本发明实施例用于获取标准曲线方程。1.1标准储备液的配制精确称取霉酚酸标准品15mg置于5ml容量瓶，用含70％甲醇的水溶液进行溶解，并定容于5ml，得到标准储备液。1.2内标储备液的配制精确称取吲哚美辛标准品5mg于10ml容量瓶，用甲醇溶解，并定容至10ml，得到内标储备液。1.3检测用仪器液相色谱-三重四级杆串联质谱：agilent1260-g6410b。1.4质谱条件采用esi，正离子扫描模式，选择反应监测模式，干燥气温度为200℃，干燥气流速为13l/min，雾化气压力为30psi，毛细管电压为4000v(+)。基于此，质谱条件的其他参数请参考下述表1。表1物质名称母离子子离子保留时间/mindwellfragmentorcecav霉酚酸319.0190.90.6200126157吲哚美辛356.0312.00.720083151.5液相条件1.5.1色谱柱watersxbridgec18，5μm，2.1mm×100mm。1.5.2流动相流动相a：含10mmol/l乙酸铵的水溶液；流动相b：甲醇。1.5.3洗脱方式采用等度洗脱，流动相比例为流动相a：流动相b＝75:25。1.5.4其他分析时间为2.0min；柱温为35℃；进样量为20μl；流速为0.3ml/min。1.6标准工作液的配制取适量标准储备液，用含70％甲醇的水溶液进行稀释，配制成霉酚酸标准品的浓度分别为0.5μg/ml、1μg/ml、5μg/ml、10μg/ml、25μg/ml、50μg/ml、100μg/ml的标准工作液，并在-80℃条件下保存。可见，这七个标准工作液中，霉酚酸标准品的浓度不同且依次递增。1.7内标工作液的配制将内标储备液用甲醇进行稀释，得到含有浓度为10μg/ml吲哚美辛的内标工作液，并在-80℃条件下保存。1.8标准溶液的配制对于每一个标准工作液，用移液器移取10μl标准工作液、10μl内标工作液、180μl含70％甲醇的水溶液分别置于1.5ml离心管中，然后在转速为1500rpm下涡旋混匀2min后，得到混合液，移取该混合液作为待检测的标准溶液。如此，针对七个标准工作液，可以得到七个标准溶液。1.9检测标准溶液，生成标准曲线方程得到各个标准溶液后，即可利用高效液相串联质谱仪对七个标准溶液分别进行检测，对应得到各个标准溶液的色谱图。请参考图3和图4，图3示出了一标准溶液中霉酚酸标准品的色谱图，图4示出了一标准溶液中吲哚美辛的色谱图。从标准溶液的色谱图中，可以得到霉酚酸标准品的色谱峰面积和吲哚美辛的色谱峰面积，然后结合各个标准溶液中霉酚酸标准品和吲哚美辛的已知浓度，即可得到霉酚酸的标准曲线方程。请参考图7，图7示出了得到的霉酚酸线性关系图。根据线性关系图，可以得到霉酚酸的标准曲线方程：y＝3.950312x+0.003758，相关系数r2＝0.99919251，y为霉酚酸与吲哚美辛的峰面积比，x为霉酚酸与吲哚美辛的浓度比。可以看出，相关系数r2＞0.9900，表示线性关系良好。基于该标准曲线方程来计算血液中霉酚酸含量时，准确性高，误差小。得到标准曲线方程后，即可对血液样本作前处理，以得到待测样本，进而在相同检测条件下，对待测样本进行检测，结合得到的标准曲线方程，即可得到血液样本中霉酚酸的含量。实施例2本发明实施例用于检测血液中霉酚酸的含量。2.1获取血液样本血液样本为含有edta抗凝剂的全血，经处理至少2ml待检测血液而得到，置于4℃冷藏下保存至分析前备用。得到血液样本后，即可作前处理，以得到相应可直接上样的待测样本。2.2血液样本前处理用移液枪移取10μl内标工作液于1.5ml的离心管中，然后加入100μl血液样本，在转速为1500rpm下涡旋混匀1min后，加入含0.2％盐酸的水溶液20μl，并在转速为1500rpm下涡旋混匀1min后，加入1000μl甲基叔丁基醚，并在转速为2000rpm下涡旋混匀5min后，静置1分钟待分层，得到上清液；取上清液900μl放入另一支1.5ml离心管中，在常温下用n2缓慢吹干；向吹干的离心管中加入200μl含70％甲醇的水溶液，并在转速为2000rpm下涡旋混匀2min后，即为待测样本。2.3待测样本检测在实施例1的检测条件下，使用同一高效液相串联质谱仪对待测样本进行检测，得到待测样本的色谱图。请参考图5和图6，图5示出了待测样本中霉酚酸的色谱图，图6示出了待测样本中吲哚美辛的色谱图。请参考图3至图6，可知待测样本中霉酚酸的保留时间与标准溶液中霉酚酸标准品的保留时间相一致，待测样本中吲哚美辛的保留时间与标准溶液中吲哚美辛的保留时间相一致，且本发明实施例提供的检测方法具有目标化合物的识别更为准确，分析时间短、干扰小，内标定量适宜、特异性强、准确度、灵敏度高等优点。2.4待测样本中霉酚酸含量的计算根据待测样本的色谱图中，霉酚酸和吲哚美辛的色谱峰面积，以及待测样本中吲哚美辛的已知浓度，对应代入上述标准曲线方程，即可计算出待测样本中霉酚酸的含量。上述步骤1.6中配制的标准工作液中霉酚酸标准品的浓度范围为0.5-100μg/ml，结合上述步骤1.8中所述的标准溶液配制过程和上述步骤2.2中所述的血液样本前处理过程，可知标曲稀释和样本处理存在10倍的换算关系，故可认为霉酚酸的线性范围(临床可报告范围)为50-10000ng/ml，霉酚酸在50-10000ng/ml范围内线性良好。实施例3本发明实施例用于测定定量限和检测限。选择低浓度的质控样本，用生理盐水做不同程度的稀释，从而制备得到不同浓度的血液样本稀释液，并按实施例2中的血液样本前处理方式及测定条件，对这些血液样本稀释液进行测定。经检测发现，霉酚酸的检测限和定量限如下所示：(1)检测限(lod)：0.75ng/ml(s/n＝3)。(2)定量限(loq)：2.5ng/ml(s/n＝10.6)。本实施例中，霉酚酸的检测限可低至0.75ng/ml，定量限可低至2.5ng/ml，灵敏度高，可以提高低浓度样本的平行性，增强准确度。此外，霉酚酸临床参考值通常为1.0-3.5μg/ml，故本发明实施例提供的检测方法完全可满足临床需求。由于灵敏度高，故本发明实施例对待检测血液的样本量的要求会更加的宽泛，从而提高样本检测的整体准确度。此外，本发明实施例对霉酚酸含量很低的生物样本也能准确定量，保证了检测方法的高度准确性及广泛适用性。实施例4本发明实施例用于测定回收率和精密度。分别取含霉酚酸标准品的标准工作液，配制成高、中、低3种浓度，进行加样回收率实验和精密度实验，按实施例2中的检测方法进行测定，重复分析测定3批次，霉酚酸的回收率和精密度如表2所示。表2加标量100ng/ml1000ng/ml5000ng/ml平均回收率96.91％99.02％95.21％精密度(rsd)1.70％4.04％3.23％可以看出，霉酚酸在低、中、高的3个添加水平范围内，平均回收率为95.21-99.02％，重现性良好，加样回收率良好，相对标准偏差为1.70-4.04％，检测结果的准确度较高，可消除系统误差。基于上述内容可知，上述实施例2所述检测方法的检测限、定量限、回收率和精密度等各项技术指标均符合要求，重现性良好，加样回收率高，提高了检测结果的准确度。综上所述，本发明实施例提供的这一检测血液中霉酚酸血药浓度含量的方法，将内标法与高效液相色谱质谱联用法相结合，使干扰因素大大减少，且定量准确、重现性好、特异性强、灵敏度高、检测结果更为准确，且成本低，分析时间短，适用于临床大批量血液样本的检测。最后需要说明的是：以上所述仅为本发明的较佳实施例，仅用于说明本发明的技术方案，并非用于限定本发明的保护范围。凡在本发明的精神和原则之内所做的任何修改、等同替换、改进等，均包含在本发明的保护范围内。当前第1页12