1.检测血液中霉酚酸含量的方法,其特征在于,包括:
利用高效液相色谱串联质谱仪,在一定检测条件下,分别检测至少三个标准溶液,得到各个标准溶液的色谱图,其中,任一标准溶液中均含有浓度已知的霉酚酸标准品及内标物,不同标准溶液中霉酚酸标准品的浓度不同;
根据各个标准溶液的色谱图,拟合得到霉酚酸的标准曲线方程;
将一定量的内标工作液添加到一定量的血液样本中,并进行样本前处理以得到待测样本,其中,内标工作液中含有浓度已知的内标物;
利用高效液相色谱串联质谱仪,在相同检测条件下检测待测样本,得到待测样本的色谱图;
根据待测样本的色谱图和霉酚酸的标准曲线方程,计算血液样本中霉酚酸的含量;
其中,所述检测条件中的液相条件包括:watersxbridgec18色谱柱,色谱柱的长度为100mm、内径为2.1mm、填料粒径为5μm,流动相a为含5-10mmol/l乙酸铵的水溶液,流动相b为甲醇,流动相a和流动相b的比例为70:30-80:20,分析时间为1.5-2.5min,柱温为30-40℃,流速为0.2-0.4ml/min,进样量为5-20μl。
2.根据权利要求1所述的方法,其特征在于,
流动相a为含10mmol/l乙酸铵的水溶液,流动相a和流动相b的比例为75:25,分析时间为2.0min,柱温为35℃,流速为0.3ml/min,进样量为20μl。
3.根据权利要求1所述的方法,其特征在于,
所述检测条件中的串联质谱条件包括:采用电喷雾电离源esi,正离子扫描模式,选择反应监测模式,干燥气温度为150-200℃,干燥气流速为10-15l/min,雾化气压力为25-35psi,毛细管电压为3500-4500v(+)。
4.根据权利要求3所述的方法,其特征在于,
干燥气温度为200℃,干燥气流速为13l/min,雾化气压力为30psi,毛细管电压为4000v(+)。
5.根据权利要求1所述的方法,其特征在于,
所述将一定量的内标工作液添加到一定量的血液样本中,并进行样本前处理以得到待测样本,包括:
取一定量的内标工作液于离心管中,加入一定量的血液样本并混匀,然后加入一定量的盐酸水溶液并混匀,之后加入一定量的甲基叔丁基醚并混匀得到混合液,混合液静置分层,取上清液并用n2吹干,吹干后加入甲醇水溶液并混匀得到待测样本。
6.根据权利要求5所述的方法,其特征在于,
所述将一定量的内标工作液添加到一定量的血液样本中,并进行样本前处理以得到待测样本,包括:
用移液枪移取5-10μl内标工作液于1.5ml的离心管中,然后加入100-200μl血液样本,在转速为1500-2000rpm下涡旋混匀1-2min后,加入含0.1-0.3%盐酸的水溶液15-25μl,并在转速为1500-2000rpm下涡旋混匀1-3min后,加入800-1200μl甲基叔丁基醚萃取剂,并在转速为1500-2000rpm下涡旋混匀4-7min后,静置0.8-1.5min待分层,得到上清液;
取上清液800-900μl放入另一支1.5ml离心管中,在常温下用n2缓慢吹干;
向吹干的离心管中加入含60-80%甲醇的水溶液100-200μl,并在转速为1500-2000rpm下涡旋混匀1-3min后,得到待测样品。
7.根据权利要求1所述的方法,其特征在于,
在所述分别检测至少三个标准溶液之前,进一步包括:
制备至少三个标准工作液,标准工作液中含有浓度已知的霉酚酸标准品,标准工作液中霉酚酸标准品的浓度在0.5-100μg/ml范围内,不同标准工作液中霉酚酸标准品的浓度不同;
利用移液器移取10μl标准工作液、10μl内标工作液置于离心管中,再移取加入含60-80%甲醇的水溶液180μl;
将该离心管在转速为1500-2000rpm下涡旋混匀2-4min后,得到标准溶液。
8.根据权利要求7所述的方法,其特征在于,
各个标准工作液中霉酚酸标准品的浓度分别为0.5μg/ml、1μg/ml、5μg/ml、10μg/ml、25μg/ml、50μg/ml、100μg/ml。
9.根据权利要求1所述的方法,其特征在于,
内标物为吲哚美辛,且内标工作液中吲哚美辛的浓度为10μg/ml。
10.根据权利要求1至9中任一所述的方法,其特征在于,
血液样本包括:经处理至少2ml待检测血液而得到的血清、血浆或含有edta抗凝剂的全血。