一种采用气相色谱串联三重四级杆质谱检测食品中五氯酚含量的方法与流程

本发明属于食品检测技术领域，具体涉及到一种采用气相色谱串联三重四级杆质谱检测食品中五氯酚含量的方法。

背景技术：

五氯酚(pentachlorophenol)在工农业生产中广泛地应用于木材防腐、杀菌、除草及防治血吸虫病等，其钠盐是血吸虫病防治中杀灭钉螺的主要药物。由于pcp化学性质稳定，不易降解而残留在环境中，通过食物链进入人体，可长时间蓄积于肝、肾及脂肪中，不仅对人体有直接危害，而且可能在遗传学上具有潜在危险性。美国epa早在1976年就将其列为优先污染物。80年代末期，中国环境监测总站根据我国有机化合物的污染特征，也将pcp列入中国环境优先污染物“黑名单”中。

现有的食品及农产品的五氯酚含量检测的方法主要有气相色谱串联质谱法和液相色谱串联质谱法，而气相色谱串联质谱法法对于基质复杂的样品抗干扰能力低，存在定性不准确的风险；且液相色谱串联质谱法成本较高；同时对样品的预处理过程则多采用固相萃取法和凝胶色谱净化法，该实验步骤比较繁琐。

技术实现要素：

本发明的目的在于至少解决现有技术中存在的技术问题之一，提供一种采用气相色谱串联三重四级杆质谱检测食品中五氯酚含量的方法。

为实现上述目的，本发明采用的技术方案如下：一种采用气相色谱串联三重四级杆质谱检测食品中五氯酚含量的方法，包括以下步骤：

s1、配制五氯酚基质标准液：用甲醇溶液将五氯酚标准储备液100μg/ml稀释成100ng/ml的工作液；称取等量的空白样品6份，分别移取工作液10μl、20μl、50μl、100μl、200μl、1000μl至空白样品中，并与样品一同提取净化；

s2、提取样品：称取样品溶于水中，再加入乙腈，均质提取1-3min；再超声、离心提取，获得提取液；再往提取液中加入吸水剂和盐析剂，使乙腈与水分层；

s3、净化样品：往步骤s2中乙腈层加入无水硫酸镁、c18，涡旋、离心，获取上清液，并加热上清液、氮吹至干；

s4、衍生化样品：将步骤s1中的基质标准液和步骤s3中净化的样品分别加入衍生剂和衍生反应溶剂，摇匀，室温静置0.8-1.2h；接着在室温下氮吹至干，再加入正己烷溶液复溶，过滤，获得衍生化样品；

s5、gc-ms/ms法分析：采用气相色谱串联三重四级杆质谱对步骤s4中得到的衍生化样品溶液进行分析，检测其中五氯酚的含量；

其中gc-ms/ms法的具体参数为：载气流速0.8-1.2ml/min；进样口温度：250-310℃；离子源温度：120-180℃；四级杆温度：200-260℃；电子能量：70ev；扫描类型：mrm；升温程序：初始值50-70℃，保持2-4min，第一梯度升温速率为25-35℃/min，最终保持温度240-260℃，保持0min，第二梯度升温速率为15-25℃/min，最终保持温度290-310℃，保持2-5min；定性定量离子信息：定量离子461.8:169.0，碰撞电压20v；定性离子264.7:236.8，碰撞电压20v。

进一步的，还包括配制不含五氯酚的空白基质标准系列液，与样品一同提取净化。

进一步的，步骤s2中超声时间为10-20min，离心转速为6000r/min，离心时间为3-8min，

进一步的，步骤s2中的吸水剂为无水硫酸钠；盐析剂为氯化钠。

进一步的，无水硫酸钠、氯化钠的质量比为4-6:1。

进一步的，步骤s3中无水硫酸镁、c18的质量比为3-6:1。

进一步的，步骤s3中涡旋时间为1-3min；离心转速为6000r/min，离心时间为3-8min；加热温度为35-45℃。

进一步的，步骤s4中衍生剂为七氟丁酸酐，衍生反应溶剂为丙酮。

进一步的，七氟丁酸酐、丙酮的质量比为1:1。

进一步的，步骤s4中过滤采用0.22μm有机滤膜。

本发明的有益效果：由上述对本发明的描述可知，与现有技术相比，本发明的一种采用气相色谱串联三重四级杆质谱检测食品中五氯酚含量的方法，通过采用quechers分散固相萃取技术对样品进行预处理，提取和净化样品中的目标物质，简化了前处理流程，节约成本；对目标物进行衍生化反应，改善目标物的响应；采用气相色谱串联三重四级杆质谱增强目标物质的响应强度，对特定的定性定量离子进行mrm扫描，减少其他组分的干扰，提高定性定量的准确度。

附图说明

图1为本发明优选实施例中采用气相色谱串联三重四级杆质谱检测食品中五氯酚含量的方法的流程图；

图2为五氯酚mrm扫描tic图；

图3为五氯酚定性定量离子质谱图。

具体实施方式

下面将结合本发明实施例中的附图，对本发明中的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例仅是本发明的一部分实施例，而不是全部的实施例。

参照图1所示，本发明的优选实施例，一种采用气相色谱串联三重四级杆质谱检测食品中五氯酚含量的方法，包括以下步骤：

s1、配制五氯酚基质标准液

用甲醇溶液将五氯酚标准储备液100μg/ml稀释成100ng/ml的工作液；称取等量的空白样品6份，每份质量为1.000g；分别移取工作液10μl、20μl、50μl、100μl、200μl、1000μl至空白样品中，并与样品一同提取净化；

同时配制不含五氯酚的空白基质标准系列液，称取等量的空白样品6份，每份质量为1.000g，不加入工作液，并与样品一同提取净化

s2、提取样品

称取5.000g样品溶于5ml水中，并加入5ml乙腈，均质提取1-3min，优选地为2min，本实施例中先加入水对样品进行充分浸润，再加入乙腈均质提取，防止样品中的蛋白质接触乙腈后立刻变性使目标物难以提取；再超声15min，在6000r/min离心5min，提取乙腈层，获得提取液；将残渣重复上述提取步骤2次，合并提取液；往提取液中加入5g无水硫酸钠和1g氯化钠，其中采用无水硫酸钠吸附提取液中的水分，无水硫酸钠与水反应不放热，提高目标物的提取效率；采用氯化钠作为盐析试剂；摇匀，获取上层乙腈提取液；

s3、净化样品

往步骤s2盐析后提取液中加入900mg除去提取液中剩余的少量水分的无水硫酸镁、200mg除去样品中非极性分子杂质的c18，涡旋混均2min，在6000r/min离心5min，获取上清液；取15ml上清液在40℃下氮吹至干；

s4、衍生化样品

将步骤s1中的基质标准液和步骤s3中净化的样品分别加入50μl作为衍生试剂的七氟丁酸酐和50μl作为衍生反应溶剂的丙酮，摇匀，室温静置1h；接着在室温下氮吹至干，再加入1ml正己烷复溶，过0.22μm有机滤膜，获得待上机检测的衍生化样品；

s5、gc-ms/ms法分析

采用气相色谱串联三重四级杆质谱mrm多反应监测模式对步骤s4中得到的五氯酚的七氟丁酸酐衍生物衍生化样品溶液进行分析，检测其中五氯酚的含量，其中如图2所示五氯酚mrm扫描tic图；如图3所示五氯酚定性定量离子质谱图，由图可知通过采用气相色谱串联三重四级杆质谱可增强目标物质的响应强度，对特定的定性定量离子进行mrm扫描，可减少其他组分的干扰，提高定性定量的准确度。

本实施例采用的设备为agilent7000气质联用仪；

色谱柱为：hp-5ms30m×250μm×0.25μm；

该gc-ms/ms法的具体参数为：

载气流速1.0ml/min；

进样口温度：280℃；

离子源温度：150℃；

四级杆温度：230℃；

电子能量：70ev；

扫描类型：mrm；

升温程序：初始值60℃，保持3min；

第一梯度升温速率为30℃/min，最终保持温度250℃，保持0min；

第二梯度升温速率为20℃/min，最终保持温度300℃，保持3min；

定性定量离子信息：定量离子461.8:169.0，碰撞电压20v；

定性离子264.7:236.8，碰撞电压20v。

本发明通过采用quechers分散固相萃取技术进行样品预处理，提取和净化样品中的目标物质，简化了前处理流程，节约成本。通过对目标物进行衍生化反应，改善目标物的响应。通过采用气相色谱串联三重四级杆质谱增强目标物质的响应强度，对特定的定性定量离子进行mrm扫描，减少其他组分的干扰，提高定性定量的准确度。

在不出现冲突的前提下，本领域技术人员可以将上述附加技术特征自由组合以及叠加使用。

可以理解，本发明是通过一些实施例进行描述的，本领域技术人员知悉的，在不脱离本发明的精神和范围的情况下，可以对这些特征和实施例进行各种改变或等效替换。另外，在本发明的教导下，可以对这些特征和实施例进行修改以适应具体的情况及材料而不会脱离本发明的精神和范围。因此，本发明不受此处所公开的具体实施例的限制，所有落入本申请的权利要求范围内的实施例都属于本发明所保护的范围内。