一种牙鲆弹状病毒病感染态与免疫态的快速诊断试纸的制作方法

文档序号:23347266发布日期:2020-12-18 16:49阅读:来源:国知局

技术特征:

1.一种牙鲆弹状病毒病感染态与免疫态的快速诊断试纸,包括载体板、样品垫、金标垫、硝酸纤维素膜和吸水垫,所述样品垫和吸水垫位于所述载体板的两端,所述硝酸纤维素膜位于所述载体板的中部;所述样品垫与硝酸纤维素膜交界处设有载有金标鼠抗牙鲆免疫球蛋白单克隆抗体的金标垫,所述金标垫一端边缘重叠在样品垫之下,另一端边缘重叠在硝酸纤维素膜之上,所述硝酸纤维素膜上设有依次排列的两条检测线t2、t1和一条质控线c,所述质控线c靠近吸水垫;其特征在于,所述检测线t1包被重组纯化的牙鲆弹状病毒非结构蛋白,所述检测线t2包被重组纯化的牙鲆弹状病毒基质蛋白,所述质控线c包被有羊抗小鼠igg。

2.根据权利要求1所述的快速诊断试纸,其特征在于所述重组纯化的牙鲆弹状病毒非结构蛋白,能特异性结合感染牙鲆弹状病毒的牙鲆血清抗体,不能结合免疫牙鲆弹状病毒的牙鲆血清抗体。

3.根据权利要求1所述的快速诊断试纸,其特征在于所述重组纯化的牙鲆弹状病毒基质蛋白为牙鲆弹状病毒结构蛋白,能特异性结合感染牙鲆弹状病毒得牙鲆血清抗体和免疫牙鲆弹状病毒的牙鲆血清抗体。

4.一种如权利要求1所述牙鲆弹状病毒病感染态与免疫态的快速诊断试纸的制备方法,其特征在于,包括如下步骤:

(1)鼠抗牙鲆免疫球蛋白单克隆抗体的腹水生产与纯化:

复苏并培养分泌抗牙鲆免疫球蛋白单抗的杂交瘤细胞株jf-igm-h,腹腔注射balb/c小鼠,采集腹水,辛酸-硫酸铵法提纯获得单抗;

(2)牙鲆弹状病毒非结构蛋白和牙鲆弹状病毒基质蛋白的制备与纯化:

通过聚丙烯酰胺凝胶电泳、间接免疫荧光,选定牙鲆弹状病毒非结构蛋白和牙鲆弹状病毒基质蛋白,通过原核表达技术和his标签蛋白纯化技术制备抗原以及牙鲆弹状病毒非结构蛋白多克隆抗体和牙鲆弹状病毒基质蛋白单克隆抗体;

(3)金标垫的制备

采用柠檬酸三钠还原法制成颗粒大小为20-30nm的胶体金,再以碳酸钾溶液调节胶体金ph值为8.2;将抗牙鲆免疫球蛋白单抗加入胶体金中,再加入牛血清白蛋白,离心纯化后用金标保存液悬起,即为金标单抗液体;将制成的金标单抗液体喷涂到玻璃纤维上,冷冻干燥,即为载有金标单抗的金标垫;

(4)硝酸纤维素膜的制备

分别将一定浓度的纯化牙鲆弹状病毒非结构蛋白和牙鲆弹状病毒结构蛋白基质蛋白按照一定间距和顺序喷涂于硝酸纤维素膜作为检测线t1、t2,将羊抗小鼠igg喷涂于硝酸纤维素膜作为质控线,晾干,于封闭液中浸泡,pbst漂洗,干燥;

(5)牙鲆弹状病毒感染态与免疫态快速诊断试纸的制作

在载体板上依次贴上硝酸纤维素膜、吸水垫、金标垫和样品垫,放入切条机槽内切割成3.7mm宽的试纸,将切好的试纸放入装有干燥剂的铝箔袋内封口,装入包装卡壳,密封于铝箔袋中保藏,即为本发明试纸。


技术总结
本发明公开了一种牙鲆弹状病毒病感染态与免疫态的快速诊断试纸,包括载体板、样品垫、金标垫、硝酸纤维素膜和吸水垫,所述样品垫和吸水垫位于所述载体板的两端,所述硝酸纤维素膜位于所述载体板的中部;所述样品垫与硝酸纤维素膜交界处设有载有金标鼠抗牙鲆免疫球蛋白单克隆抗体的金标垫,所述金标垫一端边缘重叠在样品垫之下,另一端边缘重叠在硝酸纤维素膜之上;所述硝酸纤维素膜上设有依次排列的两条检测线T2、T1和一条质控线C,所述质控线C靠近吸水垫;所述检测线T1包被重组纯化的NV蛋白,所述检测线T2包被重组纯化的M蛋白,所述质控线C包被羊抗小鼠IgG。本发明具有快速、简便、成本低、特异性强、具可重复性的优点,适用于牙鲆养殖过程中牙鲆弹状病毒病感染态与免疫态的检测与鉴别。

技术研发人员:唐小千;战文斌;龚娇娇;绳秀珍;邢婧;迟恒
受保护的技术使用者:中国海洋大学
技术研发日:2020.09.16
技术公布日:2020.12.18
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