一种阿托伐他汀钙中间体中共存杂质同时测定方法与流程

本发明涉及药物分析领域，更具体地，涉及一种同时测定m4中共存杂质含量的方法。
背景技术：
：阿托伐他汀钙(atv—ca)是由美国warner-lambert公司和pfizer公司于1997年共同开发上市的血脂调节药，可临床应用于治疗高胆固醇血症、抗动脉粥样硬化、降低血压、治疗糖尿病肾病，是市场上销售最好的3-羟基-3-甲基戊二酰辅酶a(hmg.coa)还原酯抑制剂。阿托伐他汀钙的合成路线有多种，其中中间体m4被广泛用于阿托伐他汀钙的合成，其分子式为c26h24fno3，化学名为(±)4-氟-α-[2-甲基-1-氧代丙基]-γ-氧代-n,β-二苯基苯丁酰胺，化学结构式如下：中间体m4的质量控制是阿托伐他汀钙有关物质和含量控制的前提。目前关于阿托伐他汀钙的质量控制的方法偏多，例如张晓峰等人(张晓峰,侯晓清,邓凤霞,等.hplc法测定阿托伐他汀钙有关物质[j].药物分析杂志,2014,034(008):1504-1508.)公开了hplc法测定阿托伐他汀钙有关物质的检测，对阿托伐他汀钙中可能存在的去氟阿托伐他汀(杂质a)；阿托伐他汀对映体(杂质b)；二氟阿托伐他汀(杂质c)；阿托伐他汀内酯(杂质d)；阿托伐他汀钙缩合物(杂质e)均进行了检测分析。然而，目前还没有文献报道关于阿托伐他汀钙中间体尤其是中间体m4的质量控制方法。因此，亟需提供一种阿托伐他汀钙中间体m4的质量控制方法，对于提高阿托伐他汀钙的质量，进而保证广大用药者的安全性具有重要意义。技术实现要素：本发明的目的是克服上述现有技术中的缺陷和不足，提供一种同时测定m4中共存杂质含量的方法。本发明上述目的通过以下技术方案实现：一种阿托伐他汀钙中间体中共存杂质同时测定方法，所述中间体为m4，所述共存杂质包括m1、m2、m3、m4双氟、m4去氟；所述方法采用高效液相色谱仪对样品进行检测，其中色谱检测条件包括：以体积比为29：12：59的乙腈-四氢呋喃-0.05mol/l乙酸铵作为流动相进行等度洗脱。中间体m4中主要有m1、m2、m3、m4双氟、m4去氟这五种难分离的杂质，其结构式分别如下表：多种杂质的存在会严重影响合成的阿托伐他汀钙的品质，从中间体m4中有效分离出以上五种难去除的杂质，对于提高中间体m4的质量，保证阿托伐他汀钙至关重要。然而从上表可知，m4双氟、m4去氟与中间体m4的结构极其相似，导致分离难度非常大。本申请的发明人通过大量的实验探索发现，建立hplc分离法，改变流动相及洗脱方式，能够将以上5种杂质与中间体m4有效分离，各已知杂质与未知杂质之间的分离度远大于1.0，且该方法具有强专属性，能有效地应用于中间体m4的质量控制。优选地，所述样品的配制方法如下：s1.配样：配制供试品溶液：取m4样品适量，加甲醇稀释制成1ml中约含1mg的溶液，摇匀，得到供试品溶液；配制对照溶液：精密量取供试品溶液1ml置50ml量瓶中，加甲醇稀释至刻度，摇匀后精密移取1ml置10ml量瓶中，加甲醇稀释至刻度，摇匀，得到对照溶液。优选地，所述色谱检测条件具体为：填充柱为辛烷基键合硅胶；色谱柱规格为250mm×4.6mm，粒径5μm；流速为1.0～1.7ml/min；柱温为35℃～40℃，溶剂为甲醇；进样量为20μl；检测波长为244nm。更优选地，所述的流速为1.5ml/min。更优选地，所述的柱温为35℃。与现有技术相比，本发明具有如下有益效果：本发明的阿托伐他汀钙中间体中共存杂质同时测定方法，能够将中间体m4与各杂质同时进行分离，从而有效控制中间体m4的质量。经化学药品分析方法验证，本方法简便、准确度高、线性、重复性良好，完全适用于阿托伐他汀钙中间体m4的质量控制，为保证阿托伐他汀钙的用药安全提供了理论支持。附图说明图1是实施例1中专属性混合溶液图谱。具体实施方式为了更清楚、完整的描述本发明的技术方案，以下通过具体实施例进一步详细说明本发明，应当理解，此处所描述的具体实施例仅用于解释本发明，并不用于限定本发明，可以在本发明权利限定的范围内进行各种改变。本发明所使用的仪器和原料均市售获得，具体信息如下：waterse2695-2998高效液相色谱仪，empower3控制系统；msa3.6p-oce-dm电子天平(赛多利斯科学仪器有限公司)；pb-10酸度计(赛多利斯科学仪器有限公司)；中间体m4对照品(批号为3-lxm-171-1)，由trc提供；中间体m4(批号为2018029)由天地恒一制药股份有限公司提供；已知杂质m1对照品来源为trc-p335325；m2对照品来源为trc-b279785；m3对照品来源为毕得医药；m4去氟杂质对照品来源于ostresearchchemicals-u40-10055；m4双氟杂质对照品来源于ostresearchchemicals-u40-10056；乙腈来源于sigma；四氢呋喃来源于tedia；乙酸铵来源于广东光华；纯化水来源于杭州娃哈哈集团有限公司。实施例1一种阿托伐他汀钙中间体中共存杂质同时测定方法，其中中间体为m4，共存杂质包括m1、m2、m3、m4双氟、m4去氟；检测方法具体如下：s1.配样：配制供试品溶液：取m4样品适量，加甲醇适量，振摇使溶解，用甲醇稀释制成1ml中约含1mg的溶液，摇匀，得到供试品溶液；配制对照溶液：精密量取供试品溶液1ml置50ml量瓶中，加甲醇稀释至刻度，摇匀后精密移取1ml置10ml量瓶中，加甲醇稀释至刻度，摇匀，得到对照溶液；s2.检测：采用高效液相色谱仪对s1中的溶液样品进行检测，其中色谱检测包括以下条件：检测结果及分析：取中间体m4样品两批，按上述溶液制备方法配置及检测，记录至主峰保留时间的2倍，按自身对照法计算各有关物质的含量，结果见表1。表1批号20180292019032m1n.an.am2n.an.am3n.an.am4去氟0.02％m4双氟n.a其他杂质0.03％0.03％结果表明，主成分m4及各有关物质之间分离效果良好。(1)方法专属性试验分别配置溶剂、各杂质定位溶液及中间体m4加杂质的专属性混合溶液(1mg/mlm4+0.1％m1+0.1％m2+0.1％m3+0.1％m4去氟+0.1％m4双氟)；分别精密量取上述溶液各20μl，依次注入液相色谱仪，记录色谱图，结果如附图1所示。实验结果表明：①溶剂不干扰中间体m4有关物质检测；②专属性混合溶液中各有关物质与定位溶液保留时间一致；③专属性混合溶液中各有关物质及主成分之间分离度良好。(2)线性与范围取中间体m4及其5种杂质适量，加溶剂溶解并稀释成50μg/ml的混合溶液作为线性贮备液(相当于对照浓度的5000％)；依次稀释成相当于对照浓度的30％、50％、80％、100％、150％、200％溶液，分别进样20μl。以质量浓度c(μg/ml)为横坐标，各组分峰面积a为纵坐标，进行线性回归，各组分回归方程见表2。表2组分名称浓度范围(μg/ml)线性方程相关系数响应因子m10.3302～2.2016a＝46365c+1413.40.99903％m20.3124～2.0824a＝44933c+2478.50.99836％m30.2996～1.9976a＝21691c+1923.30.99647％m4去氟0.3080～2.0536a＝33945c+2390.00.99666％m40.3102～2.0680a＝41385c+3667.60.99937％m4双氟0.3127～2.0848a＝39110c+1403.40.99764％各组分的相关线相关系数均大于0.99，且响应因子小于10％，本发明检测方法的线性关系良好。(3)精密度试验取线性与范围试验中的100％溶液，按“2.1项”测定方法，精密量取20μl，注入液相色谱仪，连续进样6针。以峰面积计算，6个组分的rsd分别为1.2％、1.9％、1.1％、1.5％、0.8％、1.1％，均小于3％。说明本发明检测方法的精密度良好。(4)检测限与定量限以信噪比s/n≈3为检测限(lod)，信噪比比s/n≈10为定量限(loq)，中间体m4及其5种杂质的loq和lod见表3。表3组分名称lod/ngloq/ngm12.20136.6040m22.08276.2480m31.99735.9920m4去氟2.05336.1600m42.06806.2040m4双氟2.08476.2540各组分的lod和loq均小于10％。(5)准确度取中间体m4样品10份每份10mg，精密加入各杂质混合溶液(50％、100％、150％各三份，不加样1份)，分别指10ml量瓶中，加溶剂溶解并稀释至刻度，作为回收率供试品溶液，另制备100％杂质混合对照溶液2份，按外标法进行回收率测定，结果见表4。表4组分名称平均回收率rsdm1102.5％4％m2101.7％6％m396.7％5％m4去氟94.2％从表3中可以看出，各杂质的平均回收率均在90％～110％之间，说明本发明的方法准确度良好。对比例1一种阿托伐他汀钙中间体中共存杂质同时测定方法，其中中间体为m4，共存杂质包括m1、m2、m3、m4双氟、m4去氟；其中检测方法与实施例1基本相同，其区别在于，色谱检测条件不同，具体如表5。表5其中梯度洗脱程序如表6。表6检测结果：无法检出m4双氟、m4去氟的出峰。m4与各杂质，尤其是m4双氟、m4去氟不能有效分离。以上实施例使用具体实施方式及试验，对本发明作了详尽的描述，但在本发明基础上，可以对之作一些不偏离本发明主旨的修改或改进，这对本领域技术人员而言是显而易见的。因此，这些不偏离本发明主旨基础上所做的修改或改进，均属于本发明要求保护的范围。当前第1页12