1.一种鉴别蛋白质药物产品中的游离巯基的方法,其包括:
用第一标记物标记包含蛋白质药物产品的样品,所述第一标记物包含硫氢基反应性碘代乙酰基基团、ms中性间隔臂和具有独特报告子离子质量的第一ms/ms报告子;
移除过量的第一标记物;
使所述样品变性和还原;
用第二标记物标记所述样品,所述第二标记物包含硫氢基反应性碘代乙酰基基团、ms中性间隔臂和具有独特报告子离子质量的第二ms/ms报告子;
将所述样品用酶消化;
使用uplc-ms2系统分析所述样品,所述系统包括表面带电杂化颗粒柱和甲酸缓冲液流动相;以及
对所述第一ms/ms报告子和所述第二ms/ms报告子进行定量,其中所述第一ms/ms报告子的量与所述蛋白质药物产品中的游离巯基的量相关,而所述第二ms/ms报告子的量与所述蛋白质药物产品中的结合巯基的量相关。
2.根据权利要求1所述的方法,其中所述第一ms/ms报告子的质量为128,并且所述第二ms/ms报告子的质量为131。
3.根据权利要求1所述的方法,其中所述第一标记物和所述第二标记物选自
4.根据权利要求1-3中任一项所述的方法,其中所述方法提供对igg分子中所有32个半胱氨酸残基的完全覆盖。
5.根据权利要求1-3中任一项所述的方法,其中所述方法覆盖igg分子中的重链和轻链上的16个半胱氨酸残基。
6.根据权利要求1-3中任一项所述的方法,其中所述方法覆盖igg分子的每条轻链上的5个半胱氨酸残基。
7.根据权利要求1-3中任一项所述的方法,其中所述方法覆盖igg分子的每条重链上的11个半胱氨酸残基。
8.根据权利要求1-3中任一项所述的方法,其中设定阈值为5%-6%的游离巯基,并且其中低于所述阈值的结果不显示出二硫键断裂的可能性。
9.一种鉴别蛋白质药物产品中的二硫键异质性的方法,其包括以下步骤:
用第一标记物标记包含蛋白质药物产品的样品,所述第一标记物包含硫氢基反应性碘代乙酰基基团、ms中性间隔臂和具有独特报告子离子质量的第一ms/ms报告子;
移除过量的第一标记物;
使所述样品变性和还原;
用第二标记物标记所述样品,所述第二标记物包含硫氢基反应性碘代乙酰基基团、ms中性间隔臂和具有独特报告子离子质量的第二ms/ms报告子;
将所述样品用酶消化;
使用uplc-ms2系统分析所述样品,所述系统包括表面带电杂化颗粒柱和甲酸缓冲液流动相;以及
对所述第一ms/ms报告子和所述第二ms/ms报告子进行定量,其中所述第一ms/ms报告子的量与所述蛋白质药物产品中的游离巯基的量相关,而所述第二ms/ms报告子的量与所述蛋白质药物产品中的结合巯基的量相关,其中检测到的游离巯基表明所述蛋白质药物产品具有二硫键异质性。
10.根据权利要求9所述的方法,其中所述第一标记物和所述第二标记物选自
11.根据权利要求9或10中任一项所述的方法,其中所述方法提供对igg分子中所有32个半胱氨酸残基的完全覆盖。
12.根据权利要求9-11中任一项所述的方法,其中所述方法覆盖igg分子中的重链和轻链上的16个半胱氨酸残基。
13.根据权利要求9-11中任一项所述的方法,其中所述方法覆盖igg分子的每条轻链上的5个半胱氨酸残基。
14.根据权利要求9-11中任一项所述的方法,其中所述方法覆盖igg分子的每条重链上的11个半胱氨酸残基。
15.一种选择蛋白质药物产品的方法,其包括以下步骤:
用第一标记物标记包含蛋白质药物产品的样品,所述第一标记物包含硫氢基反应性碘代乙酰基基团、ms中性间隔臂和具有独特报告子离子质量的第一ms/ms报告子;
移除过量的第一标记物;
使所述样品变性和还原;
用第二标记物标记所述样品,所述第二标记物包含硫氢基反应性碘代乙酰基基团、ms中性间隔臂和具有独特报告子离子质量的第二ms/ms报告子;
将所述样品用酶消化;
使用uplc-ms2系统分析所述样品,所述系统包括表面带电杂化颗粒柱和甲酸缓冲液流动相;
对所述第一ms/ms报告子和所述第二ms/ms报告子进行定量,其中所述第一ms/ms报告子的量与所述蛋白质药物产品中的游离巯基的量相关,而所述第二ms/ms报告子的量与所述蛋白质药物产品中的结合巯基的量相关;以及
如果所述蛋白质产品具有极少游离巯基或不具有游离巯基,则选择所述蛋白质产品。
16.根据权利要求15所述的方法,其中所述选择的蛋白质药物产物在igg分子中含有少于5个游离巯基、少于4个游离巯基、少于3个游离巯基或少于2个游离巯基。
17.根据权利要求16所述的方法,其中所述游离巯基是在igg分子的轻链中。
18.根据权利要求16所述的方法,其中所述游离巯基是在igg分子的重链中。
19.根据权利要求16所述的方法,其中至少一个游离巯基在igg分子的轻链中,并且至少一个游离巯基在igg分子的重链中。
20.一种药物组合物,其包含在权利要求15-20中任一项中选择的蛋白质产品。