自胶束化固体分散体中人参皂苷CK含量的测定方法与流程

自胶束化固体分散体中人参皂苷ck含量的测定方法
技术领域
1.本发明属于药物分析技术领域，涉及一种药物成分含量测定的方法，具体来说，涉及自胶束化固体分散体中人参皂苷ck含量的测定方法。


背景技术：

2.人参皂苷化合物k（ginsenoside compound k，人参皂苷ck，ck）于1972年在人参皂苷的土壤细菌水解产物中被发现，并进行结构鉴定，其结构式为：，分子式为c
36h62
o8，分子量为622.87da。人参皂苷ck是原人参二醇如人参皂苷rb1、rb2、rc等在肠道菌群中主要的代谢产物，它能进一步代谢成20（s）ppd。有报道称人参皂苷的抗癌活性和糖基的数目成反比，而ck只有一个葡萄糖基，被认为是人参中最重要的活性物质。人参皂苷ck是人参皂苷的主要代谢产物之一，具有多种药理活性，研究表明人参皂苷ck具有很好的抗细胞突变、抑制肿瘤细胞转移、诱导肿瘤细胞凋亡、逆转肿瘤细胞耐药性和抗肿瘤诱导的血管生成等活性，还可以增强放疗和化疗的效果。除此之外，人参皂苷ck还有具有抗过敏和抗炎活性，并且可以起到神经保护作用，抗糖尿病作用和抗皮肤衰老作用。人参皂苷ck药理作用显著，但几乎不溶于水，ph在5.0-8.0范围内logp在1-3之间，提示ck是偏脂溶性药物，其水中溶解度仅为35.2μg/ml，大鼠口服生物利用度只有4.3%，严重限制了其临床应用。因此，提高人参皂苷ck的水中溶解性，增加口服吸收，进而提高其生物利用度，是人参皂苷ck临床应用中亟待解决的问题。
3.自胶束化固体分散体属于第五代固体分散体，是药物高度分散于固体载体中形成的一种以固体形式存在的分散系统，遇水相可以自组装形成胶束，能够提高难溶性药物的溶出速率和溶解度，延缓或控制药物释放，提高药物的稳定性，提高药物的生物利用度。
4.石家庄以岭药业股份有限公司于2020年7月17日申请了名称为“一种含有人参皂苷ck的制剂组合物及其制备方法”的发明专利，专利中公开了人参皂苷ck的自胶束化固体分散体制剂，但未提供自胶束化固体分散体中人参皂苷ck含量的测定方法。


技术实现要素：

5.本发明的目的是提供一种自胶束化固体分散体中人参皂苷ck含量的测定方法，以弥补现有技术的空白，为人参皂苷ck的自胶束化固体分散体的质量控制提供可靠的手段。
6.为了实现上述目的，发明人提供了以下技术方案。
7.自胶束化固体分散体中人参皂苷ck含量的测定方法，采用高效液相色谱法，操作步骤包括：a. 对照品储备液的配制：取人参皂苷ck对照品，精密称定，置于容量瓶中，用无水乙醇定容，制成浓度为1mg/ml的对照品储备液，备用；b. 对照品溶液的配制：精密量取步骤a所述的对照品储备液适量，置于容量瓶中，加入有机溶剂定容，制成浓度为40μg/ml的对照品溶液，备用；c. 供试品溶液的配制：精密称取人参皂苷ck自胶束化固体分散体样品，置于容量瓶中，加有机溶剂定容，制成供试品溶液，备用；d. 色谱条件：c18色谱柱，流动相为磷酸水：乙腈；e. 测定：分别精密量取对照品溶液、供试品溶液，测定人参皂苷ck的含量。
8.上述测定方法，优选地，采用高效液相色谱法，操作步骤包括：a. 对照品储备液的配制：取人参皂苷ck对照品10mg，精密称定，置于10ml容量瓶中，用无水乙醇溶解并稀释制成浓度为1mg/ml的对照品储备液，备用；b. 对照品溶液的配制：精密量取步骤a所述的对照品储备液适量，置于容量瓶中，加入有机溶剂稀释定容，制成浓度为40μg/ml的对照品溶液，备用；c. 供试品溶液的配制：精密称取人参皂苷ck自胶束化固体分散体样品5-10mg，置于25ml容量瓶中，加5有机溶剂定容，制成供试品溶液，备用；d. 色谱条件：c18色谱柱，流动相为磷酸水：乙腈=50：50，流速为1.3 ml/min，柱温为30℃，检测波长为203nm，进样量为10μl；e. 测定：分别精密量取对照品溶液、供试品溶液测定人参皂苷ck的含量。
9.上述测定方法，步骤b所述有机溶剂优选为50%乙腈。
10.上述测定方法，步骤c所述有机溶剂优选为50%乙腈。
11.上述测定方法，步骤d所述c18色谱柱的规格优选为4.6
×
150mm，5μm。
12.上述测定方法，步骤d所述磷酸水的浓度为0.1%。
13.本发明中所述自胶束化固体分散体是指石家庄以岭药业股份有限公司于2020年7月17日申请的名称为“一种含有人参皂苷ck的制剂组合物及其制备方法”的发明专利中公开的人参皂苷ck的自胶束化固体分散体制剂。
14.经方法学考察证实，本发明提供的人参皂苷ck自胶束化固体分散体含量的测定方法在系统适应性、专属性、线性关系、精密度、准确度、耐用性、稳定性等方面均表现良好，能够作为可靠的检测手段，用于自胶束化固体分散体中人参皂苷ck的含量测定。
附图说明
15.图1 为实施例1中人参皂苷ck含量的液相色谱图。
16.图2为实施例2中空白溶液的高效液相色谱图。
17.图3为实施例2中辅料溶液的高效液相色谱图。
18.图4为实施例2中对照品溶液的高效液相色谱图。
19.图5为实施例2中人参皂苷ck含量的标准曲线图。
具体实施方式
20.下面结合具体实施例对本发明所述内容作进一步详细的说明。
21.实施例1 人参皂苷ck含量的测定（一）试验材料乙腈、甲醇（色谱纯）
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德国默克merke公司人参皂苷ck
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上海源叶生物科技有限公司人参皂苷ck自胶束化固体分散体
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实验室自制milli-q超纯水仪
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默克密理博公司secura 225d-1cn赛多利斯精密分析天平
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赛多利斯科学仪器（北京）有限公司色谱柱（xbridge c18，4.6
×
150mm，5μm）
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waters 公司hplc液相色谱仪2695
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waters 公司（二）人参皂苷ck自胶束化固体分散体的制备精密称取人参皂苷ck100.7mg、soluplus300.1mg置于圆底烧瓶中，加入10ml二氯甲烷使溶解后，采用30℃水浴旋转蒸发除去二氯甲烷；随后将圆底烧瓶置于真空干燥箱25-30℃干燥过夜；将圆底烧瓶中的固体取出，研磨后过180目筛，即得到人参皂苷ck的自胶束化固体分散体。
22.（三）溶液的配制对照品储备液：取人参皂苷ck对照品，精密称定10.00mg，置10ml容量瓶中，用无水乙醇溶解定容，制成浓度为1.00mg/ml的储备液。
23.对照品溶液：精密量取对照品储备液1ml，置于25ml容量瓶中，加50%乙腈稀释定容，制成浓度为40μg /ml的对照品溶液。
24.供试品溶液制备：精密称定人参皂苷ck自胶束化固体分散体5mg，置于25ml容量瓶中，加50%乙腈定容，得到供试品溶液。
25.（四）检测分别精密吸取对照品溶液和供试品溶液各10μl，进样，测定含量。
26.含量测定结果如附图1所示。
27.实施例2 方法学验证发明人对本发明提供的含量测定方法进行了方法学验证。
28.试验材料、仪器、色谱条件及溶液配制方法同实施例1。
29.（一）系统适应性取对照品溶液连续进样6针，计算人参皂苷ck的峰面积（a）的平均值及rsd。
30.由表1中数据可以看出，人参皂苷ck含量峰面积平均值的rsd为0.9%，小于2.0%，说明系统适用性良好。
31.（二）专属性取空白溶液（50%乙腈）、辅料溶液（处方量soluplus）、对照品溶液进行高效液相分析。
32.分别精密量取空白溶液、辅料溶液、对照品溶液进样测定，结果如附图2、3、4所示。由附图4可以看出，人参皂苷ck的保留时间为10.069min，峰形拖尾因子为1.1，与相邻峰分离度r大于1.85，其他峰无干扰，表明该方法专属性良好。
33.（三）线性和范围精密量取人参皂苷ck对照品储备液，配制一系列浓度的对照品溶液（35-280μg/ml），hplc测定含量，记录人参皂苷ck的峰面积（a），以人参皂苷ck的峰面积（a）为y，对人参皂苷ck浓度（c）为x，做线性回归，结果如表2和附图5所示，在35-280μg/ml的范围内人参皂苷ck的回归方程为：y=3191.9x-2726.1，r2=0.9999，线性关系良好。
34.（四）精密度和准确度精密量取6份供试品溶液，进样，测定人参皂苷ck峰面积（a），按外标法计算人参皂苷ck的含量及rsd值， rsd值小于2.0%，说明本发明的测定方法精密度良好。
35.低、中、高三份添加样品溶液的回收率在98%-102%之间，结果如表3所示，说明本发明的测定方法准确度良好。
36.（五）耐用性考察不同流速（
±
0.1ml/min），不同柱温（
±
5℃），不同波长（
±
1nm），不同流动相比例（
±
1%）条件下人参皂苷ck的含量，结果如表4所示，与正常条件下含量的比值在95%-105%之间，说明本发明的测定方法耐用性良好。
37.（六）稳定性考察对照品溶液在4℃放置36h的稳定性，分别2h、4h、6h、8h、10h、12h和36h测定含量，结果如表5所示，不同时间人参皂苷ck的峰面积值与初始峰面积的比值在98-102%之间，说明溶液稳定。