技术特征：
1.一种n
‑
糖肽末端唾液酸α2,6和α2,3连接异构相对定量方法，其特征在于，使用液相分离和离子淌度质谱气相分级技术相结合的方法对完整n
‑
糖肽进行处理，对特定完整n
‑
糖肽离子在特定液相色谱保留时间与特定m/z下进行母离子的选择，并在质谱碰撞池内进行碰撞诱导解离，采用无动态排除的数据依赖性质谱扫描模式进行质谱数据采集，实现对目标母离子的全采集；完成质谱数据采集后，将归属于该完整n
‑
糖肽的末端唾液酸α2,6和α2,3异构体b
3+
碎片的淌度到达时间分布面积进行比较，从而实现不同完整n
‑
糖肽末端唾液酸α2,6和α2,3异构体的相对定量；具体步骤为：（1）将蛋白质样品的酶解富集后的n
‑
完整糖肽进行分离，以降低样本中n
‑
糖肽的复杂程度；（2）将分离后的n
‑
糖肽进行质谱气相分离和质谱检测；所述质谱气相分离具体包括：1）母离子选择：将母离子在特定色谱分级保留时间，根据特定m/z下以
±
2da为窗口进行气相下的母离子的选择；2）质谱采集，针对上述选择的目标完整n
‑
糖肽母离子，以15～50ev碎裂能量进行碎裂，并将碎裂的全部离子再送入离子淌度质谱离子淌度漂移管进行分离分析，其中质谱的采集模式设置为hd
‑
ms/ms模式；最终对离子淌度分离后的碎片离子信号进行质谱数据的采集；（3）完成质谱数据采集后，将归属于同一完整n
‑
糖肽的末端唾液酸α2,6和α2,3异构体b
3+
碎片（[neuacα2
‑
3/α2
‑
6galβ1
‑
4glcnac]+, m/z 657.24）的淌度到达时间分布面积进行比较，得到α2,6和α2,3异构体b
3+
碎片的相对定量比值，从而实现了n
‑
完整糖肽末端唾液酸α2,6和α2,3连接异构的相对定量。2.根据权利要求1所述的n
‑
糖肽末端唾液酸α2,6和α2,3连接异构相对定量方法，其特征在于，步骤（1）中所述将蛋白质样品的酶解富集后的n
‑
完整糖肽进行分离，采用反相液相色谱法、亲水液相色谱法、离子交换液相色谱法、疏水液相色谱法或毛细管电泳法进行分离。3.根据权利要求1所述的n
‑
糖肽末端唾液酸α2,6和α2,3连接异构相对定量方法，其特征在于，步骤（2）中所述质谱检测采用的质谱仪为四极杆质谱仪、离子阱质谱仪、飞行时间质谱仪、离子淌度质谱仪中的一种或多种组合。4.根据权利要求1所述的n
‑
糖肽末端唾液酸α2,6和α2,3连接异构相对定量方法，其特征在于，所述蛋白质样品为不同生理或病理状态下的不同生物体蛋白质样本，包括组织、细胞、不同亚细胞器或体液。
技术总结
本发明属于分析化学技术领域，具体为N
技术研发人员：魏黎明 封晓晓 陆豪杰
受保护的技术使用者：复旦大学
技术研发日：2021.06.02
技术公布日：2021/10/8