技术特征：
1.一种微量蛋白定量检测试剂，其特征在于，包括亲和分子a标记的dna片段和亲和分子b；所述亲和分子b可标记待测蛋白，所述亲和分子a和亲和分子b相互间可特异性结合；所述dna片段序列如seq id no.1所示。2.如权利要求1所述的检测试剂，其特征在于，所述亲和分子a为亲和素，亲和分子b为生物素。3.如权利要求1所述的检测试剂，其特征在于，所述亲和分子a为生物素，亲和分子b为亲和素。4.如权利要求1～3任一项所述的检测试剂，其特征在于，它还包括磁珠连接的待测蛋白抗体的二抗。5.一种定量检测微量蛋白的方法，其特征在于：包括如下步骤：(1).向待测样品中加入磁珠连接的待测蛋白抗体的二抗，得到磁珠-抗体-抗原复合物。(2).使用磁分离器将磁珠-抗体-抗原复合物分离出来(3).加入过量亲和分子b反应，得到磁珠-抗体-抗原-亲和分子b复合物；(4).加入过量的亲和分子a标记的dna片段反应，得到磁珠-抗体-抗原-亲和分子b-亲和分子a-dna复合物；(5).使用磁分离器将磁珠-抗体-抗原-亲和分子b-亲和分子a-dna复合物分离出来；(6).使用定量pcr技术检测dna片段，以dna片段的相对量计算得到待测蛋白质的量；所述亲和分子a和亲和分子b相互间特异性结合；所述dna片段序列如seq id no.1所示。6.如权利要求5所述的方法，其特征在于，所述亲和分子a为亲和素，亲和分子b为生物素；或所述亲和分子a为生物素，亲和分子b为亲和素。7.如权利要求5所述的方法，其特征在于，步骤(1)、步骤(3)和步骤(4)所述反应在反应液中进行，所述反应液为含有1％bsa的pbs。8.如权利要求5所述的方法，其特征在于，所述步骤(1)所述的磁珠-抗体-抗原复合物和步骤(4)所述的磁珠-抗体-抗原-亲和分子b-亲和分子a-dna复合物被固定化试剂固定，所述固定化试剂的用量为反应液体积的0.5～1.5倍，优选为1倍；所述固定化试剂为pbs配制的0.5-5(v/v)％多聚甲醛溶液；或pbs配制的3-6(v/v)％甲醛溶液；或pbs配制的1-3(v/v)％戊二醛溶液；优选地，所述pbs配制的多聚甲醛溶液浓度为1(v/v)％；所述pbs配制的甲醛溶液浓度为4(v/v)％；所述pbs配制的戊二醛溶液浓度为1.2(v/v)％。9.如权利要求5所述的方法，其特征在于，步骤(1)还包括使用pbs溶液洗涤除去过量磁珠-抗体的步骤；步骤(5)还包括使用洗涤液洗涤除去未形成复合物的亲和分子b和亲和分子a标记的dna片段的步骤，所述洗涤液为含有1mm edta的pbs溶液。10.如权利要求5所述的方法，其特征在于，所述定量pcr技术为实时荧光定量pcr反应，所述实时荧光定量pcr反应体系包含0.2-0.4umol/l上游引物gagcccactggacttct，最优选0.25umol/l，0.2-0.4umol/l下游引物gtgatgttgcgggtctg，最优选0.25umol/l，0.2-0.4umol/l taqman探针ggagggctgtgtcaag,最优选0.25umol/l，taq dna聚合酶1-3u/50ul，最优选1.5u/50ul,0.2-0.5mmol/l dntps最优选0.25mmol/l、及pcr反应缓冲液。
11.如权利要求10所述的方法，其特征在于，所述pcr反应缓冲液包括50～75mmol/l kcl、10～15mmol/l tris.hcl ph8.3、0.01～0.015％明胶；优选地，所述pcr反应缓冲液包括50mmol/l kcl、10mmol/l tris.hcl ph8.3、0.01％明胶。12.如权利要求10或11所述的方法，其特征在于，所述实时荧光定量pcr反应，其反应条件为94-96℃2min，94℃10s
→
50℃10s
→
60℃20s，45循环,在60℃20s时检测并记录荧光，读取各个pcr反应的ct值并按照如下公式计算得到待测蛋白的含量：ct＝-1/lg(1+e
x
)*lgx0+lgn/lg(1+e
x
)；x0＝y0；所述x0为初始模板量，e
x
为扩增效率,n为荧光扩增信号达到阈值强度时扩增产物的量,y0为待测蛋白质的量。
技术总结
本发明提供一种微量蛋白定量检测试剂，包括亲和分子A标记的DNA片段和亲和分子B；所述亲和分子B可标记待测蛋白，所述亲和分子A和亲和分子B相互间可特异性结合；所述DNA片段序列如SEQ ID NO.1所示。本发明还提供了一种定量检测微量蛋白的方法，利用亲和分子A标记待测蛋白质，亲和分子B标记人工合成的DNA片段，利用亲和分子A和亲和分子B相互间可特异性结合的特点，用定量PCR技术检测DNA片段，通过DNA的相对量反映待测蛋白质的量。该方法操作快速简便，而且能够灵敏和精确地定量检测微量蛋白。而且能够灵敏和精确地定量检测微量蛋白。
技术研发人员：张晓 盛子依 曹峻峰 夏庆杰 杨星雨
受保护的技术使用者：成都医学院
技术研发日：2021.06.30
技术公布日：2022/12/29