一种气相色谱法测定盐酸阿考替胺原料药中胺残留的方法与流程

1.本发明涉及药物分析检测技术领域，尤其是涉及一种气相色谱法测定盐酸阿考替胺原料药中胺残留的方法。


背景技术：

2.盐酸阿考替胺(acotiamide hydrochloride hydrate)，化学名称为n
‑
[2
‑
(双异丙基氨基)乙基]
‑2‑
[(2
‑
羟基
‑
4,5
‑
二甲氧基苯甲酰)氨基]
‑4‑
噻唑甲酰胺盐酸盐三水合物，属于胃肠动力药。
[0003]
阿考替胺是全球第一个fd(功能性消化不良)治疗用药，临床试验验证该药对于按照功能性胃肠道疾病诊断标准
‑
romeiii诊断为fd的患者具有良好的治疗有效性，有临床应用和市场开发价值。
[0004]
盐酸阿考替胺结构式如下：
[0005][0006]
盐酸阿考替胺可采用n,n
‑
二异丙基乙二胺作为反应物料、二正丁胺作为试剂进行合成，但是在对成品质量进行检测时，发现盐酸阿考替胺中未控制二正丁胺与n,n
‑
二异丙基乙二胺的残留。2015年版中国药典四部通则0861残留溶剂测定法中附表1并未对二正丁胺与n,n
‑
二异丙基乙二胺进行限度控制，也无相应测定方法指导。在不同条件下，二正丁胺与n,n
‑
二异丙基乙二胺中的氨基会不同程度的与盐酸阿考替胺中的盐酸发生反应，使得样品检测极其困难。
[0007]
由于二正丁胺与n,n
‑
二异丙基乙二胺无紫外吸收，不适合用液相来检测，因此现有技术以开发气相色谱法为主要检测手段。例如，中国专利申请cn201610167810.5公开了一种利用气相色谱仪测定阿考替胺原料药中n,n
‑
二异丙基乙二胺残留量的方法。所述方法采用db
‑
1毛细管色谱柱进行测定，该色谱柱为一种非极性毛细管色谱柱，对两种及以上极性物质进行分离时分离效果不佳。技术人员研究发现cn201610167810.5所提供的方法只能用于控制n,n
‑
二异丙基乙二胺的残留量，对于产品中含有二正丁胺的残溶无法控制，这将直接影响盐酸阿考替胺的产品质量，增加临床用药的风险。


技术实现要素：

[0008]
有鉴于此，本发明要解决的技术问题在于提供一种气相色谱法测定盐酸阿考替胺原料药中胺残留的方法，本发明方法稳定可靠，检测限低。
[0009]
本发明提供了一种气相色谱法测定盐酸阿考替胺原料药中胺残留的方法，包括：
[0010]
a)将阿考替胺原料药采用溶剂溶解，加入强碱溶液，得到待测液；
[0011]
将二正丁胺采用溶剂溶解，加入强碱溶液，得到二正丁胺对照品溶液；
[0012]
将n,n
‑
二异丙基乙二胺采用溶剂溶解，加入强碱溶液，得到n,n
‑
二异丙基乙二胺对照品溶液；
[0013]
b)将待测液、二正丁胺对照品溶液和n,n
‑
二异丙基乙二胺对照品溶液采用顶空
‑
气相色谱法进行测定，外标法定量；
[0014]
优选的，方法的检测条件为：色谱柱：聚乙二醇为固体相的毛细管色谱柱；
[0015]
检测器：fid；进样方式：顶空进样；载气为氮气；
[0016]
程序升温：起始温度40℃～60℃，维持4～10min，然后以15～30℃/min的速率升温至200℃，维持10～30min。
[0017]
优选的，步骤a)所述溶剂为二甲基亚砜。
[0018]
优选的，步骤a)所述强碱为氢氧化钠；所述强碱溶液的浓度为0.5～1.0mol/l。
[0019]
优选的，步骤b)所述色谱柱为cp
‑
wax或cp7422；色谱柱规格为：25m
×
0.320mm
×
1.2μm。
[0020]
优选的，步骤b)所述程序升温具体为：起始温度60℃，维持5min，然后以20℃/min的速率升温至200℃，维持15min。
[0021]
优选的，步骤b)所述
[0022]
检测器温度为280～320℃；
[0023]
进样口温度为230～260℃；
[0024]
顶空瓶平衡温度为90℃；
[0025]
平衡时间为30min。
[0026]
优选的，所述载气流速为1.4～1.6ml/min；
[0027]
进样口温度为250℃；检测器温度为300℃。
[0028]
优选的，二正丁胺在浓度0.0967μg/ml～201.48μg/ml范围内与峰面积之间线性关系良好，线性方程为y＝0.4569x+0.152，相关系数为r＝1；n,n
‑
二异丙基乙二胺在浓度2.504μg/ml～200.32μg/ml范围内与峰面积之间线性关系良好，线性方程为y＝0.0325x
‑
0.1532，相关系数为r＝0.9994。
[0029]
优选的，二正丁胺定量限浓度为0.096μg/ml，定量限为0.00048％；二异丙基乙二胺定量限浓度为2.508μg/ml，定量限为0.013％。
[0030]
优选的，所述顶空进样为：分流进样，分流比为10～20:1。
[0031]
与现有技术相比，本发明提供了一种气相色谱法测定盐酸阿考替胺原料药中胺残留的方法，包括：a)将阿考替胺原料药采用溶剂溶解，加入强碱溶液，得到待测液；将二正丁胺采用溶剂溶解，加入强碱溶液，得到二正丁胺对照品溶液；将n,n
‑
二异丙基乙二胺采用溶剂溶解，加入强碱溶液，得到n,n
‑
二异丙基乙二胺对照品溶液；b)将待测液、二正丁胺对照品溶液和n,n
‑
二异丙基乙二胺对照品溶液采用顶空
‑
气相色谱法进行测定，外标法定量。本发明上述检测方法能够快速、准确的测定盐酸阿考替胺中二正丁胺与n,n
‑
二异丙基乙二胺的含量，同时检测出两种胺类物质，可以控制盐酸阿考替胺原料药中的胺残留，为保证盐酸阿考替胺成品质量提供了质量标准的检测方法。本发明所提供测定盐酸阿考替胺原料药中
胺残留的方法通过实验显示出系统适用性好、专属性强、精密度和准确度高、检测能力强，是一种高效灵敏且准确的测定方法。
附图说明
[0032]
图1为本发明实施例9中产品批号为201101
‑
1的样品检测结果图谱；
[0033]
图2为本发明实施例9中产品批号为201101
‑
2的样品检测结果图谱；
[0034]
图3为本发明实施例9中产品批号为201101
‑
3的样品检测结果图谱；
[0035]
图4为使用专利申请cn201610167810.5的方法检测的对照品色谱图。
具体实施方式
[0036]
本发明提供了一种气相色谱法测定盐酸阿考替胺原料药中胺残留的方法，本领域技术人员可以借鉴本文内容，适当改进工艺参数实现。特别需要指出的是，所有类似的替换和改动对本领域技术人员来说是显而易见的，它们都属于本发明保护的范围。本发明的方法及应用已经通过较佳实施例进行了描述，相关人员明显能在不脱离本发明内容、精神和范围内对本文的方法和应用进行改动或适当变更与组合，来实现和应用本发明技术。
[0037]
本发明提供了一种气相色谱法测定盐酸阿考替胺原料药中胺残留的方法，包括：
[0038]
a)将阿考替胺原料药采用溶剂溶解，加入强碱溶液，得到待测液；
[0039]
将二正丁胺采用溶剂溶解，加入强碱溶液，得到二正丁胺对照品溶液；
[0040]
将n,n
‑
二异丙基乙二胺采用溶剂溶解，加入强碱溶液，得到n,n
‑
二异丙基乙二胺对照品溶液；
[0041]
b)将待测液、二正丁胺对照品溶液和n,n
‑
二异丙基乙二胺对照品溶液采用顶空
‑
气相色谱法进行测定，外标法定量；
[0042]
所述色谱条件为：色谱柱：聚乙二醇为固体相的毛细管色谱柱；
[0043]
检测器：fid；进样方式：顶空进样；载气为氮气；
[0044]
程序升温：起始温度40℃～60℃，维持4～10min，然后以15～30℃/min的速率升温至200℃，维持10～30min。
[0045]
本发明提供的气相色谱法测定盐酸阿考替胺原料药中胺残留的方法首先将阿考替胺原料药采用溶剂溶解。
[0046]
本发明所述溶剂为二甲基亚砜；本发明所述阿考替胺原料药与溶剂的质量
‑
体积比为0.1g：3ml；
[0047]
本发明优选溶解置于顶空瓶中。
[0048]
溶解后，加入强碱溶液，得到待测液。
[0049]
在本发明其中一种优选实施方式中，所述强碱优选为氢氧化钠；所述强碱溶液的浓度优选为0.5～1.0mol/l。
[0050]
本发明人优选采用强碱进行处理，结合特定的浓度，使得检测结果更加准确，可靠。
[0051]
将二正丁胺采用溶剂溶解，加入强碱溶液，得到二正丁胺对照品溶液；
[0052]
本发明优选采用如下方法制备：
[0053]
取二正丁胺，置量瓶中，加二甲基亚砜溶解并稀释至刻度，摇匀，作为二正丁胺储
备液；
[0054]
将n,n
‑
二异丙基乙二胺采用溶剂溶解，加入强碱溶液，得到n,n
‑
二异丙基乙二胺对照品溶液；
[0055]
本发明优选采用如下方法制备：
[0056]
取n,n
‑
二异丙基乙二胺，置量瓶中，加二甲基亚砜溶解并稀释至刻度，摇匀，作为n,n
‑
二异丙基乙二胺储备液。
[0057]
精密量取二正丁胺储备液、n,n
‑
二异丙基乙二胺储备液置量瓶中，加二甲基亚砜稀释至刻度，摇匀，得到稀释液；取此溶液，置顶空瓶中，加二甲基亚砜，加氢氧化钠溶液，密封，摇匀，即得。
[0058]
本发明对于所述稀释倍数不进行限定，符合本发明的检测浓度范围即可。
[0059]
本发明还包括制备空白溶液，空白溶液的制备：取二甲基亚砜，加氢氧化钠溶液，置顶空瓶中，密封，摇匀，即得。
[0060]
将待测液、二正丁胺对照品溶液和n,n
‑
二异丙基乙二胺对照品溶液采用顶空
‑
气相色谱法进行测定。
[0061]
本发明采用空白溶液，对照品和待测液进行气相色谱的测定，使得检测结果更加准确。
[0062]
本发明对于所述检测仪器不进行限定，可以为agilent 7890a。
[0063]
本发明所述色谱条件具体为：
[0064]
色谱柱：聚乙二醇为固体相的毛细管色谱柱。
[0065]
在本发明其中一部分优选实施方式中，所述色谱柱为cp
‑
wax或cp7422；色谱柱规格为：25m
×
0.320mm
×
1.2μm。
[0066]
本发明人发现，只有上述色谱柱才能解决本发明检测两种胺残留的技术问题。
[0067]
检测器：fid；进样方式：顶空进样；本发明所述顶空进样为：分流进样，分流比为10～20:1。
[0068]
载气为氮气；所述载气流速优选为1.4～1.6ml/min。
[0069]
检测器温度优选为280～320℃；更优选为290～310℃；最优选为300℃。
[0070]
进样口温度优选为230～260℃；更优选为240～250℃。
[0071]
顶空瓶平衡温度为90℃。
[0072]
平衡时间为30min。
[0073]
在本发明其中一部分优选实施方式中，
[0074]
程序升温：起始温度40℃～60℃，维持4～10min，然后以15～30℃/min的速率升温至200℃，维持10～30min。
[0075]
在本发明其中一部分优选实施方式中，
[0076]
所述程序升温具体为：起始温度60℃，维持5min，然后以20℃/min的速率升温至200℃，维持15min。
[0077]
本发明通过上述程序升温的控制，使得分离度均大于1.5，分离度高。
[0078]
在本发明的实施方案中，按外标法以峰面积计算，合格产品中的n,n
‑
二异丙基乙二胺、二正丁胺含量均不得过0.5％。
[0079]
本发明，二正丁胺在浓度0.0967μg/ml～201.48μg/ml范围内与峰面积之间线性关
系良好，线性方程为y＝0.4569x+0.152，相关系数为r＝1；n,n
‑
二异丙基乙二胺在浓度2.504μg/ml～200.32μg/ml范围内与峰面积之间线性关系良好，线性方程为y＝0.0325x
‑
0.1532，相关系数为r＝0.9994。
[0080]
本发明的方法线性范围大，线性结果良好。
[0081]
本发明二正丁胺定量限浓度为0.096μg/ml，定量限为0.00048％；二异丙基乙二胺定量限浓度为2.508μg/ml，定量限为0.013％。
[0082]
本发明二正丁胺检测限浓度为0.032μg/ml，检测限为0.00016％。n,n
‑
二异丙基乙二胺检测限浓度为0.5005μg/ml，定量限为0.0025％。
[0083]
本发明检测限和定量限低，可以检测更低含量的胺残留，有益于产品质量的提高。
[0084]
本发明可以同时检测两种胺类物质，成功地控制了盐酸阿考替胺原料药中胺残留，为保证盐酸阿考替胺的成品质量提供了有效的检测方法。
[0085]
本发明可以同时检测n,n
‑
二甲基甲酰胺，三乙胺，nn二甲基乙酰胺，异丙醇，乙醇，二氯甲烷，甲苯，二氯甲烷，二正丁胺，nn
‑
二异丙基乙二胺，dmso的分离，相对于现有技术检测范围更广。
[0086]
本发明提供了一种气相色谱法测定盐酸阿考替胺原料药中胺残留的方法，包括：a)将阿考替胺原料药采用溶剂溶解，加入强碱溶液，得到待测液；将二正丁胺采用溶剂溶解，加入强碱溶液，得到二正丁胺对照品溶液；将n,n
‑
二异丙基乙二胺采用溶剂溶解，加入强碱溶液，得到n,n
‑
二异丙基乙二胺对照品溶液；b)将待测液、二正丁胺对照品溶液和n,n
‑
二异丙基乙二胺对照品溶液采用顶空
‑
气相色谱法进行测定，外标法定量；所述色谱条件为：色谱柱：聚乙二醇为固体相的毛细管色谱柱；检测器：fid；进样方式：顶空进样；载气为氮气；程序升温：起始温度40℃～60℃，维持4～10min，然后以15～30℃/min的速率升温至200℃，维持10～30min。本发明上述检测方法能够快速、准确的测定盐酸阿考替胺中二正丁胺与n,n
‑
二异丙基乙二胺的含量，同时检测出两种胺类物质，可以控制盐酸阿考替胺原料药中的胺残留，为保证盐酸阿考替胺成品质量提供了质量标准的检测方法。本发明所提供测定盐酸阿考替胺原料药中胺残留的方法通过实验显示出系统适用性好、专属性强、精密度和准确度高、检测能力强，是一种高效灵敏且准确的测定方法。
[0087]
为了进一步说明本发明，以下结合实施例对本发明提供的一种气相色谱法测定盐酸阿考替胺原料药中胺残留的方法进行详细描述。
[0088]
下面所描述的实施例，除非其他方面表明所有的温度定为摄氏度。气相色谱仪采用agilent 7890a，电子天平采用xpe204或ml204。实施例中未注明具体技术或条件的，按照本领域内的文献所描述的技术或条件或者按照产品说明书进行。试剂从aldrich、arco、alfa、merk、scharlau、阿拉丁、西陇科学等公司购买得到。
[0089]
实施例1本发明方法的系统适用性
[0090]
(1)色谱条件
[0091]
色谱仪型号：agilent gc或相当；
[0092]
检测器：fid；
[0093]
色谱柱：聚乙二醇为固体相的毛细管色谱柱(cp
‑
wax，25m
×
0.320mm
×
1.2μm)；
[0094]
升温程序：起始温度60℃，维持5分钟，然后以20℃/min的速率升温至200℃，维持15分钟；
[0095]
检测器温度：300℃；
[0096]
进样口温度：250℃；
[0097]
顶空瓶平衡温度：90℃；
[0098]
进样方式：顶空。
[0099]
(2)系统适用性溶液配制
[0100]
二正丁胺储备溶液配制：取二正丁胺503.7mg，置50ml量瓶中，加二甲基亚砜溶解并稀释至刻度，摇匀，作为二正丁胺储备液；
[0101]
二正丁胺对照品储备溶液配制：精密量取二正丁胺储备液1ml，置20ml量瓶中，加二甲基亚砜稀释至刻度，摇匀，作为对照品储备液；
[0102]
n,n
‑
二异丙基乙二胺储备溶液配制：取n,n
‑
二异丙基乙二胺505.2mg，置50ml量瓶中，加二甲基亚砜溶解并稀释至刻度，摇匀，作为n,n
‑
二异丙基乙二胺储备液；
[0103]
n,n
‑
二异丙基乙二胺对照品储备溶液配制：精密量取n,n
‑
二异丙基乙二胺储备液1ml，置20ml量瓶中，加二甲基亚砜稀释至刻度，摇匀，作为对照品储备液。
[0104]
(3)实验操作和结果
[0105]
取二甲基亚砜2ml，置顶空瓶中，加0.5mol/l氢氧化钠溶液2ml，混匀，冷却至室温，取上述对照品储备溶液各1ml，密封，摇匀，即得；平行制备6份，连续进样6针，测定结果见下表。
[0106]
表1：系统适用性检测结果
[0107][0108]
从表1可以看出，二正丁胺与相邻组分间分离度均大于1.5，峰面积rsd为0.5％，n,n
‑
二异丙基乙二胺与相邻组分间分离度均大于1.5，峰面积rsd为6.7％，小于15.0％，说明本发明方法的系统适用性良好。
[0109]
实施例2本发明方法的专属性验证
[0110]
(1)色谱条件
[0111]
同实施例1。
[0112]
(2)实验操作和结果
[0113]
空白溶液的制备：取二甲基亚砜3ml，加0.5mol/l氢氧化钠溶液2ml，置顶空瓶中，密封，摇匀，即得。
[0114]
二正丁胺峰定位溶液：取二正丁胺约501.7mg，置50ml量瓶中，加二甲基亚砜溶解并稀释至刻度，摇匀，作为二正丁胺储备液；取1ml，置20ml量瓶中，加二甲基亚砜稀释至刻度，摇匀，取二甲基亚砜2ml，置顶空瓶中，加0.5mol/l氢氧化钠溶液2ml，混匀，冷却至室温，取上述溶液1ml，密封，摇匀，即得。
[0115]
n,n
‑
二异丙基乙二胺峰定位溶液：取n,n
‑
二异丙基乙二胺约500.8mg，置50ml量瓶中，加二甲基亚砜溶解并稀释至刻度，摇匀，作为n,n
‑
二异丙基乙二胺储备液；取1ml，置20ml量瓶中，加二甲基亚砜稀释至刻度，摇匀，取二甲基亚砜2ml，置顶空瓶中，加0.5mol/l氢氧化钠溶液2ml，混匀，冷却至室温，取上述溶液1ml，密封，摇匀，即得。
[0116]
乙醇峰定位溶液：取乙醇约500.9mg，置50ml量瓶中，加二甲基亚砜溶解并稀释至刻度，摇匀，作为乙醇储备液；取1ml置20ml量瓶中，加二甲基亚砜稀释至刻度，摇匀，取二甲基亚砜2ml，置顶空瓶中，加0.5mol/l氢氧化钠溶液2ml，混匀，冷却至室温，取上述溶液1ml，密封，摇匀，即得。
[0117]
异丙醇峰定位溶液：取异丙醇约502.9mg，置50ml量瓶中，加二甲基亚砜溶解并稀释至刻度，摇匀，作为异丙醇储备液；取1ml置20ml量瓶中，加二甲基亚砜稀释至刻度，摇匀，取二甲基亚砜2ml，置顶空瓶中，加0.5mol/l氢氧化钠溶液2ml，混匀，冷却至室温，取上述溶液1ml，密封，摇匀，即得。
[0118]
三乙胺峰定位溶液：取三乙胺约104.2mg，置50ml量瓶中，加二甲基亚砜溶解并稀释至刻度，摇匀，作为三乙胺储备液；取1ml置20ml量瓶中，加二甲基亚砜稀释至刻度，摇匀，取二甲基亚砜2ml，置顶空瓶中，加0.5mol/l氢氧化钠溶液2ml，混匀，冷却至室温，取上述溶液1ml，密封，摇匀，即得。
[0119]
乙酸峰定位溶液：取乙酸约501.9mg，置50ml量瓶中，加二甲基亚砜溶解并稀释至刻度，摇匀，作为乙酸储备液；取1ml置20ml量瓶中，加二甲基亚砜稀释至刻度，摇匀，取二甲基亚砜2ml，置顶空瓶中，加0.5mol/l氢氧化钠溶液2ml，混匀，冷却至室温，取上述溶液1ml，密封，摇匀，即得。
[0120]
二氯甲烷峰定位：取二氯甲烷约63.0mg，置50ml量瓶中，加二甲基亚砜溶解并稀释至刻度，摇匀，作为二氯甲烷储备液；取1ml置20ml量瓶中，加二甲基亚砜稀释至刻度，摇匀，取二甲基亚砜2ml，置顶空瓶中，加0.5mol/l氢氧化钠溶液2ml，混匀，冷却至室温，取上述溶液1ml，密封，摇匀，即得。
[0121]
甲苯峰定位溶液：取甲苯约94.1mg，置50ml量瓶中，加二甲基亚砜溶解并稀释至刻度，摇匀，作为甲苯储备液；取1ml置20ml量瓶中，加二甲基亚砜稀释至刻度，摇匀，取二甲基亚砜2ml，置顶空瓶中，加0.5mol/l氢氧化钠溶液2ml，混匀，冷却至室温，取上述溶液1ml，密封，摇匀，即得。
[0122]
n,n
‑
二甲基甲酰胺峰定位溶液：取n,n
‑
二甲基甲酰胺约88.4mg，置50ml量瓶中，加二甲基亚砜溶解并稀释至刻度，摇匀，作为n,n
‑
二甲基甲酰胺储备液；取二甲基亚砜2ml，置顶空瓶中，加0.5mol/l氢氧化钠溶液2ml，混匀，冷却至室温，取上述溶液1ml，密封，摇匀，即得。
[0123]
n,n
‑
二甲基乙酰胺峰定位溶液：取n,n
‑
二甲基乙酰胺约92.9mg，置50ml量瓶中，加二甲基亚砜溶解并稀释至刻度，摇匀，作为n,n
‑
二甲基乙酰胺储备液；取二甲基亚砜2ml，置顶空瓶中，加0.5mol/l氢氧化钠溶液2ml，混匀，冷却至室温，取上述溶液1ml，密封，摇匀，即
得。
[0124]
杂质混合溶液：精密量取二正丁胺储备液、n,n
‑
二异丙基乙二胺储备液、三乙胺、n,n
‑
二甲基甲酰胺、n,n
‑
二甲基乙酰胺、甲苯、乙醇、异丙醇、二氯甲烷、乙酸储备液各1ml，置20ml量瓶中，加二甲基亚砜稀释至刻度，摇匀，作为杂质混合储备液。取二甲基亚砜2ml，置顶空瓶中，加0.5mol/l氢氧化钠溶液2ml，混匀，冷却至室温，取上述溶液1ml，密封，摇匀，即得。
[0125]
专属性溶液的制备：取本品0.1010g，置顶空瓶中，加二甲基亚砜2ml，加0.5mol/l氢氧化钠溶液2ml，混匀，冷却至室温，加杂质混合储备液1ml，密封，摇匀，即得。
[0126]
供试品溶液的制备：取盐酸阿考替胺(自制)适量，置顶空瓶，加二甲基亚砜2ml，加一定浓度的0.5mol/l氢氧化钠溶液2ml，密封即得。
[0127]
取空白溶液、专属性溶液、供试品溶液及杂质定位溶液各进样1针，分别注入气相色谱仪，记录色谱图，检测结果如表2所示。
[0128]
表2：专属性结果
[0129][0130]
从表2可以看出，空白溶剂峰对二正丁胺峰与n,n
‑
二异丙基乙二胺峰无干扰，二正丁胺峰与相邻溶剂峰之间分离度为36.49、n,n
‑
二异丙基乙二胺峰与相邻溶剂峰之间的分离度为36.30(如表2所示)，均大于1.5；专属性溶液中，n,n
‑
二甲基甲酰胺与n,n
‑
二甲基乙酰胺色谱峰重合，乙酸在该色谱条件下未出峰，其他各溶剂峰间分离度均大于1.5，对二正丁胺峰与n,n
‑
二异丙基乙二胺检测无干扰，说明本方法检测盐酸阿考替胺中二正丁胺、n,n
‑
二异丙基乙二胺的专属性良好。
[0131]
实施例3本发明方法的准确度验证
[0132]
(1)色谱条件
[0133]
同实施例1。
[0134]
(2)实验操作和结果
[0135]
80％回收率溶液：精密量取“系统适用性”项下二正丁胺储备液、n,n
‑
二异丙基乙二胺储备液各0.8ml，置20ml量瓶中，加二甲基亚砜稀释至刻度，摇匀，作为80％对照品储备液；取盐酸阿考替胺约0.1g，置顶空瓶中，加二甲基亚砜2ml使溶解，加0.5mol/l氢氧化钠溶液2ml，混匀，冷却至室温，取80％对照品储备液1ml，密封，摇匀，即得。平行配制3份。
[0136]
100％回收率溶液：精密量取二正丁胺储备液、n,n
‑
二异丙基乙二胺储备液各1ml，置20ml量瓶中，加二甲基亚砜稀释至刻度，摇匀，作为100％对照品储备液；取盐酸阿考替胺约0.1g，置顶空瓶中，加二甲基亚砜2ml使溶解，加0.5mol/l氢氧化钠溶液2ml，混匀，冷却至室温，取100％对照品储备液1ml，密封，摇匀，即得。平行配制3份。
[0137]
120％回收率溶液：精密量取二正丁胺储备液、n,n
‑
二异丙基乙二胺储备液各1.2ml，置20ml量瓶中，加二甲基亚砜稀释至刻度，摇匀，作为120％对照品储备液；取盐酸阿考替胺约0.1g，置顶空瓶中，加二甲基亚砜2ml使溶解，加0.5mol/l氢氧化钠溶液2ml，混匀，冷却至室温，取120％对照品储备液1ml，密封，摇匀，即得。平行配制3份。
[0138]
对照品溶液的制备：取二正丁胺约500mg，置50ml量瓶中，加二甲基亚砜溶解并稀释至刻度，摇匀，作为二正丁胺储备液；取n,n
‑
二异丙基乙二胺约500mg，置50ml量瓶中，加二甲基亚砜溶解并稀释至刻度，摇匀，作为n,n
‑
二异丙基乙二胺储备液；精密量取二正丁胺储备液、n,n
‑
二异丙基乙二胺储备液各1ml，置20ml量瓶中，加二甲基亚砜稀释至刻度，摇匀，取此溶液1ml，置顶空瓶中，加二甲基亚砜2ml，加0.5mol/l氢氧化钠溶液2ml，密封，摇匀，即得。
[0139]
供试品溶液的制备：同实施例2。
[0140]
取对照品溶液，供试品溶液，准确度溶液各进样1针，分别注入气相色谱仪，记录色谱图，检测结果如表3和表4所示。
[0141]
表3：二正丁胺回收率结果
[0142]
[0143][0144]
表4：n,n
‑
二异丙基乙二胺回收率结果
[0145][0146]
从表3和表4可以看出，二正丁胺回收率在92％～95％之间，平均回收率为93％，rsd为1.1％，小于15.0％(n＝9)，n,n
‑
二异丙基乙二胺回收率在87％～104％之间，平均回收率为98％，rsd为5.3％，小于15.0％(n＝9)。说明此方法检测检测盐酸阿考替胺中二正丁胺、n,n
‑
二异丙基乙二胺的的回收率良好。
[0147]
实施例4本发明方法的精密度验证
[0148]
(1)色谱条件
[0149]
同实施例1。
[0150]
(2)重复性实验操作和结果
[0151]
对照品溶液：取二甲基亚砜2ml，置顶空瓶中，加0.5mol/l氢氧化钠溶液2ml，混匀，冷却至室温，取系统适用性项下“对照品储备液”1ml，密封，摇匀，即得。
[0152]
供试品溶液：取本品约0.1g，置顶空瓶中，加二甲基亚砜2ml，加0.5mol/l氢氧化钠溶液2ml，混匀，冷却至室温，加系统适用性项下“对照品储备液”1ml，密封，摇匀，即得。平行配制6份。结果见下表。
[0153]
表5：重复性检测结果
[0154][0155]
从表5可以看出，6份供试品溶液中二正丁胺含量平均值为0.46％，rsd为2.0％；n,n二异丙基乙二胺含量平均值为0.53％，rsd为2.9％，均小于15.0％。表明本方法检测盐酸阿考替胺中二正丁胺、n,n
‑
二异丙基乙二胺重复性良好。
[0156]
(3)重现性实验操作和结果
[0157]
称量同一批样品(ak9170702)，分别配制成12份供试品溶液，供试品溶液的制备同实施例2。
[0158]
由不同实验员在不同时间按照重复性实验操作。
[0159]
表6：重复性检测结果
[0160][0161][0162]
从表6可以看出，12份供试品溶液中二正丁胺含量平均值为0.47％，rsd为3.4％；n,n二异丙基乙二胺含量平均值为0.54％，rsd为8.1％，均小于15.0％。表明本方法检测盐酸阿考替胺中二正丁胺、n,n
‑
二异丙基乙二胺重现性良好。
[0163]
表明本发明所述方法检测盐酸阿考替胺中二正丁胺、n,n
‑
二异丙基乙二胺重复性、中间精密度良好。
[0164]
实施例5本发明方法的线性验证
[0165]
(1)色谱条件
[0166]
同实施例1。
[0167]
(2)实验操作和结果
[0168]
空白溶剂：取二甲基亚砜3ml，加0.5mol/l氢氧化钠溶液2ml，置顶空瓶中，密封，摇匀，即得。
[0169]
二正丁胺储备液：取二正丁胺503.7mg，置50ml量瓶中，加二甲基亚砜溶解并稀释至刻度，摇匀，作为二正丁胺储备液。
[0170]
n,n
‑
二异丙基乙二胺储备液：取n,n
‑
二异丙基乙二胺500.8mg，置50ml量瓶中，加二甲基亚砜溶解并稀释至刻度，摇匀，作为n,n
‑
二异丙基乙二胺储备液。
[0171]
取上述储备液按下表配制线性溶液，分别注入气相色谱仪，以浓度为x轴，峰面积为y轴，作线性回归。结果分别为表8和表10所示。
[0172]
表7：二正丁胺线性溶液配制
[0173][0174][0175]
表8：二正丁胺线性结果
[0176][0177]
表9：n,n
‑
二异丙基乙二胺线性溶液配制
[0178][0179]
表10：n,n
‑
二异丙基乙二胺线性结果
[0180][0181][0182]
从表8和表10可以看出，二正丁胺在浓度0.0967μg/ml～201.48μg/ml范围内与峰面积之间线性关系良好，线性方程为y＝0.4569x+0.152，相关系数为r＝1，n,n
‑
二异丙基乙二胺在浓度2.504μg/ml～200.32μg/ml范围内与峰面积之间线性关系良好，线性方程为y＝0.0325x
‑
0.1532，相关系数为r＝0.9994。
[0183]
实施例6本方法方法的定量限验证
[0184]
(1)色谱条件
[0185]
同实施例1。
[0186]
(2)实验操作和结果
[0187]
参考线性溶液中的信噪比，逐级稀释，至信噪比s/n约为10时溶液的浓度即为定量限浓度，此溶液为定量限溶液。
[0188]
连续进样6针，结果如表11所示。
[0189]
表11：定量限结果
[0190][0191]
从表11可以看出，二正丁胺定量限6针信噪比均值为11.8，峰面积rsd为5.1％，小于15.0％，定量限浓度为0.096μg/ml，定量限为0.00048％。n,n
‑
二异丙基乙二胺定量限6针信噪比均值为11.0，峰面积rsd为13.1％，小于15.0％，定量限浓度为2.508μg/ml，定量限为0.013％。
[0192]
实施例7本发明方法的检测限验证
[0193]
(1)色谱条件
[0194]
同实施例1。
[0195]
(2)实验操作和结果
[0196]
取定量限溶液逐级稀释，至信噪比s/n约为3时溶液的浓度即为检测限浓度，此溶液为检测限溶液。连续进样3针，结果如表10所示。
[0197]
表12：检测限结果
[0198][0199]
从表12可以看出，二正丁胺检测限3针信噪比均值为3.7，检测限浓度为0.032μg/ml，检测限为0.00016％。n,n
‑
二异丙基乙二胺检测限3针信噪比均值为3.5，检测限浓度为0.5005μg/ml，定量限为0.0025％。
[0200]
实施例8本发明方法的耐用性验证
[0201]
(1)色谱条件
[0202]
同实施例1。
[0203]
(2)实验操作和结果
[0204]
取实施例3中的供试品溶液和对照品溶液，微调起始柱温、流速等，考察该检测方法的耐用性，结果如表13所示。
[0205]
表13：耐用性结果
[0206][0207][0208]
从表13可以看出，调整色谱条件后，与未改变条件的结果相比，供试品溶液中二正丁胺与相邻溶剂峰分离度均大于1.5，n,n
‑
二异丙基乙二胺与相邻溶剂峰分离度均大于1.5。说明本方法检测盐酸阿考替胺中二正丁胺、n,n
‑
二异丙基乙二胺的耐用性良好。
[0209]
综上所述，通过对盐酸阿考替胺原料药中胺残留的分析方法进行方法学验证，实验结果表明该方法的系统适用性、专属性、精密度、准确度、线性、检测限、定量限、耐用性均符合可接受标准，说明通过该方法对盐酸阿考替胺中二正丁胺、n,n
‑
二异丙基乙二胺的测定可以得到准确、可靠的实验结果，具体总结参见表14。
[0210]
表14：验证的总结表
[0211]
[0212][0213][0214]
实施例9三批样品检测
[0215]
1、色谱条件
[0216]
仪器型号：agilent
‑
gc2
[0217]
色谱柱：cp
‑
wax 25m
×
0.32mm,1.2μm，20190806
‑
gc
‑
01
[0218]
升温程序：起始温度60℃，维持5分钟，然后以20℃/min的速率升温至200℃，维持15分钟。
[0219]
检测器：fid
[0220]
检测器温度：300℃
[0221]
进样口温度：250℃
[0222]
流速：1.5ml/min
[0223]
分流比：15:1
[0224]
进样方式：顶空进样
[0225]
顶空平衡时间：30分钟
[0226]
顶空平衡温度：90℃
[0227]
定量环：150℃
[0228]
传输线：160℃
[0229]
2、溶液配制
[0230]
0.5mol/l氢氧化钠溶液：称取氢氧化钠1.02635g置50ml量瓶中，加水溶解并稀释至刻度，摇匀。
[0231]
空白溶液：精密量取二甲基亚砜3ml，加0.5mol/l氢氧化钠溶液2ml，置顶空瓶中，密封，摇匀。
[0232]
供试品溶液：称取批号为201101
‑
1、201101
‑
2、201101
‑
3样品各约99.7mg置顶空瓶中，加二甲基亚砜3ml使溶解，加0.5mol/l氢氧化钠溶液2ml，密封，摇匀。
[0233]
二正丁胺储备液：称取二正丁胺0.5029g置50ml量瓶中，加二甲基亚砜稀释至刻度，摇匀。
[0234]
n,n
‑
二异丙基乙二胺储备液：称取n,n
‑
二异丙基乙二胺0.5014g置50ml量瓶中，加二甲基亚砜稀释至刻度，摇匀。
[0235]
对照品溶液：精密量取二正丁胺储备液、n,n
‑
二异丙基乙二胺储备液各1ml置20ml量瓶中，加二甲基亚砜稀释至刻度，摇匀。
[0236]
对照品溶液1：精密量取对照品溶液1ml置顶空瓶中，加二甲基亚砜2ml，加0.5mol/l氢氧化钠溶液2ml，密封，摇匀。
[0237]
3、测试
[0238]
取空白溶液、对照品溶液1、供试品溶液各进样一针。
[0239]
4、计算
[0240]
用外标法计算含量
[0241]
5、结果
[0242][0243]
对比例1
[0244]
使用专利申请cn201610167810.5公开的检测方法及条件，进行对照品浓度(混合对照)为100μg/m的测定，检测结果如图4所示。
[0245]
由图4可以看出n,n
‑
二异丙基乙二胺和二正丁胺未出峰。
[0246]
以上所述仅是本发明的优选实施方式，应当指出，对于本技术领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明原理的前提下，还可以做出若干改进和润饰，这些改进和润饰也应视为本发明的保护范围。