技术特征：
1.一种新型冠状病毒抗原和总抗体联合检测试剂盒，其特征在于，由r1磁珠、r2吖啶、r3吖啶和r4样本处理液组成，使得在一个试剂盒中分别测定新冠病毒抗原及抗体两个靶标；所述r1磁珠由抗新冠病毒n蛋白鼠源性单克隆抗体及新冠病毒刺突蛋白s1亚基重组蛋白包被的顺磁微粒以及磁珠稀释液组成；所述r2吖啶为吖啶标记的新冠病毒rbd蛋白；所述r3吖啶为吖啶标记的抗新冠病毒n蛋白鼠源性单克隆抗体；所述r4样本处理液的组成成分为80mm trizma base、50mm trizma hydrochloride、15mm尿素、10mm edta、0.15％tween-20和0.15％proclin-300，所述r4样本处理液的ph为4.5；其中，所述抗新冠病毒n蛋白鼠源性单克隆抗体的氨基酸序列和核苷酸序列分别如seq id no:1和seq id no:2所示；所述新冠病毒刺突蛋白s1亚基重组蛋白的氨基酸序列和核苷酸序列分别如seq id no:3和seq id no:4所示；所述新冠病毒rbd蛋白的氨基酸序列和核苷酸序列分别如seq id no:5和seq id no:6所示。2.根据权利要求1所述的新型冠状病毒抗原和总抗体联合检测试剂盒，其特征在于，所述抗新冠病毒n蛋白鼠源性单克隆抗体来源于小鼠腹水提取或杂交瘤细胞体外培养。3.根据权利要求1所述的新型冠状病毒抗原和总抗体联合检测试剂盒，其特征在于，抗新冠病毒n蛋白鼠源性单克隆抗体及新冠病毒刺突蛋白s1亚基重组蛋白包被的顺磁微粒和磁珠优选浓度均为0.2mg/ml，和/或，所述吖啶的浓度为5ug/ml-25ug/ml，和/或，磁珠稀释液的组成成分为50mm mes、0.15％bsa、0.15％tween-20和0.5％proclin-300，ph为7.0，和/或，吖啶稀释液的组成成分为30mm pbs、0.15％bsa、0.1％g-anti-h igg、0.15％tween-20和0.5％proclin-300，ph为7.0。4.根据权利要求1所述的新型冠状病毒抗原和总抗体联合检测试剂盒，其特征在于，所述样本为受检者的血清、血浆、鼻咽拭子或胸水。5.根据权利要求1所述的新型冠状病毒抗原和总抗体联合检测试剂盒，其特征在于，所述联合检测试剂盒的靶标组合选自以下：抗新冠病毒n蛋白鼠源性单克隆抗体表位74-105aa与抗新冠病毒n蛋白鼠源性单克隆抗体表位gly44-glu174，s1蛋白表位val16-arg685和rbd蛋白表位319-541aa；优选地，所述抗新冠病毒n蛋白鼠源性单克隆抗体表位74-105aa的氨基酸序列和核苷酸序列分别如seq id no:7和seq id no:8所示；所述抗新冠病毒n蛋白鼠源性单克隆抗体表位gly44-glu174的氨基酸序列和核苷酸序列分别如seq id no:9和seq id no:10所示；所述s1蛋白表位val16-arg685的氨基酸序列和核苷酸序列分别如seq id no:11和seq id no:12所示；所述rbd蛋白表位319-541aa的氨基酸序列和核苷酸序列分别如seq id no:13和seq id no:14所示。6.一种新型冠状病毒抗原和总抗体联合检测方法，其特征在于，使用权利要求1至5中
任一项所述的试剂盒，所述检测方法为直接化学发光一步法，在一个试剂盒中分别测定新冠病毒抗原及抗体两个靶标，并分别报告所述抗原及所述抗体两个检测结果。7.根据权利要求6所述的新型冠状病毒抗原和总抗体联合检测方法，其特征在于，包括以下步骤：s1、吸取样本，分别吸取10ul-150ul的样本于第一反应杯和第二反应杯进行试验；s2、在步骤s1中添加磁珠和吖啶：按设定程序自动向第一反应杯中添加50ul r1试剂组分和50ul r2试剂组分，同时向第二反应杯中添加50ul r1试剂组分和50ul r3试剂组分；s3、温度在37℃孵育20分钟，第一反应杯中，样本中的新冠病毒总抗体，如果存在，分别与包被于磁珠上s1蛋白抗原和吖啶标记的rbd蛋白抗原结合形成夹心免疫复合物；第二反应杯中，样本中的新冠病毒n蛋白抗原，如果存在，与包被于磁珠上的抗n蛋白鼠源单克隆抗体和吖啶标记的抗n蛋白鼠源单克隆抗体结合形成夹心免疫复合物；s4、清洗:在磁场作用下，磁颗粒吸附在反应杯壁上，未结合的物质通过洗涤缓冲液冲洗掉；s5、激发和读数：在反应复合物中加入预激发液和激发液，测试结果以相对发光强度(rlu)表示。8.根据权利要求7所述的新型冠状病毒抗原和总抗体联合检测方法，其特征在于：抗新冠病毒n蛋白鼠源性单克隆抗体及新冠病毒刺突蛋白s1亚基重组包被的顺磁微粒和磁珠优选浓度均为0.2mg/ml，和/或，所述吖啶的浓度为5ug/ml-25ug/ml，和/或，磁珠稀释液的组成成分为50mm mes、0.15％bsa、0.15％tween-20和0.5％proclin-300，ph为7.0，和/或，吖啶稀释液的组成成分为30mm pbs、0.15％bsa、0.1％g-anti-h igg、0.15％tween-20和0.5％proclin-300，ph为7.0；所述样本为受检者的血清、血浆、鼻咽拭子或胸水。9.根据权利要求7或权利要求8所述的新型冠状病毒抗原和总抗体联合检测方法，其特征在于：所述洗涤缓冲液包含：0.2％na2hpo4、0.1％nah2po4和0.5％triton x-405，ph7.5；所述预激发液包含：0.5％-1.32％h2o2和1％硝酸,ph 1.10-2.0；所述激发液包含：0.25m-0.35m naoh和1％proclin-300，ph 12.5-13.5。10.权利要求1至5中任一项所述的试剂盒在制备新型冠状病毒检测试剂盒中的用途，其特征在于，优选地，所述新型冠状病毒检测试剂盒用于新型冠状病毒感染的辅助诊断，以及将其作为新型冠状病毒核酸检测疑似病例的补充检测指标或者在疑似病例诊断中与核酸检测协同使用，可提示病程的早晚。
技术总结
本发明涉及一种新型冠状病毒抗原和总抗体联合检测试剂盒，所述试剂盒由R1磁珠、R2吖啶、R3吖啶和R4样本处理液组成，所述R1磁珠由抗新冠病毒N蛋白鼠源性单克隆抗体及新冠病毒刺突蛋白S1亚基重组蛋白包被的顺磁微粒以及磁珠稀释液组成；所述R2吖啶为吖啶标记的新冠病毒RBD(receptor binding domain,RBD)蛋白；R3吖啶为吖啶标记的抗新冠病毒N蛋白鼠源性单克隆抗体。所述试剂盒能够一次性检测受检者血清、血浆中的新型冠状病毒抗原及抗体，并能区分新型冠状病毒抗原和抗体的检测结果。该方法提供了一种新型冠状病毒感染的辅助诊断方法，可以将其作为新型冠状病毒核酸检测疑似病例的补充检测指标或者在疑似病例诊断中与核酸检测协同使用，可提示病程的早晚。可提示病程的早晚。
技术研发人员：尚红 韩晓旭 冯永辉 兰玉勇
受保护的技术使用者：沈阳医陆生物科技有限公司
技术研发日：2021.12.31
技术公布日：2022/4/8