技术特征：
1.一种大柴胡汤hplc特征图谱构建方法，其特征在于：所述大柴胡汤由柴胡、黄芩、芍药、半夏、生姜、枳实、大枣和大黄制成，所述hplc特征图谱构建方法包括以下步骤：(1)将大柴胡汤制成供试品溶液：将大柴胡汤标准煎液定容于1000ml容量瓶中，精密量取1ml，置10ml的容量瓶内，加入一定量有机溶剂，摇匀，超声提取10min，静置，放冷，用有机溶剂定容至刻度线，摇匀，过0.22μm微孔滤膜，取续滤液，即得供试品溶液，同法制备单味药及阴性对照水煎液供试品；(2)制备对照品溶液：精密称取芍药苷对照品11.30mg、柚皮苷对照品11.26mg、橙皮苷11.30mg、新橙皮苷10.90mg、黄芩苷11.55mg、汉黄芩苷5.30mg、柴胡皂苷b25.36mg、黄芩素4.80mg置于10ml容量瓶内，加有机溶剂使溶解并定容摇匀，作为储备液，精密移取上述储备液各1ml，置10ml容量瓶中，有机溶剂定容，摇匀，即得混合对照品溶液；以及，(3)对所述供试品溶液和所述对照品溶液进行hplc检测，得到具有共有特征峰的所述大柴胡汤hplc特征图谱：其中，hplc检测的色谱条件如下所示：采用ods-c
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硅胶色谱柱，以a相乙腈和b相0.05％磷酸水溶液作为流动相，二极管阵列检测器，检测波长为230nm-280nm，流速1.0ml
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min-1
，柱温：25-35℃，进样体积10μl。2.根据权利要求1所述的hplc特征图谱构建方法，其特征在于：所述大柴胡汤标准煎液采用以下方法制备：大柴胡汤遵古煎煮，加水2400ml，40min武火煮至沸腾转文火煎煮110min，获得1200ml煎液，去渣滓后文火煎煮180min，最终得到600ml大柴胡汤标准煎液，所述大柴胡汤由北柴胡110.4g、黄芩41.4g、白芍41.4g、大黄27.6g、生姜69.0g、姜半夏60.0g、麸炒枳实58.3g和大枣55.2g制成。3.根据权利要求1或权利要求2所述的hplc特征图谱构建方法，其特征在于：在步骤(1)和步骤(2)中的有机溶剂为甲醇，且在步骤(2)中的对照品芍药苷、柚皮苷、橙皮苷、新橙皮苷、黄芩苷、汉黄芩苷、柴胡皂苷b2和黄芩素是针对大柴胡汤和解少阳、内泻热结功效的药效标志物(q-markers)。4.根据权利要求1至3中任一项所述的hplc特征图谱构建方法，其特征在于：在步骤(3)中采用的洗脱方式为梯度洗脱，洗脱条件为：0-5min，3％-3％a；5-10min，3％-10％a；10-15min，10％-12％a；15-25min，12％-16％a；25-30min，16％-16％a；30-50min，16％-20％a；50-55min，20％-20％a；55-75min，20％-25％a；75-85min，25％-46％a；85-90min，46％-85％a；90-100min，85％-85％a。5.根据权利要求1至4中任一项所述的hplc特征图谱构建方法，其特征在于：在步骤(3)中，使用的色谱柱为ods-c
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色谱柱，规格为4.6
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250mm，5μm，检测波长为240nm，柱温为30℃。6.一种大柴胡汤指标性活性成分的含量测定方法，其特征在于：所述大柴胡汤由柴胡、黄芩、芍药、半夏、生姜、枳实、大枣和大黄制成，所述含量测定方法包括以下步骤：(1)将大柴胡汤制成供试品溶液：将大柴胡汤标准煎液定容于1000ml容量瓶中，精密量取1ml，置10ml的容量瓶内，加入一定量有机溶剂，摇匀，超声提取10min，静置，放冷，用有机溶剂定容至刻度线，摇匀，过0.22μm微孔滤膜，取续滤液，即得供试品溶液，同法制备单味药及阴性对照水煎液供试品；
(2)制备对照品溶液：精密称取芍药苷对照品11.30mg、柚皮苷对照品11.26mg、橙皮苷11.30mg、新橙皮苷10.90mg、黄芩苷11.55mg、汉黄芩苷5.30mg、柴胡皂苷b25.36mg、黄芩素4.80mg置于10ml容量瓶内，加有机溶剂使溶解并定容摇匀，作为储备液，精密移取上述储备液各1ml，置10ml容量瓶中，有机溶剂定容，摇匀，即得混合对照品溶液；以及，(3)对所述供试品溶液和所述对照品溶液进行hplc检测，以测定大柴胡汤指标性活性成分的含量：其中，hplc检测的色谱条件如下所示：采用ods-c
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硅胶色谱柱，以a相乙腈和b相0.05％磷酸水溶液作为流动相，二极管阵列检测器(dad)，检测波长为230nm-280nm，流速1.0ml
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min-1
，柱温：25-35℃，进样体积10μl。7.根据权利要求6所述的含量测定方法，其特征在于：所述大柴胡汤标准煎液采用以下方法制备：大柴胡汤遵古煎煮，加水2400ml，40min武火煮至沸腾转文火煎煮110min，获得1200ml煎液，去渣滓后文火煎煮180min，最终得到600ml大柴胡汤标准煎液，所述大柴胡汤由北柴胡110.4g、黄芩41.4g、白芍41.4g、大黄27.6g、生姜69g、姜半夏60g、麸炒枳实58.3g和大枣55.2g制成。8.根据权利要求6或权利要求7所述的含量测定方法，其特征在于：在步骤(1)和步骤(2)中的有机溶剂为甲醇，且在步骤(2)中的对照品芍药苷、柚皮苷、橙皮苷、新橙皮苷、黄芩苷、汉黄芩苷、柴胡皂苷b2和黄芩素是针对大柴胡汤和解少阳内泻热结功效的药效标志物(q-markers)。9.根据权利要求6至8中任一项所述的含量测定方法，其特征在于：在步骤(3)中采用的洗脱方式为梯度洗脱，洗脱条件为：0-5min，3％-3％a；5-10min，3％-10％a；10-15min，10％-12％a；15-25min，12％-16％a；25-30min，16％-16％a；30-50min，16％-20％a；50-55min，20％-20％a；55-75min，20％-25％a；75-85min，25％-46％a；85-90min，46％-85％a；90-100min，85％-85％a。10.根据权利要求6至9中任一项所述的含量测定方法，其特征在于：在步骤(3)中，使用的色谱柱为ods-c
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色谱柱，规格为4.6
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250mm，5μm，检测波长如下所示：芍药苷230nm，柴胡皂苷b
2 254nm，柚皮苷、橙皮苷、新橙皮苷、黄芩苷、黄芩素和汉黄芩苷280nm，柱温为30℃。
技术总结
本发明属于中药分析检测领域，具体涉及一种大柴胡汤HPLC特征图谱构建方法，所述HPLC特征图谱构建方法包括以下步骤：将大柴胡汤制成供试品溶液，同法制备单味药及阴性对照水煎液供试品，以针对大柴胡汤和解少阳内泻热结功效的药效标志物(Q-markers)作为对照品，制备对照品溶液，采用高效液相色谱法检测所述供试品溶液和对照品溶液，得到具有共有特征峰的所述大柴胡汤的HPLC特征图谱。此外，本发明还以上述Q-markers作为指标性成分建立了大柴胡汤的含量测定方法。本发明在大柴胡汤质量检测和含量测定过程中首次引入Q-markers概念，为大柴胡汤提供了综合质量评价方法，为大柴胡汤质量内部管控和提升提供了保障，同时也对确保其临床疗效具有非常重要的意义。床疗效具有非常重要的意义。床疗效具有非常重要的意义。
技术研发人员：魏胜利 张燕玲 吕恬仪 刘亚楠 张林 张媛 赵婷 胡秀华 刘凤波
受保护的技术使用者：北京橘井健康科技集团有限公司
技术研发日：2021.12.31
技术公布日：2022/4/12